The invention discloses a method for detecting Lysophosphatidylcholines in dry blood tablets and a kit thereof. Dry blood spot extract was obtained by extracting dry blood spot with extract liquid. Dry blood spot extract was added to the internal standard, mixed until completely dissolved. The internal standard liquid was prepared by vacuum drying. The internal standard liquid was diluted into working liquid by dry blood spot extract. The filter paper to be tested was extracted by working liquid and incubated by oscillation. The Lysophosphatidylcholines in samples were detected by tandem mass spectrometry. The detection method of the present invention has the advantages of high throughput, high sensitivity, simplicity and practicability, and can be used for screening X-linked adrenoleukodystrophy (XALD) of newborns, as well as for assistant diagnosis, increasing the types of screening for genetic and metabolic diseases of newborns, providing timely diagnosis, enabling children to be treated in time and reducing the morbidity of children with birth limitation.
【技术实现步骤摘要】
干血片中溶血磷脂酰胆碱类的检测方法及其试剂盒
本专利技术涉及生化检测设备
,尤其涉及一种流动进样-串联质谱法筛查滤纸干血片中多种溶血磷脂酰胆碱(Lyso-PC)浓度的定量检测技术及试剂盒。
技术介绍
新生儿遗传代谢病的筛查(NeonatalScreening,简称新筛)是对一些危害儿童生命、导致儿童体格及智能发育障碍的先天性、遗传性疾病进行筛查,以便作出早期诊断,在临床症状未表现之前或表现轻微时得以早期治疗,防止机体组织器官发生不可逆的损伤,避免患儿发生严重智力低下、严重疾病甚至死亡。串联质谱法(TandemMassSpectrometry,MS/MS)是新筛的一个有用的检测工具,能在几分钟内对一个滤纸干血片样本进行几十种代谢产物分析,实现了“一次实验检测多种疾病”的要求,使新筛在内容和质量上都提高到一个新水平。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供干血片中溶血磷脂酰胆碱类的检测方法及其试剂盒。为实现上述技术目的,本专利技术采用如下技术方案:一种干血片中溶血磷脂酰胆碱类的检测方法,所述溶血磷脂酰胆碱类为20:0溶血磷脂酰胆碱;22:0溶血磷脂酰胆碱、24:0溶血磷脂酰胆碱和26:0溶血磷脂酰胆碱;所述方法包括如下步骤:(1)制备内标品液:采用萃取液萃取干血斑获得干血斑萃取液,在内标品中加入干血斑萃取液,混匀直至完全溶解,真空干燥制成内标品液;(2)制备工作液:将步骤(1)制备的内标品液用干血斑萃取液稀释成工作液;(3)利用打孔器将待测滤纸片、质控品滤纸片打孔,放入V截底型96孔板中,之后在各孔中加入步骤(2)制备的工作液;将96孔板密封放入孵育振荡器内 ...
【技术保护点】
1.一种干血片中溶血磷脂酰胆碱类的检测方法,其特征在于,所述溶血磷脂酰胆碱类为20:0溶血磷脂酰胆碱;22:0溶血磷脂酰胆碱、24:0溶血磷脂酰胆碱和26:0溶血磷脂酰胆碱;所述方法包括如下步骤:(1)制备内标品液:采用萃取液萃取干血斑获得干血斑萃取液,在内标品中加入干血斑萃取液,混匀直至完全溶解,真空干燥制成内标品液;(2)制备工作液:将步骤(1)制备的内标品液用干血斑萃取液稀释成工作液;(3)利用打孔器将待测滤纸片、质控品滤纸片打孔,放入V截底型96孔板中,之后在各孔中加入步骤(2)制备的工作液;将96孔板密封放入孵育振荡器内孵育;(4)振荡结束后,取孵育溶液,采用串联质谱法检测样本中溶血磷脂酰胆碱类。
【技术特征摘要】
1.一种干血片中溶血磷脂酰胆碱类的检测方法,其特征在于,所述溶血磷脂酰胆碱类为20:0溶血磷脂酰胆碱;22:0溶血磷脂酰胆碱、24:0溶血磷脂酰胆碱和26:0溶血磷脂酰胆碱;所述方法包括如下步骤:(1)制备内标品液:采用萃取液萃取干血斑获得干血斑萃取液,在内标品中加入干血斑萃取液,混匀直至完全溶解,真空干燥制成内标品液;(2)制备工作液:将步骤(1)制备的内标品液用干血斑萃取液稀释成工作液;(3)利用打孔器将待测滤纸片、质控品滤纸片打孔,放入V截底型96孔板中,之后在各孔中加入步骤(2)制备的工作液;将96孔板密封放入孵育振荡器内孵育;(4)振荡结束后,取孵育溶液,采用串联质谱法检测样本中溶血磷脂酰胆碱类。2.根据权利要求1所述的一种干血片中溶血磷脂酰胆碱类的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中,内标品成分为d4-20:0溶血磷脂酰胆碱、13C6-22:0溶血磷脂酰胆碱、13C6-24:0溶血磷脂酰胆碱和13C6-26:0溶血磷脂酰胆碱。3.根据权利要求1所述的一种干血片中溶血磷脂酰胆碱类的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中,萃取液为含有0.05%甲酸的80:20甲醇水溶液。4.根据权利要求1所述的一种干血片中溶血磷脂酰胆碱类的检测方法,其特征在于,所述步骤(2)中,将内标品溶液用干血斑萃取液按体积110倍稀释成工作液;稀释后内标品浓度为4μmol/L。5.根据权利要求1所述的一种干血片中溶血磷脂酰胆碱类的检测方法,其特征在于,所述步骤(3)中,将96孔板密封放入孵育振荡器内,在温度为45℃±5℃、振荡频率为650-750转/分的条件下,振荡孵育45分钟。6.根据权利要求1所述的一种干血片中溶血磷脂酰胆碱类的检测方...
【专利技术属性】
技术研发人员:邹敏旭,刘辉宇,张瑞雪,王猛,
申请(专利权)人:质谱生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:山东,37
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