The present invention provides a rapid detection kit for HLA B 5801 genotype based on POCT mode. The kit contains at least fluorescent quantitative PCR primers and probes (SEQ ID NO: 1 4) and cell lysate for detecting HLA B 5801 (rs9263726) genotype, and also includes dNTPs, DNA polymerase and Mg.
【技术实现步骤摘要】
基于POCT模式的HLA-B*5801基因型快速检测试剂盒
本专利技术涉及分子生物学领域，具体地说，涉及一种基于POCT模式的HLA-B*5801基因型快速检测试剂盒。
技术介绍
人类白细胞抗原HLA是一组位于第6号染色体上的基因，是人类最复杂的遗传多态性系统，其多态性分布存在明显的族群特征。别嘌呤醇可抑制尿酸生成，也是最常引起皮肤不良反应的药物之一。据统计，约2％服用别嘌呤醇的患者在临床上出现轻重不一的皮肤过敏反应，虽然不足1％的病例会转变为药物高敏综合征、Stevens-Johnson综合征和中毒性表皮坏死松解症在内的严重皮肤不良反应，但其死亡率高达10％-40％。研究发现，具有遗传特异性的药物毒副作用常与人类白细胞抗原基因密切相关。HLA-B*5801(rs9263726)基因和高血次黄嘌呤浓度均为别嘌呤醇特异性T淋巴细胞反应的影响因素。由于，HLA-B基因是人类基因组中最具多形性的基因，不同的等位基因编码的HLA-B分子可能对别嘌呤醇的亲和力不同，而高亲和力的HLA-B分子更易与别嘌呤醇结合从而引起过敏反应。中国汉族人群属于携带HLA-B*5801等位基因...
【技术保护点】
1.用于检测HLA‑B*5801基因型的荧光定量PCR引物和探针，其特征在于，包括上游引物、下游引物、野生型探针和突变型探针，它们的核苷酸序列分别如下：上游引物：5’‑GTGGGTTACACCTTGGCCC‑3’下游引物：5’‑CAGAAATGGTTTGCTGGCTCC‑3’野生型探针：5’‑F1‑ACTCGTCCCCCCCA‑Q‑3’突变型探针：5’‑F2‑AGGAAACTCATCCCC‑Q‑3’其中，F1和F2为不同的荧光报告基团，Q为荧光淬灭基团。
【技术特征摘要】
1.用于检测HLA-B*5801基因型的荧光定量PCR引物和探针，其特征在于，包括上游引物、下游引物、野生型探针和突变型探针，它们的核苷酸序列分别如下：上游引物：5’-GTGGGTTACACCTTGGCCC-3’下游引物：5’-CAGAAATGGTTTGCTGGCTCC-3’野生型探针：5’-F1-ACTCGTCCCCCCCA-Q-3’突变型探针：5’-F2-AGGAAACTCATCCCC-Q-3’其中，F1和F2为不同的荧光报告基团，Q为荧光淬灭基团。2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针如下：野生型探针：5’-F1-ACTCGTCCCC+CCCA-Q-3’突变型探针：5’-F2-AGG+AAACTCATCCCC-Q-3’其中，+表示LNA修饰碱基。3.含有权利要求1或2所述引物和探针的检测试剂或试剂盒。4.用于荧光定量PCR检测HLA-B*5801基因型的反应体系，其特征在于，所述反应体系包括权利要求1或2所述引物和探针、DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液和细胞裂解液；其中，所述细胞裂解液由十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚组成。5.根据权利要求4所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系中各组分的终浓度为：0.5-1.5×PCR反应缓冲液、DNA聚合酶0.04-0.1U/μL、dNTPs0.1-0.5mM、上游引物0.2-0.7μM、下游引物0.2-0.7μM、野生型探针0.2-0.7μM、突变型探针0.2-0.7μM、Mg2+1-2.5mM和细胞裂解液；其中，所述反应体系中十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚的终浓度为0.000...
【专利技术属性】
技术研发人员：贺庭祯，罗德朋，向霄，熊伟，黎帮勇，钟越，刘黎，董锐，崔奇新，杨园，
申请(专利权)人：重庆京因生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。