用于抑制NLRP3基因表达的组合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及用于调节NLRP3 mRNA或蛋白表达的化合物、组合物和方法，其使用包含两个或更多个单链反义寡核苷酸的基因沉默化合物，所述寡核苷酸通过其5'‑末端连接以使得能够存在两个或更多个可及的3'‑末端。

Composition for inhibiting NLRP3 gene expression and its application

The present invention relates to compounds, compositions and methods for regulating the expression of NLRP3 mRNA or protein, using gene silencing compounds containing two or more single-stranded antisense oligonucleotides that are connected through their 5'

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于抑制NLRP3基因表达的组合物及其用途专利技术背景相关申请本申请要求2015年11月4日递交的美国临时专利申请序列号62/250796的权益，其内容通过参照以其全部结合于此。专利
本专利技术涉及用于抑制NLR家族热蛋白结构域相关蛋白3(pyrindomaincontaining3)(NLRP3，也称为CIAS1)基因表达或者用于诊断、治疗和/或预防对NLRP3基因表达的抑制作出反应的疾病和/或病症的化合物、组合物和方法。相关技术概述NLRP3基因属于称为NLR的基因家族(含有核苷酸结合结构域和富亮氨酸重复序列的家族)。NLR蛋白参与免疫系统，帮助启动和调节免疫系统对损伤、毒素或微生物入侵的反应。这些蛋白识别特定分子，被激活，并且通过帮助接触免疫系统的组分来作出反应。NLRP3基因提供用于制备称为冷吡啉(cryopyrin)的蛋白的指令，该蛋白主要存在于白细胞和软骨形成细胞(软骨细胞)中。冷吡啉识别细菌颗粒、化学品比如石棉、二氧化硅和尿酸晶体以及受损细胞释放的化合物。一旦被激活，冷吡啉分子组与其他蛋白一起将自身组装成称为炎性体(inflammasome)的结构，炎性体参与炎症过程。当免疫系统将信号传导分子以及白细胞发送至损伤或疾病部位以抗击微生物入侵者并促进组织修复时发生炎症。NLRP3基因突变与家族性寒冷性自身炎症性综合征(FCAS)、穆-韦二氏综合征(MWS)、慢性婴儿神经皮肤关节(CINCA)综合征和新生儿发病的多系统炎症性疾病(NOMID)相关。NLRP3也涉及间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC/BPS)的发病机制。因此，需要得益于NLRP3的表达减少或得益于NLRP3活性调节的疾病或障碍治疗。专利技术简述本专利技术涉及用于调节NLRP3mRNA或蛋白表达的化合物、组合物和方法，其使用包含两个或更多个单链反义寡核苷酸的基因沉默化合物(“GSO”)，所述单链反义寡核苷酸通过其5’-末端连接以使得能够存在两个或更多个可及的3’-末端。本专利技术的基因沉默化合物有效抑制或减少NLRP3mRNA或蛋白表达。本文提供用于调节NLRP3mRNA和蛋白表达的方法、化合物和组合物。在某些实施方案中，用于调节NLRP3mRNA和蛋白表达的化合物为基因沉默化合物。在某些实施方案中，调节可发生在细胞或组织中。在某些实施方案中，细胞或组织在动物体内。在某些实施方案中，动物为人。在某些实施方案中，NLRP3mRNA水平降低。在某些实施方案中，NLRP3蛋白水平降低。这种降低可以时间依赖性方式或剂量依赖性方式发生。还提供用于预防、治疗和改善疾病、障碍和病症的方法、化合物和组合物。在某些实施方案中，治疗方法包括将NLRP3mRNA或蛋白表达基因沉默化合物或组合物给予有需要的个体。附图简述如附图中图解说明的那样，本专利技术的前述和其他目的、特征和优点从以下本专利技术优选实施方案的更具体描述将变得显而易见，其中在不同的视图中相同的标记符号涉及相同的部件。附图不一定按比例绘制，而是将重点放在说明本专利技术的原理。图1描绘基于细胞的测定中的示例性mNLRP3GSO的筛选结果。图2描绘小鼠J774细胞系中的mNLRP3通过示例性GSO的沉默。图3A和图3B证实示例性的mNLRP3GSO剂量依赖性地沉默小鼠J774细胞中的NLRP3mRNA表达和蛋白水平。图4证实示例性的mNLRP3GSO剂量依赖性地减少J774细胞中的LPS加ATP诱导的IL-1b分泌。图5证实示例性的mNLRP3GSO在基于细胞的测定中特异性地沉默小鼠NLRP3基因表达。图6描绘在基于细胞的测定中的示例性的hNLRP3GSO的剂量反应曲线。图7A和图7B描述THP-1细胞中的示例性hNLRP3GSO的剂量反应曲线。图8A和图8B证实示例性的hNLRP3GSO抑制THP-1细胞中的LPS/ATP-诱导的细胞因子分泌。图9描绘人PBMC中的示例性hNLRP3GSO的剂量反应曲线。图10A和图10B证实示例性的hNLRP3GSO抑制人PBMC中的LPS/ATP诱导的细胞因子分泌。图11A至图11C证实间质性膀胱炎动物模型中的示例性mNLRP3GSO对膀胱重量、尿IL-1β和尿IL-18的作用。图12A至图12D证实间质性膀胱炎动物模型中的示例性mNLRP3GSO对膀胱炎性体基因表达的作用。图13证实间质性膀胱炎动物模型中的示例性mNLRP3GSO对膀胱炎性体基因表达的作用。图14证实间质性膀胱炎动物模型中的示例性mNLRP3GSO对膀胱重量的作用。图15A和图15B证实间质性膀胱炎动物模型中的示例性mNLRP3GSO对膀胱重量、尿IL-1β的作用。图16A至图16D证实实验性自身免疫性葡萄膜炎动物模型中的示例性mNLRP3GSO的作用。优选实施方案的详述本专利技术涉及基因沉默化合物下调NLRP3mRNA或蛋白表达的治疗性和预防性用途。这种分子可用于例如提供用于调节NLRP3基因表达或者用于治疗和/或预防能够在患者、受试者、动物或生物体中对NLRP3基因表达的调节作出反应的疾病和/或病症的组合物。当与附图一起阅读时，本专利技术的目的、其各种特征以及本专利技术本身可从以下描述更全面地理解，其中以下术语具有归定的意义。除非提供具体定义，否则与本文描述的分析化学、合成有机化学以及药物和药物化学结合使用的命名法以及程序和技术为本领域熟知和常用的那些。标准技术可用于化学合成和化学分析。在允许的情况下，贯穿本文公开所提及的所有专利、申请、公开的申请和其他出版物、可通过数据库比如美国国家生物技术信息中心(NCBI)获得的GENBANK登录号和相关的序列信息以及其它数据通过参照本文讨论的文件部分以及以其整体结合。术语“2’-O-取代的”意指用含有1-6个饱和或不饱和碳原子的-O-低级烷基(例如(但不限于)2’-O-甲基)或用-O-芳基或具有2-6个碳原子的烯丙基取代戊糖部分的2’位置，其中这种烷基、芳基或烯丙基可为未取代的或者可例如用2’-O-甲氧基乙基、乙氧基、甲氧基、卤代、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、烷氧羰基(carbalkoxyl)或氨基，或者用羟基、氨基或卤代基团，但是不用2’-H基团取代。在一些实施方案中，本专利技术的寡核苷酸在其5’末端包含4或5个2’-O-烷基核苷酸，和/或在其3’末端包含4或5个2’-O-烷基核苷酸。当定向使用时，术语“3’”通常指的是来自同一多核苷酸或寡核苷酸中的另一个区域或位置的3’的多核苷酸或寡核苷酸(朝向核苷酸的3’末端)的区域或位置。术语“3’末端”通常指的是组分寡核苷酸的3’末端核苷酸。“在其3’末端连接的两个或更多个寡核苷酸”通常指的是寡核苷酸的3’末端核苷酸之间可直接经5’、3’或2’羟基，或者间接经非核苷酸接头的连接。这种连接也可经核苷利用核苷的2’和3’羟基位置两者。这种连接还可利用3’末端核苷酸的官能化糖或核碱基。当定向使用时，术语“5’”通常指的是来自同一多核苷酸或寡核苷酸中的另一个区域或位置的5’的多核苷酸或寡核苷酸(朝向核苷酸的5’末端)的区域或位置。术语“5’末端”通常指的是组分寡核苷酸的5’末端核苷酸。“在其5’末端连接的两个或更多个单链反义寡核苷酸”通常指的是寡核苷酸的5’末端核苷酸之间可直接经5’、3’或2’羟基，或者间本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 一种包含两个单链反义寡核苷酸的合成寡核苷酸化合物，所述单链反义寡核苷酸通过其5’‑末端连接以使得能够存在两个或更多个可及的3’‑末端，每个寡核苷酸独立地包含12‑30个核苷酸，所述核苷酸具有包含与SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:96的等长部分互补的至少12个邻接核碱基的部分的核碱基序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.04 US 62/2507961.一种包含两个单链反义寡核苷酸的合成寡核苷酸化合物，所述单链反义寡核苷酸通过其5’-末端连接以使得能够存在两个或更多个可及的3’-末端，每个寡核苷酸独立地包含12-30个核苷酸，所述核苷酸具有包含与SEQIDNO:95或SEQIDNO:96的等长部分互补的至少12个邻接核碱基的部分的核碱基序列。2.权利要求1的化合物，其中所述寡核苷酸包含相同的序列。3.权利要求1的化合物，其中所述寡核苷酸长度各自独立地在15-25个核苷酸之间。4.权利要求1的化合物，其中每个寡核苷酸的核碱基序列独立地在其整个长度上与SEQIDNO:95的核碱基序列至少90%互补。5.权利要求1的化合物，其中每个寡核苷酸的核碱基序列独立地在其整个长度上与SEQIDNO:96的核碱基序列至少90%互补。6.权利要求1的化合物，其中每个寡核苷酸独立地包含SEQIDNO:42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61，62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93或94的至少12个邻接核碱基的部分。7.权利要求1的化合物，其中每个寡核苷酸独立地包含SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或41的至少12个邻接核碱基的部分。8.权利要求1的化合物，其中每个寡核苷酸独立地包含SEQIDNO:42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61，62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93或94的至少12个邻接核碱基的部分，并且与其SEQIDNO:95的靶位点至少80%互补。9.权利要求1的化合物，其中每个寡核苷酸独立地包含SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或41的至少12个邻接核碱基的部分，并且与其SEQIDNO:96的靶位点至少80%互补。10.一种包含权利要求1的化合物和药学上可接受的载体的组合物。11.一种包含两个单链反义寡核苷酸的合成寡核苷酸化合物，所述单链反义寡核苷酸通过其5’-末端连接以使得能够存在两个或更多个可及的3’-末端，其中所述寡核苷酸独立地包含选自SEQIDNO:42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋伟恩，MR普塔，朱富刚，JM迪穆齐奥，L巴加特，S阿拉瓦尔，
申请(专利权)人：艾德拉药物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US