一种生长调节剂对蓝果忍冬叶片愈伤组织的诱导方法技术

一种生长调节剂对蓝果忍冬叶片愈伤组织的诱导方法属于植物组织培养领域，该方法包括以下步骤：用两品种的无菌苗叶片，以MS为基本培养基，选用6‑BA、2,4‑D、TDZ、ZT和CPPU五种生长调节剂单独进行诱导。选用6‑BA和2,4‑D生长调节剂组合，TDZ和ZT生长调节剂组合进行诱导。每处理5‑6瓶，每瓶3‑10个外植体，重复2‑3次。暗处理14‑15天后置于光下培养。叶片在培养基培养40天后调查愈伤组织诱导情况。通过不同方法诱导蓝果忍冬叶片愈伤组织。利用叶片进行愈伤组织诱导具有取材广，效率高的特点，可提高苗木快繁效率，是离体再生体系的建立的基础具有广泛的应用价值和发展前景。

Induction of Callus from Lonicera japonica Leaves by a Growth Regulator

The method of inducing callus of Lonicera japonica Leaves by a growth regulator belongs to the field of plant tissue culture. The method includes the following steps: using two kinds of sterile seedling leaves and MS as basic medium, using 6 BA, 2,4 D, TDZ, ZT and CPPU as five growth regulators to induce callus individually. The combination of 6 BA and 2,4 D growth regulators, TDZ and ZT growth regulators were selected for induction. Each treatment consisted of 5 6 bottles, 3 10 explants per bottle, and repeated 2 3 times. After 14 to 15 days of dark treatment, the cells were cultured under light. The callus induction of leaves was investigated after 40 days of culture in medium. Leaf callus of Lonicera japonica was induced by different methods. Callus induction with leaves has the characteristics of wide selection and high efficiency, which can improve the efficiency of rapid propagation of seedlings. It is the basis of establishment of in vitro regeneration system and has broad application value and development prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种生长调节剂对蓝果忍冬叶片愈伤组织的诱导方法
本专利技术属于植物组织培养领域，主要涉及一种诱导愈伤组织的方法。
技术介绍
植物生长调节剂在以组培技术为基础的果树育种方面发挥重要作用，随着化学合成的发展，越来越多新型的植物生长调节剂被开发出来，它们往往在胚培养、花药花粉培养等方面表现突出。其中细胞分裂素可促进细胞的分裂、伸长和分化，生长素类一般可以促进生根，GA3可以加速细胞的伸长生长，促进细胞分裂，但多数情况下，其对组培中器官和胚状体的形成有抑制作用。此外不同生长调节剂的组合效应广泛应用于植物组织培养，最经典的理论为细胞分裂素与生长素的比例大于1时有利于长芽，小于1时有利于生根，比例接近1时，外植体呈无分化的状态。在组培快繁和离体植株再生过程中，植物生长调节剂发挥着重要作用，往往通过施用不同的植物生长调节剂或单纯改变生长调节剂的浓度就可使组培快繁过程的分化率和增殖系数大大增加，而生长调节剂在离体植株再生过程中更是有着不可忽视的关键性作用，植物激素和植物生长调节剂作为第一信使，通过植物体内的各种信号系统调控基因活性，控制相关基因的表达，进而促进或抑制离体器官的发生，不同生长调节剂对愈伤组织诱导及器官再生的效用不同，同一生长调节剂不同浓度的作用效果也不同[98]。因此研究植物生长调节剂在组培快繁和离体植株再生过程中的作用是建立组培快繁体系和离体植株再生体系的重要方面，当然除了植物生长调节剂，其他条件如外植体类型、基本培养基、不同基因型、有机物等外源添加物、温度湿度光照等环境条件也有重要影响。研究蓝果忍冬的组培快繁体系，不仅可以快速繁殖优良品系，而且能够加快新品种选育进程，快速保护优质资源，有助于解决生产中由于快速发展而无优良苗木的问题，更有助于以组培技术为基础的其他如遗传转化、分子生物学的研究。而研究蓝果忍冬的离体再生技术，可有助于以该技术为基础的遗传转化、体细胞杂交、倍性育种、诱变育种等一系列生物技术育种的开展和应用，从而大大提高育种效率，拓宽育种途径。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有诱导蓝果忍冬愈伤组织技术的不足，提供一种诱导蓝果忍冬叶片愈伤组织方法，达到丰富蓝果忍冬叶片愈伤组织技术的目的。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：1、一种诱导蓝果忍冬叶片愈伤组织方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)以MS为基本培养基，选用6-BA、2,4-D、TDZ、ZT和CPPU五种生长调节剂，浓度为0.5-2.0mg/L；(2)用两品种的无菌苗叶片，暗处理14-15天后置于光下培养。叶片在培养基培养39-40天后调查愈伤组织诱导情况；(3)6-BA设置两种1.0-2.0mg/L不同浓度：2,4-D设置0.2-1.0mg/L三种不同浓度随机组成6个组合；(4)TDZ设置1.0-2.0mg/L两种不同浓度，ZT设置三种0.1-1.0mg/L不同浓度随机组成6个组合。2、根据权利要求1所述的一种诱导愈伤组织的方法，其特征在于，每个步骤处理均为每处理5-6瓶，每瓶3-10个外植体，重复2-4次。3、根据权利要求1所述的一种诱导愈伤组织的方法，其特征在于，暗处理15天后置于光下培养。4、根据权利要求1所述的一种诱导愈伤组织的方法，其特征在于，叶片在培养基培养40天后调查愈伤组织诱导情况。本方法分别探究单个不同生长调节剂对于蓝果忍冬叶片愈伤组织诱导效果，又探讨不同生长调节剂组合对于蓝果忍冬叶片愈伤组织的影响，以此来探究不同生长调节剂组合中最适于诱导蓝果忍冬叶片愈伤组织的技术。该方法与传统方法相比具有取材广，效率高的特点，可提高苗木快繁效率，是离体再生体系的建立的基础，具有广泛的应用价值和发展前景。附图说明附图1为本工艺技术路线图。具体实施方式实施例1：(1)以MS为基本培养基，选用6-BA、2,4-D、TDZ、ZT和CPPU五种生长调节剂，浓度为0.5-2.0mg/L；(2)用两品种的无菌苗叶片，暗处理14-15天后置于光下培养。叶片在培养基培养39-40天后调查愈伤组织诱导情况；(3)6-BA设置两种1.0-2.0mg/L不同浓度：2,4-D设置0.2-1.0mg/L三种不同浓度随机组成6个组合；(4)TDZ设置1.0-2.0mg/L两种不同浓度，ZT设置三种0.1-1.0mg/L不同浓度随机组成6个组合。实施例2：(1)以MS为基本培养基，选用6-BA、2,4-D、TDZ、ZT和CPPU五种生长调节剂，浓度为0.5-2.0mg/L；(2)用两品种的无菌苗叶片，暗处理14-15天后置于光下培养。叶片在培养基培养39-40天后调查愈伤组织诱导情况；(3)6-BA设置两种1.0-2.0mg/L不同浓度：2,4-D设置0.2-1.0mg/L三种不同浓度随机组成6个组合；(4)TDZ设置1.0-2.0mg/L两种不同浓度，ZT设置三种0.1-1.0mg/L不同浓度随机组成6个组合。实施例3：(1)以MS为基本培养基，选用6-BA、2,4-D、TDZ、ZT和CPPU五种生长调节剂，浓度为0.5-2.0mg/L；(2)用两品种的无菌苗叶片，暗处理14-15天后置于光下培养。叶片在培养基培养39-40天后调查愈伤组织诱导情况；(3)6-BA设置两种1.0-2.0mg/L不同浓度：2,4-D设置0.2-1.0mg/L三种不同浓度随机组成6个组合；(4)TDZ设置1.0-2.0mg/L两种不同浓度，ZT设置三种0.1-1.0mg/L不同浓度随机组成6个组合。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生长调节剂对蓝果忍冬叶片愈伤组织的诱导方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)以MS为基本培养基，选用6‑BA、2,4‑D、TDZ、ZT和CPPU五种生长调节剂，浓度为0.5‑‑2.0mg/L；(2)用两品种的无菌苗叶片，暗处理14‑‑16天后置于光下培养；叶片在培养基培养39‑41天后调查愈伤组织诱导情况；(3)使用两个6‑BA不同浓度，2,4‑D三个浓度随机组成5‑6个组合；(4)TDZ两个不同浓度，ZT三个不同浓度，随机组成5‑6个组合。

【技术特征摘要】
1.一种生长调节剂对蓝果忍冬叶片愈伤组织的诱导方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)以MS为基本培养基，选用6-BA、2,4-D、TDZ、ZT和CPPU五种生长调节剂，浓度为0.5--2.0mg/L；(2)用两品种的无菌苗叶片，暗处理14--16天后置于光下培养；叶片在培养基培养39-41天后调查愈伤组织诱导情况；(3)使用两个6-BA不同浓度，2,4-D三个浓度随机组成5-6个组...

【专利技术属性】
技术研发人员：霍俊伟，张妍，张丹妮，秦栋，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23