一种发现用于监测IgA肾病的生物标志物的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种用于监测或检测IgA肾病发病过程和/或治疗过程的试剂盒，包括检测小RNA类生物标记物的PCR引物，生物标记物选自miR‑15a，miR‑16，miR‑21，miR‑29a，miR‑34a，miR‑125b，miR‑141，miR‑148b，miR‑155，miR‑184，miR‑192，miR‑200a，miR‑200b，miR‑200c，miR‑204，miR‑205，miR‑210，miR‑301a，和miR‑429。该试剂盒能够用于良好地检测治疗过程。

【技术实现步骤摘要】
一种发现用于监测IgA肾病的生物标志物的试剂盒
本专利技术属于医学检测领域，涉及一种发现用于监测IgA肾病的生物标志物的试剂盒。
技术介绍
IgA肾病(IgAnephropathy，IgAN)是世界上最常见的原发性血管球性肾炎。尽管总体人群中IgAN的患病率较低，但其流行率很高，特别是在亚洲，在肾活检中估计为30-40％。大约30-40％的IgAN患者将进展至结束-(ERSD)在20-30年内，使IgAN成为全球ERSD的主要原因。然而，目前关于IgAN的发病机制仍不清楚，可用的治疗只能缓解症状并延缓需要透析和肾移植。在IgAN患者中，一些患者治疗效果良好且可以长时间维持肾功能，然而不太明白的是，有一些患者对治疗有抵抗并需要透析更迅速，并且IgAN患者的死亡率甚至比开始透析治疗前更高(Knoopetal.2013)，这也与早期透析治疗可能是有益的观点相悖。目前，透析主要根据血清肌酐水平(>500mg/dL)和eGFR(<15mL/min)水平进行介入治疗。缺乏适当的生物标志物来监测IgAN的状态和进展使得难以判断何时需要进行透析。此外，目前用于评估IgAN状态的两种主要标志物，即血清肌酸酐和蛋白尿，但肾小球和肾小管间质的损伤检测准更为准确。肾活检是侵入性的，并可能导致并发症，并不适合监测病情进展。因此，目前急需找到合适的标志物，既可预测IgAN患者结果又能监测疾病进展。参考文献Knoop,T.etal.,2013.MortalityinpatientswithigAnephropathy.Americanjournalofkidneydiseases:theofficialjournaloftheNationalKidneyFoundation,62(5),pp.883–890.获取自网址:http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0272638613008226.
技术实现思路
miRNA是在各种组织和体液中发现的小的非编码RNA分子，在通过转录后调节基因表达来维持肾体内稳态中起重要作用。它们也在慢性肾脏疾病中发挥重要作用，如高血压性肾病和糖尿病肾小球硬化症。然而，目前有关miRNA在IgAN中的具体作用的研究报道仍然较少。因此，microRNA可能参与了IgAN的进展，可能被用作生物标志物来监测IgAN疾病并预测患者结果。为此，本专利技术选择了19种可能在肾脏中发挥作用的microRNA功能和测量它们的血浆水平在尚未接受治疗的IgAN患者中。本专利技术发现与健康受试者相比，13个微RNA中的13个显示改变的血浆水平。本专利技术进一步分析了这13种microRNA对治疗的反应，以探索其作为生物标志物的潜力。本专利技术发现miR-29a，miR-141，miR-200a，miR-204，miR-205和miR-429显示出显着改变治疗前和治疗后的血浆水平，表明这些microRNA可能反映疾病的状态并用作生物标志物。然后本专利技术分析它们的水平是否与IgAN患者接受治疗有关。本专利技术发现该类患者中血浆miR-29a和miR-205与血清肌酐、GFR以及蛋白尿相关。此外，miR-29a的下调和miR-205的上调，可能作为预测IgAN的进展的标志物，即具有低血浆水平的miR-29a或高血浆miR-205水平的患者可能意味着进展到IgAN的晚期阶段。本专利技术的研究表明miR-29a和miR-205可以用作生物标志物来监测IgAN的进展并且可以提供比血清肌酸酐、eGFR更多的指标来评估IgAN患者是否应该进行透析治疗。为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种用于监测或检测IgA肾病发病过程和/或治疗过程的试剂盒，所述试剂盒包括检测小RNA类生物标记物的PCR引物，所述生物标记物选自miR-15a，miR-16，miR-21，miR-29a，miR-34a，miR-125b，miR-141，miR-148b，miR-155，miR-184，miR-192，miR-200a，miR-200b，miR-200c，miR-204，miR-205，miR-210，miR-301a，和miR-429中的任一种、任两种、任三种、任四种、任五种、任六种、任七种、任八种、任九种、任十种、任十一种、任十二种、任十三种、任十四种、任十五种、任十六种、任十七种、任十八种或十九种。在一些实施方式中，所述生物标记物为miR-29a和/或miR-205。在一些实施方式中，针对miR-15a，其核酸序列为：UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG，其序列如SEQIDNO.1所示；针对miR-16，其核酸序列为：UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG，其序列如SEQIDNO.2所示；针对miR-21，其核酸序列为：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA，其序列如SEQIDNO.3所示；针对miR-29a，其核酸序列为：UAGCACCAUCUGAAAUCGGUUA，其序列如SEQIDNO.4所示；针对miR-34a，其核酸序列为：UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU，其序列如SEQIDNO.5所示；针对miR-125b，其核酸序列为：UCCCUGAGACCCUAACUUGUGA，其序列如SEQIDNO.6所示；针对miR-141，其核酸序列为：CGGCCGGCCCTGGGTCCATCTTCCAGTACAGTGTTGGATGGTCTAATTGTGAAGCTCCTAACACTGTCTGGTAAAGATGGCTCCCGGGTGGGTTC，其序列如SEQIDNO.7所示；针对miR-148b，其核酸序列为：UCAGUGCAUCACAGAACUUUGU，其序列如SEQIDNO.8所示；针对miR-155，其核酸序列为：UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGGU，其序列如SEQIDNO.9所示；针对miR-184，其核酸序列为：UGGACGGAGAACUGAUAAGGGU，其序列如SEQIDNO.10所示；针对miR-192，其核酸序列为：CUGACCUAUGAAUUGACAGCC，其序列如SEQIDNO.11所示；针对miR-200a，其核酸序列为：UAACACUGUCUGGUAACGAUGU，其序列如SEQIDNO.12所示；针对miR-200b，其核酸序列为：UAAUACUGCCUGGUAAUGAUGA，其序列如SEQIDNO.13所示；针对miR-200c，其核酸序列为：UAAUACUGCCGGGUAAUGAUGGA，其序列如SEQIDNO.14所示；针对miR-204，其核酸序列为：UUCCCUUUGUCAUCCUAUGCCU，其序列如SEQIDNO.15所示；针对miR-205，其核酸序列为：UCCUUCAUUCCACCGGAGUCUG，其序列如SEQIDNO.16所示；针对miR-210，其核酸序列为：CUGUGCGUGUGACAGCGGCUGA，其序列如SEQIDNO.17所示；针对miR-301a，其核酸序列为：CAGUGCAAUAGUAUUGUCAAAGC，其序列如SEQIDNO.18所示；以及针对miR-429，其核酸序列为：UAAUACUGUCUG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于监测或检测IgA肾病发病过程和/或治疗过程的试剂盒，所述试剂盒包括检测小RNA类生物标记物的PCR引物，所述生物标记物选自miR‑15a，miR‑16，miR‑21，miR‑29a，miR‑34a，miR‑125b，miR‑141，miR‑148b，miR‑155，miR‑184，miR‑192，miR‑200a，miR‑200b，miR‑200c，miR‑204，miR‑205，miR‑210，miR‑301a，和miR‑429中的任一种、任两种、任三种、任四种、任五种、任六种、任七种、任八种、任九种、任十种、任十一种、任十二种、任十三种、任十四种、任十五种、任十六种、任十七种、任十八种或十九种。

【技术特征摘要】
1.一种用于监测或检测IgA肾病发病过程和/或治疗过程的试剂盒，所述试剂盒包括检测小RNA类生物标记物的PCR引物，所述生物标记物选自miR-15a，miR-16，miR-21，miR-29a，miR-34a，miR-125b，miR-141，miR-148b，miR-155，miR-184，miR-192，miR-200a，miR-200b，miR-200c，miR-204，miR-205，miR-210，miR-301a，和miR-429中的任一种、任两种、任三种、任四种、任五种、任六种、任七种、任八种、任九种、任十种、任十一种、任十二种、任十三种、任十四种、任十五种、任十六种、任十七种、任十八种或十九种。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物标记物为miR-29a和/或miR-205。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，针对miR-15a，其核酸序列为：UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG，其序列如SEQIDNO.1所示；针对miR-16，其核酸序列为：UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG，其序列如SEQIDNO.2所示；针对miR-21，其核酸序列为：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA，其序列如SEQIDNO.3所示；针对miR-29a，其核酸序列为：UAGCACCAUCUGAAAUCGGUUA，其序列如SEQIDNO.4所示；针对miR-34a，其核酸序列为：UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU，其序列如SEQIDNO.5所示；针对miR-125b，其核酸序列为：UCCCUGAGACCCUAACUUGUGA，其序列如SEQIDNO.6所示；针对miR-141，其核酸序列为：CGGCCGGCCCTGGGTCCATCTTCCAGTACAGTGTTGGATGGTCTAATTGTGAAGCTCCTAACACTGTCTGGTAAAGATGGCTCCCGGGTGGGTTC，其序列如SEQIDNO.7所示；针对miR-148b，其核酸序列为：UCAGUGCAUCACAGAACUUUGU，其序列如SEQIDNO.8所示；针对miR-155，其核酸序列为：UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGGU，其序列如SEQIDNO.9所示；针对miR-184，其核酸序列为：UGGACGGAGAACUGAUAAGGGU，其序列如SEQIDNO.10所示；针对miR-192，其核酸序列为：CUGACCUAUGAAUUGACAGCC，其序列如SEQIDNO.11所示；针对miR-200a，其核酸序列为：UAACACUGUCUGGUAACGAUGU，其序列如SEQIDNO.12所示；针对miR-200b，其核酸序列为：UAAUACUGCCUGGUAAUGAUGA，其序列如SEQIDNO.13所示；针对miR-200c，其核酸序列为：UAAUACUGCCGGGUAAUGAUGGA，其序列如SEQIDNO.14所示；针对miR-204，其核酸序列为：UUCCCUUUGUCAUCCUAUGCCU，其序列如SEQIDNO.15所示；针对miR-205，其核酸序列为：UCCUUCAUUCCACCGGAGUCUG，其序列如SEQIDNO.16所示；针对miR-210，其核酸序列为：CUGUGCGUGUGACAGCGGCUGA，其序列如SEQIDNO.17所示；针对miR-301a，其核酸序列为：CAGUGCAAUAGUAUUGUCAAAGC，其序列如SEQIDNO.18所示；以及针对miR-429，其核酸序列为：UAAUACUGUCUGGUAAAACCGU，其序列如SEQIDNO.19所示。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括逆转录所述小RNA类生物标记物的引物；针对miR-15a，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCACAAA，其序列如SEQIDNO.58所示；针对miR-16，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCGCCAA，其序列如SEQIDNO.59所示；针对miR-21，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCAACAT，其序列如SEQIDNO.60所示；针对miR-29a，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTAACCGA，其序列如SEQIDNO.61所示；针对miR-34a，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTACAACC，其序列如SEQIDNO.62所示；针对miR-125b，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCACAAG，其序列如SEQIDNO.63所示；针对miR-141，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCCATCT，其序列如SEQIDNO.64所示；针对miR-148b，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTACAAAG，其序列如SEQIDNO.65所示；针对miR-155，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTACCCCT，其序列如SEQIDNO.66所示；针对miR-184，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTACCCTT，其序列如SEQIDNO.67所示；针对miR-192，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTGGCTGT，其序列如SEQIDNO.68所示；针对miR-200a，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTACATCG，其序列如SEQIDNO.69所示；针对miR-200b，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCATCAT，其序列如SEQIDNO.70所示；针对miR-200c...

【专利技术属性】
技术研发人员：何永成，陈小波，
申请(专利权)人：深圳慈海医院，
类型：发明
国别省市：广东,44