一种发现用于监测IgA肾病的生物标志物的方法技术

本发明专利技术提供了一种发现用于监测或检测IgA肾病发病过程和/或治疗过程的小RNA类生物标记物的方法，所述方法包括：与通过IgA肾病临床生化标志物检查结果进行对照，筛选出在未经治疗的IgA肾病患者中比健康受试者中表达丰度低，但在IgA肾病患者中经治疗后比经治疗前表达丰度高的小RNA类生物标记物；在未经治疗的IgA肾病患者中比健康受试者中表达丰度高，但在IgA肾病患者中经治疗后比经治疗前表达丰度低的小RNA类生物标记物。这些标记物能够良好地检测治疗过程。

【技术实现步骤摘要】
一种发现用于监测IgA肾病的生物标志物的方法
本专利技术属于医学检测领域，涉及一种发现用于监测IgA肾病的生物标志物的方法。
技术介绍
IgA肾病(IgAnephropathy，IgAN)是世界上最常见的原发性血管球性肾炎。尽管总体人群中IgAN的患病率较低，但其流行率很高，特别是在亚洲，在肾活检中估计为30-40％。大约30-40％的IgAN患者将进展至结束-(ERSD)在20-30年内，使IgAN成为全球ERSD的主要原因。然而，目前关于IgAN的发病机制仍不清楚，可用的治疗只能缓解症状并延缓需要透析和肾移植。在IgAN患者中，一些患者治疗效果良好且可以长时间维持肾功能，然而不太明白的是，有一些患者对治疗有抵抗并需要透析更迅速，并且IgAN患者的死亡率甚至比开始透析治疗前更高(Knoopetal.2013)，这也与早期透析治疗可能是有益的观点相悖。目前，透析主要根据血清肌酐水平(>500mg/dL)和eGFR(<15mL/min)水平进行介入治疗。缺乏适当的生物标志物来监测IgAN的状态和进展使得难以判断何时需要进行透析。此外，目前用于评估IgAN状态的两种主要标志物，即血清肌酸酐和蛋白尿，但肾小球和肾小管间质的损伤检测准更为准确。肾活检是侵入性的，并可能导致并发症，并不适合监测病情进展。因此，目前急需找到合适的标志物，既可预测IgAN患者结果又能监测疾病进展。参考文献Knoop,T.etal.,2013.MortalityinpatientswithigAnephropathy.Americanjournalofkidneydiseases:theofficialjournaloftheNationalKidneyFoundation,62(5),pp.883–890.获取自网址:http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0272638613008226.
技术实现思路
miRNA是在各种组织和体液中发现的小的非编码RNA分子，在通过转录后调节基因表达来维持肾体内稳态中起重要作用。它们也在慢性肾脏疾病中发挥重要作用，如高血压性肾病和糖尿病肾小球硬化症。然而，目前有关miRNA在IgAN中的具体作用的研究报道仍然较少。因此，microRNA可能参与了IgAN的进展，可能被用作生物标志物来监测IgAN疾病并预测患者结果。为此，本专利技术选择了19种可能在肾脏中发挥作用的microRNA功能和测量它们的血浆水平在尚未接受治疗的IgAN患者中。本专利技术发现与健康受试者相比，13个微RNA中的13个显示改变的血浆水平。本专利技术进一步分析了这13种microRNA对治疗的反应，以探索其作为生物标志物的潜力。本专利技术发现miR-29a，miR-141，miR-200a，miR-204，miR-205和miR-429显示出显着改变治疗前和治疗后的血浆水平，表明这些microRNA可能反映疾病的状态并用作生物标志物。然后本专利技术分析它们的水平是否与IgAN患者接受治疗有关。本专利技术发现该类患者中血浆miR-29a和miR-205与血清肌酐、GFR以及蛋白尿相关。此外，miR-29a的下调和miR-205的上调，可能作为预测IgAN的进展的标志物，即具有低血浆水平的miR-29a或高血浆miR-205水平的患者可能意味着进展到IgAN的晚期阶段。本专利技术的研究表明miR-29a和miR-205可以用作生物标志物来监测IgAN的进展并且可以提供比血清肌酸酐、eGFR更多的指标来评估IgAN患者是否应该进行透析治疗。为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种发现用于监测或检测IgA肾病发病过程和/或治疗过程的小RNA类生物标记物的方法，所述方法包括如下步骤：步骤(1)：比较健康受试者与未经治疗的IgA肾病患者中第一组小RNA类生物标记物的表达丰度；所述第一组小RNA类生物标记物选自：miR-15a，miR-16，miR-21，miR-29a，miR-34a，miR-125b，miR-141，miR-148b，miR-155，miR-184，miR-192，miR-200a，miR-200b，miR-200c，miR-204，miR-205，miR-210，miR-301a，和miR-429；步骤(2)：根据步骤(1)选择所述未经治疗的IgA肾病患者中比健康受试者中表达丰度具有显著变化的小RNA类生物标记物，构建出第二组小RNA类生物标记物；步骤(3)：比较经治疗的IgA肾病患者治疗前后所述第二组小RNA类生物标记物的表达丰度，其中，治疗后比治疗前丰度高的小RNA类生物标记物为第三组小RNA类生物标记物，治疗后比治疗前丰度低的小RNA类生物标记物为第四组小RNA类生物标记物；步骤(4)：将所述第三组小RNA类生物标记物和所述第四组小RNA类生物标记物的丰度变化情况与通过IgA肾病临床生化标志物检查结果进行对照，进行病程确认和/或治疗效果验证；步骤(5)：得到与IgA肾病治疗紧密相关的所述第三组小RNA类生物标记物中的第五组小RNA类生物标记物，以及与IgA肾病治疗紧密相关的所述第四组小RNA类生物标记物中的第六组小RNA类生物标记物；所述第五组小RNA类生物标记物和/或所述第六组小RNA类生物标记物为所述用于监测或检测IgA肾病发病过程和/或治疗过程的小RNA类生物标记物。在一些事实方式中，在步骤(5)中，与IgA肾病治疗紧密相关的所述第三组小RNA类生物标记物为在所述未经治疗的IgA肾病患者中比健康受试者中表达丰度低，但在IgA肾病患者中经治疗后比经治疗前表达丰度高的小RNA类生物标记物；与IgA肾病治疗紧密相关的所述第四组小RNA类生物标记物为在所述未经治疗的IgA肾病患者中比健康受试者中表达丰度高，但在IgA肾病患者中经治疗后比经治疗前表达丰度低的小RNA类生物标记物。在一些事实方式中，所述病程和/或治疗效果指症状得到缓解。在一些事实方式中，在所述步骤(3)中所述治疗过程包括向患有IgA肾病的患者施用缬沙坦，或联合施用霉酚酸酯与强的松。在一些事实方式中，所述施用缬沙坦的治疗方案为：尿蛋白＞1g/24小时，eGFR＞30ml/min/1.73m2的病人，每人每日80mg，若出现低血压不能耐受或肌酐进行性升高，减量或停用；所述联合施用霉酚酸酯与强的松的治疗方案为：针对尿蛋白＞1g/24小时，eGFR＞30ml/min/1.73m2，病理新月体占10-50％的病人，霉酚酸酯剂量1g至1.5g每天，强的松0.5mg每公斤体重每天，分别分两次口服，维持治疗半年后减量，疗程1年半。在一些事实方式中，所述临床标志物选自：血清肌酐水平，eGFR和蛋白尿。在一些事实方式中，针对miR-15a，其核酸序列为：UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG，其序列如SEQIDNO.1所示；针对miR-16，其核酸序列为：UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG，其序列如SEQIDNO.2所示；针对miR-21，其核酸序列为：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA，其序列如SEQIDNO.3所示；针对miR-29a，其核酸序列为：UAGCACCAUCUGAAAUCGG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种发现用于监测或检测IgA肾病发病过程和/或治疗过程的小RNA类生物标记物的方法，所述方法包括如下步骤：步骤(1)：比较健康受试者与未经治疗的IgA肾病患者中第一组小RNA类生物标记物的表达丰度；所述第一组小RNA类生物标记物选自：miR‑15a，miR‑16，miR‑21，miR‑29a，miR‑34a，miR‑125b，miR‑141，miR‑148b，miR‑155，miR‑184，miR‑192，miR‑200a，miR‑200b，miR‑200c，miR‑204，miR‑205，miR‑210，miR‑301a，和miR‑429；步骤(2)：根据步骤(1)选择所述未经治疗的IgA肾病患者中比健康受试者中表达丰度具有显著变化的小RNA类生物标记物，构建出第二组小RNA类生物标记物；步骤(3)：比较经治疗的IgA肾病患者治疗前后所述第二组小RNA类生物标记物的表达丰度，其中，治疗后比治疗前丰度高的小RNA类生物标记物为第三组小RNA类生物标记物，治疗后比治疗前丰度低的小RNA类生物标记物为第四组小RNA类生物标记物；步骤(4)：将所述第三组小RNA类生物标记物和所述第四组小RNA类生物标记物的丰度变化情况与通过IgA肾病临床生化标志物检查结果进行对照，进行病程确认和/或治疗效果验证；步骤(5)：得到与IgA肾病治疗紧密相关的所述第三组小RNA类生物标记物中的第五组小RNA类生物标记物，以及与IgA肾病治疗紧密相关的所述第四组小RNA类生物标记物中的第六组小RNA类生物标记物；所述第五组小RNA类生物标记物和/或所述第六组小RNA类生物标记物为所述用于监测或检测IgA肾病发病过程和/或治疗过程的小RNA类生物标记物。...

【技术特征摘要】
1.一种发现用于监测或检测IgA肾病发病过程和/或治疗过程的小RNA类生物标记物的方法，所述方法包括如下步骤：步骤(1)：比较健康受试者与未经治疗的IgA肾病患者中第一组小RNA类生物标记物的表达丰度；所述第一组小RNA类生物标记物选自：miR-15a，miR-16，miR-21，miR-29a，miR-34a，miR-125b，miR-141，miR-148b，miR-155，miR-184，miR-192，miR-200a，miR-200b，miR-200c，miR-204，miR-205，miR-210，miR-301a，和miR-429；步骤(2)：根据步骤(1)选择所述未经治疗的IgA肾病患者中比健康受试者中表达丰度具有显著变化的小RNA类生物标记物，构建出第二组小RNA类生物标记物；步骤(3)：比较经治疗的IgA肾病患者治疗前后所述第二组小RNA类生物标记物的表达丰度，其中，治疗后比治疗前丰度高的小RNA类生物标记物为第三组小RNA类生物标记物，治疗后比治疗前丰度低的小RNA类生物标记物为第四组小RNA类生物标记物；步骤(4)：将所述第三组小RNA类生物标记物和所述第四组小RNA类生物标记物的丰度变化情况与通过IgA肾病临床生化标志物检查结果进行对照，进行病程确认和/或治疗效果验证；步骤(5)：得到与IgA肾病治疗紧密相关的所述第三组小RNA类生物标记物中的第五组小RNA类生物标记物，以及与IgA肾病治疗紧密相关的所述第四组小RNA类生物标记物中的第六组小RNA类生物标记物；所述第五组小RNA类生物标记物和/或所述第六组小RNA类生物标记物为所述用于监测或检测IgA肾病发病过程和/或治疗过程的小RNA类生物标记物。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(5)中，与IgA肾病治疗紧密相关的所述第三组小RNA类生物标记物为在所述未经治疗的IgA肾病患者中比健康受试者中表达丰度低，但在IgA肾病患者中经治疗后比经治疗前表达丰度高的小RNA类生物标记物；与IgA肾病治疗紧密相关的所述第四组小RNA类生物标记物为在所述未经治疗的IgA肾病患者中比健康受试者中表达丰度高，但在IgA肾病患者中经治疗后比经治疗前表达丰度低的小RNA类生物标记物。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述病程和/或治疗效果指症状得到缓解。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤(3)中所述治疗过程包括向患有IgA肾病的患者施用缬沙坦，或联合施用霉酚酸酯与强的松。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述施用缬沙坦的治疗方案为：尿蛋白＞1g/24小时，eGFR＞30ml/min/1.73m2的病人，每人每日80mg，若出现低血压不能耐受或肌酐进行性升高，减量或停用；所述联合施用霉酚酸酯与强的松的治疗方案为：针对尿蛋白＞1g/24小时，eGFR＞30ml/min/1.73m2，病理新月体占10-50％的病人，霉酚酸酯剂量1g至1.5g每天，强的松0.5mg每公斤体重每天，分别分两次口服，维持治疗半年后减量，疗程1年半。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述临床标志物选自：血清肌酐水平，eGFR和蛋白尿。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，针对miR-15a，其核酸序列为：UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG，其序列如SEQIDNO.1所示；针对miR-16，其核酸序列为：UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG，其序列如SEQIDNO.2所示；针对miR-21，其核酸序列为：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA，其序列如SEQIDNO.3所示；针对miR-29a，其核酸序列为：UAGCACCAUCUGAAAUCGGUUA，其序列如SEQIDNO.4所示；针对miR-34a，其核酸序列为：UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU，其序列如SEQIDNO.5所示；针对miR-125b，其核酸序列为：UCCCUGAGACCCUAACUUGUGA，其序列如SEQIDNO.6所示；针对miR-141，其核酸序列为：CGGCCGGCCCTGGGTCCATCTTCCAGTACAGTGTTGGATGGTCTAATTGTGAAGCTCCTAACACTGTCTGGTAAAGATGGCTCCCGGGTGGGTTC，其序列如SEQIDNO.7所示；针对miR-148b，其核酸序列为：UCAGUGCAUCACAGAACUUUGU，其序列如SEQIDNO.8所示；针对miR-155，其核酸序列为：UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGGU，其序列如SEQIDNO.9所示；针对miR-184，其核酸序列为：UGGACGGAGAACUGAUAAGGGU，其序列如SEQIDNO.10所示；针对miR-192，其核酸序列为：CUGACCUAUGAAUUGACAGCC，其序列如SEQIDNO.11所示；针对miR-200a，其核酸序列为：UAACACUGUCUGGUAACGAUGU，其序列如SEQIDNO.12所示；针对miR-200b，其核酸序列为：UAAUACUGCCUGGUAAUGAUGA，其序列如SEQIDNO.13所示；针对miR-200c，其核酸序列为：UAAUACUGCCGGGUAAUGAUGGA，其序列如SEQIDNO.14所示；针对miR-204，其核酸序列为：UUCCCUUUGUCAUCCUAUGCCU，其序列如SEQIDNO.15所示；针对miR-205，其核酸序列为：UCCUUCAUUCCACCGGAGUCUG，其序列如SEQIDNO.16所示；针对miR-210，其核酸序列为：CUGUGCGUGUGACAGCGGCUGA，其序列如SEQIDNO.17所示；针对miR-301a，其核酸序列为：CAGUGCAAUAGUAUUGUCAAAGC，其序列如SEQIDNO.18所示；以及针对miR-429，其核酸序列为：UAAUACUGUCUGGUAAAACCGU，其序列如SEQIDNO.19所示。8.如权利要求1或7所述的方法，其特征在于，针对miR-15a，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCACAAA，其序列如SEQIDNO.58所示；针对miR-16，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCGCCAA，其序列如SEQIDNO.59所示；针对miR-21，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCAACAT，其序列如SEQIDNO.60所示；针对miR-29a，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTAACCGA，其序列如SEQIDNO.61所示；针对miR-34a，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTACAACC，其序列如SEQIDNO.62所示；针对miR-125b，逆转录所用引物为：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCACAAG，其序列如SEQIDNO.63所示；针对miR-141，逆转录所用引物为：...

【专利技术属性】
技术研发人员：何永成，陈小波，
申请(专利权)人：深圳慈海医院，
类型：发明
国别省市：广东,44