The invention belongs to the technical field of cell engineering tissue culture, in particular to a method for inducing embryogenic callus from immature embryos of Iris germanica. Specific steps include material preparation, explant disinfection, explant inoculation, embryogenic callus induction and embryogenic callus proliferation. The invention takes the immature embryo of Iris germanica as explant, has low pollution rate, high induction rate of callus, good callus embryo and simple operation.
【技术实现步骤摘要】
一种德国鸢尾幼胚诱导胚性愈伤组织的方法
本专利技术是关于细胞工程组织培养
,特别涉及一种德国鸢尾幼胚诱导胚性愈伤组织的方法。
技术介绍
德国鸢尾(IrisgermanicaL.)为鸢尾科(Iridaceae)鸢尾属(Iris.L)多年生草本植物,是世界著名的宿根花卉之一,耐寒性强,叶丛美观,花朵硕大,色彩艳丽,具有较高的观赏价值,世界各地广为栽培,在园林绿化、盆栽以及地被应用中有巨大的发展空间。目前,国内应用的德国鸢尾品种均引自国外,不但品种数量少、种源有限、且价格昂贵。迫切希望获得更多的、具有优良性状的德国鸢尾种苗,来满足各方面的需求。由于德国鸢尾自然结实率低,难以利用种子繁殖,而引进的母株有限,不能满足市场需求。因此,急需解决德国鸢尾优质种苗的繁殖方法,缓解目前市场对德国鸢尾种苗的需求。常规分株繁殖的方法存在着繁殖系数低,很难在短时间内获得大量优质种苗,无法满足园林绿化工程的需要。而通过组织培养的方式生产种苗,生产速度快、可缩短繁育周期,有效保持种苗的优良性状,因此通过组织培养快速繁殖是目前尽快满足应用需求的有效途径。德国鸢尾组织培养多采用茎尖、根茎及花器官为外植体,均存在污染率高、对母株造成伤害等问题。因此,探索一种操作简便、污染率低、诱导率高、且能使胚性愈伤组织长期保持较高分化再生能力的方法,非常必要。目前德国鸢尾的育种方式主要为常规杂交育种,育种周期长,杂交后代种苗较少,选育难度较大,而通过幼胚诱导胚性愈伤从而构建再生植株,能在短时间内增殖大量杂交后代,为选育优良品种提供便利。此外,愈伤组织也可用于遗传转化、种质资源保存与快繁生产。专利技术 ...
【技术保护点】
1.一种德国鸢尾幼胚诱导胚性愈伤组织的方法,其特征在于,所述德国鸢尾幼胚诱导胚性愈伤组织的方法具体包括下述步骤:(1)材料准备:在德国鸢尾自交或杂交后40~50d,取生长良好的蒴果于4℃冰箱中保存备用;(2)外植体消毒:将步骤(1)中的蒴果,在体积比为10%的洗洁精溶液中浸泡10~15min,再在流水下冲洗20~30min,然后置于超净工作台上进行消毒处理;(3)外植体接种:将步骤(2)处理后的蒴果,用镊子和解剖刀沿果实纵棱切开,取出颗粒饱满的种子置于无菌滤纸上;取出白色幼胚后接种至愈伤组织诱导培养基表面;再将接种的幼胚置于25℃,黑暗条件下培养;(4)胚性愈伤组织的诱导:外植体在愈伤组织诱导培养基上培养3~4周后,幼胚膨大并长出黄色致密的愈伤组织团块;用解剖刀将愈伤组织团块切下,转接到最佳愈伤组织诱导培养基上,在25℃,光照周期为12/12h的条件下培养;(5)胚性愈伤组织的增殖从步骤(4)中挑选质地紧密、黄色的胚性愈伤组织,接种到继代培养基上;待胚性愈伤组织小块平均直径达到1cm以上后,将其切分成直径小于5mm的愈伤组织小块,再接种到新鲜的愈伤组织继代培养基上,在25℃,光照周期为 ...
【技术特征摘要】
1.一种德国鸢尾幼胚诱导胚性愈伤组织的方法,其特征在于,所述德国鸢尾幼胚诱导胚性愈伤组织的方法具体包括下述步骤:(1)材料准备:在德国鸢尾自交或杂交后40~50d,取生长良好的蒴果于4℃冰箱中保存备用;(2)外植体消毒:将步骤(1)中的蒴果,在体积比为10%的洗洁精溶液中浸泡10~15min,再在流水下冲洗20~30min,然后置于超净工作台上进行消毒处理;(3)外植体接种:将步骤(2)处理后的蒴果,用镊子和解剖刀沿果实纵棱切开,取出颗粒饱满的种子置于无菌滤纸上;取出白色幼胚后接种至愈伤组织诱导培养基表面;再将接种的幼胚置于25℃,黑暗条件下培养;(4)胚性愈伤组织的诱导:外植体在愈伤组织诱导培养基上培养3~4周后,幼胚膨大并长出黄色致密的愈伤组织团块;用解剖刀将愈伤组织团块切下,转接到最佳愈伤组织诱导培养基上,在25℃,光照周期为12/12h的条件下培养;(5)胚性愈伤组织的增殖从步骤(4)中挑选质地紧密、黄色的胚性愈伤组织,接种到继代培养基上;待胚性愈伤组织小块平均直径达到1cm以上后,将其切分成直径小于5mm的愈伤组织小块,再接种到新鲜的愈伤组织继代培养基上,在25℃,光照周期为12/12h的条件下培养。2.根据权利要求1所述的德国鸢尾幼胚诱导胚性愈伤组织的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所取的蒴果为胚乳未硬化的蒴果。3.根据权利要求1所述的德国鸢尾幼胚诱导胚性愈伤组织的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述消毒处理步骤为:将蒴果置于20%的次氯酸钠...
【专利技术属性】
技术研发人员:张永侠,原海燕,杨永恒,刘清泉,王银杰,顾春笋,徐晓洋,张婷,孙玉明,黄苏珍,
申请(专利权)人:江苏省中国科学院植物研究所,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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