一种测定北芪菇中含硫氨基酸含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种北芪菇中含硫氨基酸的含量测定的方法，涉及北芪菇中氨基酸的含量测定领域，以北芪菇为原料，经过过甲酸氧化保护后酸水解，超滤离心，以2,4‑二硝基氟苯为衍生试剂进行衍生，所得衍生物样液经高效液相色谱在乙腈‑水和乙酸钠为流动相，梯度洗脱，360nm波长下检测，对磺基丙氨酸和蛋氨酸砜的衍生产物进行分离，测定不同浓度梯度下胱氨酸标准品、蛋氨酸标准品的峰面积，绘制标准曲线，分别测得胱氨酸和蛋氨酸的含量，得到含硫氨基酸的含量。本发明专利技术方法仪器的要求低，不必严格限制反应条件，所需样品量少，样品不会被破坏，可进行单一成分的分析，是一种高效准确、简便易操作、价格低廉的测定方法。

A Method for the Determination of Sulfur-containing Amino Acids in Astragalus Mushroom

The invention discloses a method for determining the content of sulfur-containing amino acids in Beiqi mushroom, which relates to the field of determining the content of amino acids in Beiqi mushroom. Taking Beiqi mushroom as raw material, acid hydrolysis after formic acid oxidation protection, ultrafiltration centrifugation, derivatization with 2,4 dinitrofluorobenzene as derivative reagent, the derivative sample liquid obtained is used in acetonitrile water and sodium acetate as mobile phase by high performance liquid chromatography. Gradient elution, detection at 360 nm wavelength, the derivatives of sulfalanine and methionine sulfone were separated, the peak areas of cystine standard and methionine standard at different concentration gradients were determined, the standard curves were drawn, the contents of cystine and methionine were measured, and the contents of sulfur-containing amino acids were obtained. The apparatus of the method has low requirements, does not need to strictly restrict the reaction conditions, requires less sample quantity, and can be used for the analysis of a single component. It is an efficient, accurate, simple, easy to operate and low-cost determination method.

【技术实现步骤摘要】
一种测定北芪菇中含硫氨基酸含量的方法
本专利技术涉及北芪菇中氨基酸的提取与含量测定领域，尤其涉及一种测定北芪菇中含硫氨基酸含量的方法。
技术介绍
北芪菇，担子菌门下伞菌目侧耳属平菇，以北岳恒山正宗黄芪边角料和多种中草药及农作物副产品为培养料经多年培育而成的侧耳属平菇，是山西浑源富硒地区开发的新型食用菌。北芪菇中含有丰富的赖氨酸（1.19g/100g）和硒（0.54ppm/100g）可能与吡咯赖氨酸和L-硒代半胱氨酸或L-硒-甲基硒代半胱氨酸的生物合成存在着密切的关系，有望在抑制肿瘤、抗氧化、辅助治疗心血管疾病、解毒排毒等方面进行开发。根据相关部门的评测表明，北芪菇中氨基酸的含量占六分之一左右，其中人体所必需的8种氨共酸含量相对都比较高，是全能营养型的食用菌，其营养成份远超于普通平菇，含有较高的食用价值和药用价值。具有脱气排脓、补气固表、强身健体、保护肝脏、催乳、润肤等多种功能。含硫氨基酸是由胱氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸三种氨基酸组成的，是人类和动物生长过程中所必需的基本氨基酸之一。北芪菇中大多数含硫氨基酸与很多有机质结合成复杂的超分子结构，并且以肽键相连结合于蛋白质中，所以需通过一定的手本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定北芪菇中含硫氨基酸含量的方法，其特征在于，以北芪菇为原料，氧化水解，超滤离心处理后进行柱前衍生，其衍生物经过梯度洗脱，根据标准品的峰面积测得含硫氨基酸的含量，其中，以北芪菇为原料，粉碎筛选，经过过甲酸氧化保护，采用6mol/L的盐酸溶液进行酸水解，超滤离心，取上清液与衍生缓冲溶液混合，以2,4‑二硝基氟苯为衍生试剂进行衍生，所得衍生物样液经高效液相色谱在体积比为1:1的乙腈‑水和0.05mol/L乙酸钠为流动相，梯度洗脱，360nm波长下检测，对磺基丙氨酸衍生产物和蛋氨酸砜衍生产物进行分离，测定不同浓度梯度下胱氨酸标准品、蛋氨酸标准品的峰面积，绘制标准曲线，分别测得胱氨酸和蛋氨酸的...

【技术特征摘要】
1.一种测定北芪菇中含硫氨基酸含量的方法，其特征在于，以北芪菇为原料，氧化水解，超滤离心处理后进行柱前衍生，其衍生物经过梯度洗脱，根据标准品的峰面积测得含硫氨基酸的含量，其中，以北芪菇为原料，粉碎筛选，经过过甲酸氧化保护，采用6mol/L的盐酸溶液进行酸水解，超滤离心，取上清液与衍生缓冲溶液混合，以2,4-二硝基氟苯为衍生试剂进行衍生，所得衍生物样液经高效液相色谱在体积比为1:1的乙腈-水和0.05mol/L乙酸钠为流动相，梯度洗脱，360nm波长下检测，对磺基丙氨酸衍生产物和蛋氨酸砜衍生产物进行分离，测定不同浓度梯度下胱氨酸标准品、蛋氨酸标准品的峰面积，绘制标准曲线，分别测得胱氨酸和蛋氨酸的含量，得到含硫氨基酸的含量。2.根据权利要求1所述的一种测定北芪菇中含硫氨基酸含量的方法，其特征在于，该具体过程为：步骤a，以北芪菇为原料，粉碎筛选，保存于-4℃冰箱备用；步骤b，按体积比9:1将浓度为88％的甲酸溶液与30％的过氧化氢溶液混合形成过甲酸过氧化氢溶液；称取北芪菇40~60mg，置于烧杯中，添加过甲酸过氧化氢溶液，料液比为1:40，将该混合液放入冰水浴并一同放于冰箱中反应16h，加入偏重亚硫酸钠溶液终止剂，震荡摇匀，静置，得到氧化液备用；步骤c，向上述氧化液中加入6mol/L盐酸溶液，密封试管，110℃鼓风干燥环境下水解22-24h；取部分氧化水解后的溶液进行10倍稀释，在双光束紫外可见分光光度计上扫描，获得氧化水解后样液的紫外光谱图；步骤d，离心过滤，干燥，用超纯水将试管中的氨基酸样品溶出，定容，4000r/min离心5min，取上清液与衍生缓冲溶液混合，于容量瓶中定容，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨卫民，秦永其，赵青红，杜京旗，张利军，
申请(专利权)人：吕梁学院，
类型：发明
国别省市：山西,14