肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型及其构建方法和构建系统技术方案

一种肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型及其构建方法和构建系统，其中，构建方法包括如下步骤：选取若干份相异人体的已经离体的肾移植术后急性排斥反应受者的外周血标本；分离T淋巴细胞；提取T淋巴细胞中的DNA；以DNA为模版，扩增出TCR的CDR3区，得到CDR3基因文库；采用高通量测序技术，对所述CDR3基因文库进行测序；对测序结果进行分析，构建肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型。通过对外周血中T细胞CDR3进行测序和分析，能够揭示急性排斥受者TCR CDR3的多样性，分析T淋巴细胞亚群中特异CDR3序列及TCR特征谱，评估急性排斥受者的免疫状态；发掘急性排斥发病过程的免疫组库改变，进一步研究肾移植术后急性排斥反应发病机制。

T-cell antigen receptor profile model and its construction method and system for acute rejection recipients after kidney transplantation

A model of T cell antigen receptor profile of recipients with acute rejection after kidney transplantation and its construction method and construction system are described. The construction method includes the following steps: selecting several peripheral blood samples of recipients with acute rejection after kidney transplantation, separating T lymphocyte, extracting DNA from T lymphocyte, and amplifying CDR3 of TCR using DNA as template. The CDR3 gene library was obtained, and the CDR3 gene library was sequenced by high throughput sequencing technology. The results of sequencing were analyzed and the T cell antigen receptor map model of recipients with acute rejection after renal transplantation was constructed. By sequencing and analyzing T cell CDR3 in peripheral blood, we can reveal the diversity of TCR CDR3 in recipients with acute rejection, analyze the specific CDR3 sequence and TCR characteristic spectrum in T lymphocyte subsets, evaluate the immune status of recipients with acute rejection, explore the changes of immunohistology bank in the course of acute rejection, and further study the pathogenesis of acute rejection after renal transplantation.

【技术实现步骤摘要】
肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型及其构建方法和构建系统
本专利技术涉及生物医学
，特别是涉及一种肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型及其构建方法和构建系统。
技术介绍
肾小球滤过率(glomerμLarfiltrationrate，GFR)是反映肾功能的良好指标，它是指单位时间内两肾生成原尿的量，临床上通常将肾脏损伤或肾小球滤过率低于60ml/(min·1.73m2)即为诊断为慢性肾脏病(chronickidneydisease，CKD)。各种CKD持续进展会导致慢性肾衰竭(chronicrenalfailure，CRF)，目前我国CRF发病率大概为每一百万人口中有100人。当各种慢性肾脏疾病发展到终末阶段，患者肾小球滤过率低于15ml/(min·1.73m2)或者需要透析治疗时即为终末期肾病(Endstagerenaldisease，ESRD)。根据流行病学资料显示，美国成年人2011年CKD发病率已经达到15.1％，中国目前的慢性肾脏病发病率为10.8％，随着病情的进展，肾功能逐渐衰竭，CKD患者最终将不可避免的发展成为终末期肾病(Endstag本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：选取若干份相异人体的已经离体的肾移植术后急性排斥反应受者的外周血标本；从外周血标本中分离T淋巴细胞；提取T淋巴细胞中的DNA，得到DNA提取液；以DNA提取液中的DNA为模版，扩增出TCR的CDR3区，得到CDR3基因文库；采用高通量测序技术，对所述CDR3基因文库进行测序；对测序结果进行分析，构建肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型。

【技术特征摘要】
1.一种肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：选取若干份相异人体的已经离体的肾移植术后急性排斥反应受者的外周血标本；从外周血标本中分离T淋巴细胞；提取T淋巴细胞中的DNA，得到DNA提取液；以DNA提取液中的DNA为模版，扩增出TCR的CDR3区，得到CDR3基因文库；采用高通量测序技术，对所述CDR3基因文库进行测序；对测序结果进行分析，构建肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在提取T淋巴细胞中的DNA，得到DNA提取液之后，以及在以DNA提取液中的DNA为模版，扩增出TCR的CDR3区，得到CDR3基因文库之前，所述构建方法还包括：测定DNA提取液中DNA含量及完整性，检测是否合格，是则执行下一步骤。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，采用琼脂糖凝胶电泳法测定DNA提取液的完整性。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，测定所述DNA待测液的完整性包括如下步骤：将DNA提取液与加样缓冲液混合后加入孔板通电进行电泳，在电压为150V的条件下电泳40分钟；取出凝胶，并在紫外灯下检查。5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，从外周血标本中分离T淋巴细胞，具体为：选用淋巴分离液分离外周血标本中的淋巴细胞，得到单个核细胞；选用免疫磁珠间接法从单个核细胞悬浮液中分离T淋巴细胞。6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，提取T淋巴细胞中的DNA，得到DNA提取液，具体为：取5000μL单个核细胞悬浮液放入10ml离心管中；加入20mg/ml蛋白酶K25微升，22℃～26℃条件下保存20分钟，中间颠倒离心管数次使其混合均匀，用200μL结合液CB加入到离心管中，马上颠倒数次使其充分混匀，于70℃～75℃水浴放置15分钟；加入100μL异丙醇，充分混匀，得到混合液；把混合液置于吸附柱当中，再使吸附柱置入收集管中，10000rpm离心0.5分钟，去除废液；加入45...

【专利技术属性】
技术研发人员：眭维国，戴勇，薛雯，欧明林，
申请(专利权)人：中国人民解放军第一八一医院，
类型：发明
国别省市：广西,45