一种甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条制造技术

本发明专利技术涉及一种甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条，包括底板和依次设在底板上的样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫，结合垫上结合有胶体金标记的抗人降钙素检测抗体和胶体金标记的抗癌胚抗原检测抗体，分析膜上设有人降钙素检测带T1线、癌胚抗原检测带T2线和质控带C线，降钙素检测带T1线、癌胚抗原检测带T2线和质控带C线上分别包被有抗人降钙素捕获抗体、抗癌胚抗原捕获抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体，本发明专利技术还提供了上述甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法。本发明专利技术使用方便快捷，成本低，特异性及灵敏度高。

A colloidal gold immunochromatographic strip for combined detection of medullary thyroid cancer

The present invention relates to a colloidal gold immunochromatographic test strip for combined detection of medullary thyroid cancer, which comprises a bottom plate and a sample pad, a binding pad, an analysis membrane and a water absorbent pad arranged on the bottom plate in turn. The combined pad combines anti-calcitonin detection antibody labeled with colloidal gold and anti-carcinoembryonic antigen detection antibody labeled with colloidal gold. The analysis membrane is equipped with human calcitonin detection line T1 and carcinoembryonic antigen. There are anti-human calcitonin capture antibody, anti-carcinoembryonic antigen capture antibody and goat anti-mouse IgG polyclonal antibody coated on T 2 line and C line respectively. The preparation method of colloidal gold immunochromatographic test strip for combined detection of medullary thyroid cancer is also provided. The invention has the advantages of convenient and fast use, low cost, high specificity and sensitivity.

【技术实现步骤摘要】
一种甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条
本专利技术涉及免疫分析检测领域，更具体的，涉及一种甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条及其制备方法。
技术介绍
甲状腺髓样癌(MTC)来源于甲状腺滤泡旁细胞(又称C细胞)癌变，属于神经内分泌细胞。其主要特征为分泌降钙素及多种物质包括癌胚抗原，并产生淀粉样物质。1959年由Hazand等首先提出作为一个独立的临床病理类型，其发病、诊断和治疗都独具特点。甲状腺髓样癌较少见，约占甲状腺癌的3～10％，属中度恶性。肿瘤侵犯血管，发生远处转移高达15％，常见肝、肺、骨转移，为MTC病人主要死因。MTC可以分为散发性和遗传性两大类，可见于任何年龄，散发性发病以中、老年多见，家族性发病年龄较早，男女发病无明显差异，病史较长，中等程度恶性，淋巴结转移多见且较早出现，转移率高，约10％出现双颈淋巴结转移，初诊颈淋巴结转移率可高达70％，其中1/4患者以此为首诊症状，晚期可经血行转移到肺、肝、骨等远处器官。生存率略低于乳头状癌，预后受多种因素影响，多发性内分泌肿瘤Ⅱ-a型预后最好。C细胞属于神经内分泌细胞，可合成分泌多种生物学活性物质，如降钙素、癌胚抗原、促肾上腺皮质激素、组织胺和血管活性肽等，其中降钙素是髓样癌特异性的肿瘤标志物，可作为甲状腺髓样癌诊断及判断手术疗效和术后复发的指标。降钙素是一类多肽类激素，主要功能是降低血钙，降钙素增高对起源于滤泡旁细胞的甲状腺髓样癌的诊断、判断手术疗效和观察术后复发等有重要意义。降钙素是MTC敏感而特异性的指标，在未经刺激的情况下，血清降钙素明显高表达则提示MTC的存在。降钙素水平与MTC的肿瘤大小和分期呈正相关，降钙素水平翻倍时间反映了病变进展程度，与预后有关。降钙素术后1周左右降至稳定水平，故此可将此时降钙素水平作为一个监测点，术前降钙素水平增高经手术治疗的MTC患者术后1个月血清降钙素水平降至正常说明肿瘤切除彻底，降钙素仍高于正常的患者多有肿瘤残留较易复发，术后血清降钙素水平升高表明肿瘤复发或远处转移。术后随访甲状腺髓样癌患者若发现降钙素持续增高，提示肿瘤残留复发或有远处转移，应行颈部B超、CT、MR等检查，必要时可行PET-CT检查，如能手术治疗者要选择二次手术或者进行放疗或分子靶向药物等治疗，很大程度上减少了患者辗转检查的痛苦，且节省了时间与成本。但临床上也发现有相当一部分MTC患者降钙素水平不高，这部分患者不能用降钙素来判断复发及预后。经过文献查证及反复试验，发现同样由C细胞分泌的癌胚抗原与MTC的病变程度也呈正相关关系。癌胚抗原(CEA)最初发现于结肠癌和胎儿肠组织中，CEA升高常见于大肠癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等，但吸烟、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特异性结肠炎等疾病也会升高，所以CEA不是恶性肿瘤的特异性标志，只在诊断上有辅助价值。超过50％的MTC存在血清CEA的高表达，表达水平与降钙素具有同步性。MTC患者检测到的血清CEA增高一般不会像消化道肿瘤那样明显，CEA升高更容易发生在肿瘤分化比较差大病例中，如果MTC患者的降钙素水平稳定而CEA持续升高往往说明肿瘤去分化，是预后不佳的标志。所以CEA在预后阶段的跟踪监测是十分必要的。由于血清CEA半衰期较降钙素长，约为2-8天，因此MTC术后血清CEA恢复正常的时间将更长。如肿瘤切除彻底，降钙素及CEA在术后3个月一般全部恢复正常，但血清CEA下降的过程较降钙素滞后。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种操作简单、灵敏度高、准确度高、低成本的甲状腺髓样癌降钙素、癌胚抗原联合检测胶体金免疫层析试纸，实现对人降钙素、癌胚抗原两种成分的同时联合检测。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条，包括底板和依次设在所述底板上的样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫，其特征在于，所述结合垫上结合有胶体金标记的抗人降钙素检测抗体和胶体金标记的抗癌胚抗原检测抗体，所述分析膜上设有人降钙素检测带T1线、癌胚抗原检测带T2线和质控带C线，所述降钙素检测带T1线、所述癌胚抗原检测带T2线和所述质控带C线上分别包被有抗人降钙素捕获抗体、抗癌胚抗原捕获抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体，人降钙素和癌胚抗原的氨基酸序列分别为SEQIDNO:1和SEQIDNO:4所示，所述抗人降钙素检测抗体对应具有如SEQIDNO:2～SEQIDNO:3任一所示氨基酸序列的抗原表位，所述抗人降钙素捕获抗体对应SEQIDNO:2～SEQIDNO:3中余下一项所示的氨基酸序列的抗原表位，所述抗癌胚抗原检测抗体对应具有如SEQIDNO:5～SEQIDNO:6任一项所示氨基酸序列的抗原表位，所述抗癌胚抗原捕获抗体对应SEQIDNO:5～SEQIDNO:6中余下一项所示的氨基酸序列的抗原表位。试纸条的检测原理：当待检测样品加样到样品垫上之后，样品中的人降钙素和癌胚抗原分别与结合垫上的胶体金标记的人降钙素检测抗体、癌胚抗原检测抗体形成免疫复合物，由于毛细血管效应，免疫复合物向吸水垫方向泳动，分别与包被在人降钙素检测带T1线和癌胚抗原检测带T2线上的捕获抗体结合，金标人降钙素检测抗体-人降钙素抗原-人降钙素捕获抗体三联体复合物被截留在人降钙素检测带T1线上，金标癌胚抗原检测抗体-癌胚抗原-癌胚抗原捕获抗体三联体复合物被截留在癌胚抗原检测带T2线上，逐渐富集形成较深的紫红色条带，金标标记的人降钙素检测抗体和癌胚抗原抗体与包被在质控线C线上的羊抗鼠IgG多克隆抗体发生免疫反应被截留，逐渐富集在质控线C线上形成较深的紫红色条带，多余的未结合物质继续泳动到吸水垫上，因此在检测带和质控带都出现条带的判断为阳性结果；若血清样品中不含有降钙素和癌胚抗原，金标的检测抗体到达检测带时，不与包被在检测带上的捕获抗体发生免疫反应，因此在检测带处没有出现显色带，而金标标记人降钙素和癌胚抗原检测抗体继续向前泳动与包被于质控线C线处的相应的羊抗鼠IgG多克隆抗体发生特异性的免疫反应而被截留，逐渐富集在质控线C线上形成紫红色条带，因此质控带C线出现条带而检测带T1、T2线为形成条带判断为阴性结果，若质控带与其中一条检测带显色，另一条检测带不显色，则判断结果为阴性。与现有技术相比，本专利技术的优点为：使用方便快速，便于基层或现场使用，所有反应可以在20min内完成；成本低，不需要特殊的仪器设备；应用范围广，可适用多种检测条件；可以进行多项检测，弱阳性样本比较难获得，多项检测可以节省样品，降低成本；对温度无特殊要求，无需冷冻保存，存储运输方便，室温可保存24个月；胶体金本身为红色，不需要加入发色试剂，省却了酶标的致癌性底物及终止液的步骤，对人体无毒害；检测特异性及灵敏度高。本专利技术还提供了一种上述甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：(1)制备抗人降钙素检测抗体、抗人降钙素捕获抗体、抗癌胚抗原检测抗体、抗癌胚抗原捕获抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体，；(2)将抗人降钙素检测抗体和抗癌胚检测抗体用胶体金进行标记，并喷涂在玻璃纤维膜或聚酯膜上，制得结合垫；(3)将抗人降钙素捕获抗体、抗癌胚抗原捕获抗体以及羊抗鼠IgG抗体分别包被在硝酸纤维素膜的降钙素检测带T1线、癌胚抗原检测带T2线以及本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条，包括底板(8)和依次设在所述底板(8)上的样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)和吸水垫(7)，其特征在于，所述结合垫(2)上结合有胶体金标记的抗人降钙素检测抗体和胶体金标记的抗癌胚抗原检测抗体，所述分析膜(3)上设有人降钙素检测带T1线(4)、癌胚抗原检测带T2线(5)和质控带C线(6)，所述降钙素检测带T1线(4)、所述癌胚抗原检测带T2线(5)和所述质控带C线(6)上分别包被有抗人降钙素捕获抗体、抗癌胚抗原捕获抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体，人降钙素和癌胚抗原的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:4所示，所述抗人降钙素检测抗体对应具有如SEQ ID NO:2～SEQ ID NO:3任一所示氨基酸序列的抗原表位，所述抗人降钙素捕获抗体对应SEQ ID NO:2～SEQ ID NO:3中余下一项所示的氨基酸序列的抗原表位，所述抗癌胚抗原检测抗体对应具有如SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:6任一项所示氨基酸序列的抗原表位，所述抗癌胚抗原捕获抗体对应SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:6中余下一项所示的氨基酸序列的抗原表位。...

【技术特征摘要】
1.一种甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条，包括底板(8)和依次设在所述底板(8)上的样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)和吸水垫(7)，其特征在于，所述结合垫(2)上结合有胶体金标记的抗人降钙素检测抗体和胶体金标记的抗癌胚抗原检测抗体，所述分析膜(3)上设有人降钙素检测带T1线(4)、癌胚抗原检测带T2线(5)和质控带C线(6)，所述降钙素检测带T1线(4)、所述癌胚抗原检测带T2线(5)和所述质控带C线(6)上分别包被有抗人降钙素捕获抗体、抗癌胚抗原捕获抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体，人降钙素和癌胚抗原的氨基酸序列分别为SEQIDNO:1和SEQIDNO:4所示，所述抗人降钙素检测抗体对应具有如SEQIDNO:2～SEQIDNO:3任一所示氨基酸序列的抗原表位，所述抗人降钙素捕获抗体对应SEQIDNO:2～SEQIDNO:3中余下一项所示的氨基酸序列的抗原表位，所述抗癌胚抗原检测抗体对应具有如SEQIDNO:5～SEQIDNO:6任一项所示氨基酸序列的抗原表位，所述抗癌胚抗原捕获抗体对应SEQIDNO:5～SEQIDNO:6中余下一项所示的氨基酸序列的抗原表位。2.一种如权利要求1所述的甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备抗人降钙素检测抗体、抗人降钙素捕获抗体、抗癌胚抗原检测抗体、抗癌胚抗原捕获抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体；(2)将抗人降钙素检测抗体和抗癌胚检测抗体用胶体金进行标记，并喷涂在玻璃纤维膜或聚酯膜上，制得结合垫；(3)将抗人降钙素捕获抗体、抗癌胚抗原捕获抗体以及羊抗鼠IgG抗体分别包被在硝酸纤维素膜的降钙素检测带T1线、癌胚抗原检测带T2线以及质控带C线上制备得到分析膜；(4)将样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫裁成合适的尺寸，并依次搭接在底板上，制得甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条。3.根据权利要求2所述的甲状腺髓样癌联合检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述样品垫的材质为玻璃纤维素膜或聚酯膜。4.根据权利要求3所述的甲状...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱富强，王珏，
申请(专利权)人：施康培医疗科技武汉有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42