【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因检测，具体涉及一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒。
技术介绍
1、替格瑞洛为环戊基三唑嘧啶类药物，是一种直接作用、可逆结合的新型强效口服p2y12受体拮抗剂。本身就具有抑制血小板活性的作用，能有效抑制网织血小板的活性、间接抑制人体细胞上的p2y12受体，其药物活性不受cyp2c19基因型的影响。自2011年以来已被多部欧美指南推荐为acs患者的一线或首选抗血小板药物。
2、临床研究显示，尽管替格瑞洛抗血小板效应强于氯吡格雷，且其疗效不受cyp2c19基因位点影响，但其出血风险更高，严重时还会导致患者毙命。lars wallentin等人研究发现，替格瑞洛用于非冠状动脉搭桥术患者主要出血的发生率显著高于氯吡格雷；plato研究中，尽管替格瑞洛组的主要出血发生率与氯吡格雷组比较差异无统计学意义(11.6％比11.2％,p＝0.43)，但其非cabg相关的主要出血发生率较高(4.5％比3.8％，p＝0.03)。王拥军等人研究发现，在患轻型缺血性卒中或tia，并且携带cyp2c19功能缺失等位基因的中国患者中，替格瑞洛组的出血事件总数超过氯吡格雷组。因此，正确评估替格瑞洛治疗时的出血风险并掌握其处理方法非常重要。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，达到预测替格瑞洛出血副作用强弱的目的。
2、本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案实现的：
3、本专
4、进一步的，三个待测基因位点的引物探针核苷酸序列为
5、cyp4f2-f：seq iq no.1
6、cyp4f2-r：seq iq no.2
7、cyp4f2-p：seq iq no.3
8、prok2-f：seq iq no.4
9、prok2-r：seq iq no.5
10、prok2-p：seq iq no.6
11、fig4-f：seq iq no.7
12、fig4-r：seq iq no.8
13、fig4-p：seq iq no.9。
14、进一步的，反应液还包括一个内参基因的引物探针，内参基因采用β-actin，内参基因β-actin的引物探针核苷酸序列为
15、β-actin-f：seq iq no.10
16、β-actin-r：seq iq no.11
17、β-actin-p：seq iq no.12。
18、进一步的，cyp4f2(rs3093135)和prok2(rs3796224)两个位点探针用fam基团标记，fig4(rs2295837)位点和内参基因β-actin探针用texas red标记。
19、进一步的，分子信标探针cyp4f2-p和prok2-p寡核苷酸dna分子的5′端标记荧光报告基团fam，3′端标记荧光淬灭基团bhq1，分子信标探针fig4-p和β-actin-p寡核苷酸dna分子的5′端标记荧光报告基团texas red，3′端标记荧光淬灭基团bhq2。
20、进一步的，反应液还包括细胞裂解液，细胞裂解液包括：水、终浓度为0.005％(w/v)的十二烷基硫酸钠和终浓度为0.01％(w/v)的聚乙二醇辛基苯基醚。
21、进一步的，反应液还包括buffer、dntp、mgcl2、dna聚合酶、h2o。
22、进一步的，dna聚合酶终浓度为1×、cyp4f2-f终浓度为0.100um、cyp4f2-r终浓度为1.000um、cyp4f2-p终浓度为0.300um、prok2-f终浓度为0.100um、prok2-r终浓度为0.700um、prok2-p终浓度为0.300um、fig4-f终浓度为0.100um、fig4-r终浓度为0.700um、fig4-p终浓度为0.100um、β-actin-f终浓度为0.100um、β-actin-r终浓度为0.700um、β-actin-p终浓度为0.300um、细胞裂解液终浓度为1×。
23、进一步的，试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品，阴性质控品为生理盐水，阳性质控品为cyp4f2(rs3093135)、prok2(rs3796224)、fig4(rs2295837)的野生型质粒、突变型质粒及β-actin目标片段质粒混合液。
24、进一步的，阳性质控品中cyp4f2(rs3093135)、prok2(rs3796224)、fig4(rs2295837)的野生型质粒、突变型质粒及β-actin目标片段质粒浓度均为3×107拷贝/ml。
25、与现有技术相比，本专利技术的有益技术效果在于：
26、1、本专利技术的检测替格瑞洛出血副作用强弱相关的基因多态性检测试剂盒，检测结果准确可靠，为临床用药提供依据，一定程度上避免了部分患者使用替格瑞洛后出血导致的医疗事故的发生。
27、2、本专利技术的检测替格瑞洛出血副作用强弱相关的高通量基因多态性检测试剂盒，采用能稳定分型的引物探针组合，只需一个反应液可检测多个snp位点，满足试剂的检测灵敏度及特异性，同时增加了检测通量，提高了检测便捷性，高效性；降低了试剂的生产成本和检测成本，可在临床上发挥更大的作用。
28、3、本专利技术扩大了模板的使用范围，省略了繁琐耗时的dna提取步骤，操作简单便捷，不仅能测试提纯dna，也能直接测试口腔壁刮取的黏膜脱落细胞等粗样本，整个过程闭管操作，大大的提高了试剂分型正确率和检测速度。
29、上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本专利技术的上述内容和其目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举本专利技术的具体实施方式。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于，包括反应液，反应液包括三个待测基因位点的引物探针，三个待测基因位点分别为CYP4F2(rs3093135)、PROK2(rs3796224)、FIG4(rs2295837)。
2.如权利要求1所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：三个待测基因位点的引物探针核苷酸序列为
3.如权利要求2所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：反应液还包括一个内参基因的引物探针，内参基因采用β-actin，内参基因β-actin的引物探针核苷酸序列为β-actin-F：SEQ IQ NO.10
4.如权利要求3所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：CYP4F2(rs3093135)和PROK2(rs3796224)两个位点探针用FAM基团标记，FIG4(rs2295837)位点和内参基因β-actin探针用Texas red标记。
5.如权利要求4所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征
6.如权利要求5所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：反应液还包括细胞裂解液，细胞裂解液包括：水、终浓度为0.005％(w/v)的十二烷基硫酸钠和终浓度为0.01％(w/v)的聚乙二醇辛基苯基醚。
7.如权利要求6所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：反应液还包括buffer、dNTP、MgCL2、DNA聚合酶、H2O。
8.如权利要求7所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：DNA聚合酶终浓度为1×、CYP4F2-F终浓度为0.100uM、CYP4F2-R终浓度为1.000uM、CYP4F2-P终浓度为0.300uM、PROK2-F终浓度为0.100uM、PROK2-R终浓度为0.700uM、PROK2-P终浓度为0.300uM、FIG4-F终浓度为0.100uM、FIG4-R终浓度为0.700uM、FIG4-P终浓度为0.100uM、β-actin-F终浓度为0.100uM、β-actin-R终浓度为0.700uM、β-actin-P终浓度为0.300uM、细胞裂解液终浓度为1×。
9.如权利要求3所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品，阴性质控品为生理盐水，阳性质控品为CYP4F2(rs3093135)、PROK2(rs3796224)、FIG4(rs2295837)的野生型质粒、突变型质粒及β-actin目标片段质粒混合液。
10.如权利要求9所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：阳性质控品中CYP4F2(rs3093135)、PROK2(rs3796224)、FIG4(rs2295837)的野生型质粒、突变型质粒及β-actin目标片段质粒浓度均为3×107拷贝/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于，包括反应液，反应液包括三个待测基因位点的引物探针，三个待测基因位点分别为cyp4f2(rs3093135)、prok2(rs3796224)、fig4(rs2295837)。
2.如权利要求1所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：三个待测基因位点的引物探针核苷酸序列为
3.如权利要求2所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：反应液还包括一个内参基因的引物探针，内参基因采用β-actin，内参基因β-actin的引物探针核苷酸序列为β-actin-f：seq iq no.10
4.如权利要求3所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：cyp4f2(rs3093135)和prok2(rs3796224)两个位点探针用fam基团标记，fig4(rs2295837)位点和内参基因β-actin探针用texas red标记。
5.如权利要求4所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：分子信标探针cyp4f2-p和prok2-p寡核苷酸dna分子的5′端标记荧光报告基团fam，3′端标记荧光淬灭基团bhq1，分子信标探针fig4-p和β-actin-p寡核苷酸dna分子的5′端标记荧光报告基团texas red，3′端标记荧光淬灭基团bhq2。
6.如权利要求5所述一种用于预测替格瑞洛出血副作用的高通量检测试剂盒，其特征在于：反应液还包括细胞裂解液，细胞裂解液包括：水、终浓度为0.005％(w/v)的十二烷基硫酸钠...
【专利技术属性】
技术研发人员：熊伟，张东涛，贺庭祯，陈雪梅，吴琼瑶，
申请(专利权)人：重庆京因生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。