一种分离绿原酸的方法技术

本发明专利技术提供了一种分离绿原酸的方法，步骤如下：（1）制备填料：将氧化锌、氧化钙、中性氧化铝、轻质二氧化硅混合后搅拌均匀，在580～620℃活化，制得A组分；将A组分、葡聚糖凝胶和分散剂按重量比1：（2～3.5）：（40～70）混合，在40～55℃搅拌5～8h，静置，过滤除上清，干燥，制得填料B；（2）制备分离柱：将填料B和硅藻土依次进行装柱，用混合溶剂淋洗至柱子达到平衡，制得分离柱；（3）绿原酸分离：将待分离的绿原酸提取液上样于步骤（2）制备的分离柱，然后以混合溶剂为流动相进行洗脱。本发明专利技术的分离方法操作简单，分离时间短，得到的绿原酸纯度高。

【技术实现步骤摘要】
一种分离绿原酸的方法
本专利技术属于天然产物分离提取
，具体涉及一种分离绿原酸的方法。
技术介绍
绿原酸是一种缩酚酸，属酚类化合物，具有广泛的药理活性，如抗菌、抗病毒、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等，目前已作为重要原料广泛用于保健品，药品、化妆品等工业。绿原酸多从植物中提取获得，目前国内外主要从生咖啡豆和金银花中提取绿原酸。杜仲叶中绿原酸含量为1％～5.5％，该含量在植物叶子中属于较高者，因此从杜仲叶中分离提取绿原酸具有广阔的开发前景。目前已报道从天然植物中提取分离绿原酸的主要方法有溶剂提取法、物理场辅助提取法(超声场、微波场等)、醇沉法、乙酸乙酯萃取法、大孔树脂吸附分离法、超临界法、超滤法等。例如，专利CN1400199A公开了一种从杜仲叶中连续提取活性物质的方法，该法以水、甲醇或乙醇为提取剂，通过大孔树脂分离、乙酸乙酯萃取和混合溶剂重结晶等工序提取绿原酸和杜仲总黄酮。该方法使用的是非极性树脂，对绿原酸的吸附率不高；采取的乙酸乙酯萃取、乙酸乙酯-氯仿重结晶，操作麻烦、溶剂复杂、母液回收设备要求高。专利CN1687435A公开了一种高纯度绿原酸工业化生产工艺，主要步骤为原料经石油醚预处理、生物复合酶提取、提取液调酸、乙酸乙酯萃取、碱中和萃取液后水相酸沉、沉淀重结晶。专利CN1273964A公开了一种杜仲叶制备绿原酸工艺，主要步骤如下：超声预处理、高温提取、超滤、乙酸乙酯萃取、D-140树脂分离等。现有的从杜仲叶中分离提取绿原酸的方法，存在操作复杂繁琐、周期长、所用溶剂复杂、组分的回收率不高等缺陷。因此，随着市场上对绿原酸的需求不断上涨，如何从杜仲叶中有效分离得到高纯度、高回收率的绿原酸已成为亟待解决的问题。葡聚糖凝胶是由直链的葡聚糖分子和交联剂交联而成的具有多孔网状结构的高分子化合物，网孔的大小决定了被分离物质能够自由出入凝胶内部的分子量范围。利用葡聚糖凝胶层析分离混合物，是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱，各个组分由于分子量不相同，在凝胶柱上受到的阻滞作用不同，而在层析柱中以不同的速度移动。分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此流程短，而先流出层析柱；分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程延长，而最后从层析柱中流出。若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间，则在两者之间从柱中流出，由此就可以达到分离目的。研究表明，杜仲叶与皮所含的化学成分基本一致，包括绿原酸、黄酮类、木脂素类、环烯醚萜类、苯丙素类、氨基酸、多糖化合物以及多种微量元素等。利用水醇溶剂提取杜仲叶得到的提取物，其主要成分有绿原酸、黄酮类、木脂素和其他还有少量的无机盐以及小分子氨基酸等；提取物中大多数黄酮类化合物分子量比绿原酸小，少部分与绿原酸接近；大多数木脂素化合物分子量比绿原酸大，少部分与绿原酸接近。如果直接采用葡聚糖凝胶作为填料对杜仲叶提取物进行柱层析分离，不易将分子量与绿原酸接近的物质分离除去，而且层析后得到的绿原酸产品纯度低，收率低，无法实现绿原酸的有效分离纯化。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题和不足，本专利技术的目的旨在提供一种分离绿原酸的方法。为实现专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种分离绿原酸的方法，包括以下步骤：(1)制备填料：a)、将6wt％～12wt％氧化锌、3wt％～8wt％氧化钙、30wt％～38wt％中性氧化铝、42wt％～61wt％轻质二氧化硅混合后搅拌均匀，得到混合料，将混合料在580～620℃焙烧活化10～15h，制得A组分；b)、将A组分、葡聚糖凝胶和分散剂按重量比1：(2～3.5)：(40～70)混合，在40～55℃搅拌5～8h，冷却至室温后静置24～48h，过滤除上清，然后在60～78℃干燥，制得填料B；(2)制备分离柱：将填料B和硅藻土依次进行装柱，装柱后进行压实，然后用混合溶剂淋洗至柱子达到平衡(外观上无明显气泡夹杂)，制得分离柱，其中，所述分离柱的固定相分为上、下两段，上段的填料为硅藻土，下段的填料为填料B，上段和下段的长度比为1：(3～5)；(3)绿原酸分离：将待分离的绿原酸提取液上样于步骤(2)制备的分离柱，然后以混合溶剂为流动相进行洗脱；其中，所述混合溶剂为水、乙醇、丙酮三者的混合溶液。根据上述分离绿原酸的方法，优选地，步骤(1)中，所述氧化锌的粒度为60～150目，所述氧化钙的粒度为80～100目，所述中性氧化铝的粒度为200～400目，所述轻质二氧化硅的粒度为300～500目。根据上述分离绿原酸的方法，优选地，步骤(1)中，所述葡聚糖凝胶为G-10或G-15，。更加优选地，所述葡聚糖凝胶为G-10。根据上述分离绿原酸的方法，优选地，步骤(1)中，所述分散剂是体积分数为10％～20％的乙醇水溶液。根据上述分离绿原酸的方法，优选地，步骤(2)中，所述硅藻土的粒度为500～800目。根据上述分离绿原酸的方法，优选地，步骤(2)中，所述分离柱固定相上段和下段的长度比为1：3。根据上述分离绿原酸的方法，优选地，步骤(2)中，所述分离柱固定相的总长度为60～150cm。根据上述分离绿原酸的方法，优选地，步骤(2)中，所述分离柱的径高比为1：(5～8)；更加优选为1：8。根据上述分离绿原酸的方法，优选地，所述混合溶剂中水、乙醇、丙酮的体积比为(3～6)：(2～4.5)：1。更加优选地，所述混合溶剂中水、乙醇、丙酮的体积比为5.2：3.6：1。根据上述分离绿原酸的方法，优选地，步骤(3)中，所述流动相的洗脱压力为150～300kPa，洗脱流速为15～25ml/min。根据上述分离绿原酸的方法，优选地，步骤(3)中，所述绿原酸提取液为杜仲叶用体积分数为40％～70％的乙醇水溶液进行提取得到的提取液。更加优选地，所述绿原酸提取液的制备方法为：将干燥的杜仲叶粉成细末，按料液比1：(15～30)向杜仲叶粉末中加入乙醇体积分数为40％～70％的乙醇水溶液混合均匀，于30～55℃、pH3.5～4.5的条件下超声处理15～30min，超声功率为200～350W；超声处理完毕后过滤，对滤液进行浓缩、干燥，得到绿原酸粗品；然后将绿原酸粗品用乙醇溶解，制得绿原酸提取液。与现有技术相比，本专利技术取得的有益效果为：(1)本专利技术先将氧化锌、氧化钙、中性氧化铝和轻质二氧化硅按比例混合配制成混合料，由于中性氧化铝和轻质二氧化硅均为多孔、高分散度的结构，比表面积大，易吸附氧化锌、氧化钙，经580～620℃高温活化处理后，混合料中性氧化铝和轻质二氧化硅微孔表面的吸附性能、表面活性和热稳定性得到了大幅度的提高，更有利于中性氧化铝和轻质二氧化硅与氧化锌、氧化钙稳定结合，经活化后制备得到的A组分吸附活性高、稳定性强。而且，氧化锌、氧化钙、中性氧化铝和轻质二氧化硅对羟基有亲和性，而葡聚糖凝胶又含有较多的羟基，经过活化处理后，A组分结构上对葡聚糖羟基的结合更好。因此，经过活化处理，能够提高A组分与葡聚糖凝胶的吸附力，使得A组分与葡聚糖结合更牢固，有利于提高制得的填料B的结构稳定性，从而进一步提高绿原酸的分离效率。(2)本专利技术利用葡聚糖凝胶具有立体网状结构、含有大量的羟基且在分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离绿原酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备填料：a）、将6wt%～12wt%氧化锌、3wt%～8wt%氧化钙、30wt%～38wt%中性氧化铝、42wt%～61wt%轻质二氧化硅混匀，得到混合料，将混合料在580～620℃焙烧活化10～15h，制得A组分；b）、将A组分、葡聚糖凝胶和分散剂按重量比1：（2～3.5）：（40～70）混合，在40～55℃搅拌5～8h，冷却至室温后静置24～48h，过滤除上清，然后在60～78℃干燥，制得填料B；（2）制备分离柱：将填料B和硅藻土依次进行装柱，装柱后进行压实，然后用混合溶剂淋洗至柱子达到平衡，制得分离柱，其中，所述分离柱的固定相分为上、下两段，上段的填料为硅藻土，下段的填料为填料B，上段和下段的长度比为1：（3～5）；（3）绿原酸分离：将待分离的绿原酸提取液上样于步骤（2）制备的分离柱，然后以混合溶剂为流动相进行洗脱；其中，所述混合溶剂为水、乙醇、丙酮三者的混合溶剂。

【技术特征摘要】
1.一种分离绿原酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备填料：a）、将6wt%～12wt%氧化锌、3wt%～8wt%氧化钙、30wt%～38wt%中性氧化铝、42wt%～61wt%轻质二氧化硅混匀，得到混合料，将混合料在580～620℃焙烧活化10～15h，制得A组分；b）、将A组分、葡聚糖凝胶和分散剂按重量比1：（2～3.5）：（40～70）混合，在40～55℃搅拌5～8h，冷却至室温后静置24～48h，过滤除上清，然后在60～78℃干燥，制得填料B；（2）制备分离柱：将填料B和硅藻土依次进行装柱，装柱后进行压实，然后用混合溶剂淋洗至柱子达到平衡，制得分离柱，其中，所述分离柱的固定相分为上、下两段，上段的填料为硅藻土，下段的填料为填料B，上段和下段的长度比为1：（3～5）；（3）绿原酸分离：将待分离的绿原酸提取液上样于步骤（2）制备的分离柱，然后以混合溶剂为流动相进行洗脱；其中，所述混合溶剂为水、乙醇、丙酮三者的混合溶剂。2.根据权利要求1所述的分离绿原酸的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述氧化锌的粒度为60～150目，所述氧化钙的粒度为80～100目，所述中性氧化铝的粒度为200～400目，所述轻质二氧化硅的粒度为300～500目。3...

【专利技术属性】
技术研发人员：张立攀，周莉，王法云，刘红伟，赵梦瑶，张文杰，刘兵戈，关炳峰，章建军，任钊，罗蓓蓓，
申请(专利权)人：河南省商业科学研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：河南,41