一种基于疏水基团修饰的SUMO化肽段的富集方法技术

本发明专利技术涉及一种基于疏水基团修饰的SUMO化肽段的富集方法，包括：封闭多肽侧链的自由氨基、强疏水基团标记、反相色谱固定相富集。首先对SUMO化修饰的蛋白质样品进行酶解，在肽段水平上特异性封闭多肽侧链的自由氨基，然后通过SUMO化肽段的两个N端的α‑氨基引入两个强疏水基团，非SUMO化肽段引入一个强疏水基团，最后依据两类肽段在反相色谱固定相上保留行为的差异实现SUMO化肽段与非SUMO化肽段的分离，从而实现对蛋白质样品中的SUMO化肽段的富集。本发明专利技术的优点是标记效率高、去除效率高、选择性高、处理步骤简单、且减少了样品的损失和非特异性吸附。

【技术实现步骤摘要】
一种基于疏水基团修饰的SUMO化肽段的富集方法
本专利技术涉及SUMO化肽段的富集方法，即一种基于疏水基团修饰的SUMO化肽段的富集方法，以实现复杂蛋白质样品SUMO化肽段的高效和高选择性富集。
技术介绍
泛素化修饰是生物体内常见的翻译后修饰之一，也是最早发现的一种与蛋白质相连的修饰方式，在蛋白质降解方面发挥着重要作用。近十几年来科学家们相继发现了一些类泛素蛋白，其中小泛素相关修饰物(smallubiquitin-likemodifiers,SUMO)是最受瞩目的一类。SUMO在多个细胞生理活动中都发挥着重要的调节作用，例如维持基因组稳定性、调节细胞周期、调控细胞分化和转录因子活性、参与信号转导等。许多SUMO修饰蛋白如转录因子在细胞中的丰度很低，并且在正常状态下只有小部分蛋白质底物被修饰。在进行质谱分析时，复杂样品中蛋白质的浓度范围很广，高丰度的蛋白质会对低丰度SUMO修饰蛋白质质谱信号产生抑制。此外，在对蛋白质SUMO修饰多肽(位点)进行分析时，SUMO修饰蛋白质酶解产物中大量的非修饰肽段对SUMO修饰肽段产生极大干扰。上述因素严重影响了SUMO修饰蛋白及其修饰位点的鉴定和定量效本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于疏水基团修饰的SUMO化肽段的富集方法，包括：封闭酶解后蛋白中的多肽侧链的自由氨基；肽段N端修饰上强疏水基团；反相色谱固定相分离疏水性差异明显的SUMO化肽段与非SUMO化肽段，从而实现SUMO化肽段的富集。

【技术特征摘要】
1.一种基于疏水基团修饰的SUMO化肽段的富集方法，包括：封闭酶解后蛋白中的多肽侧链的自由氨基；肽段N端修饰上强疏水基团；反相色谱固定相分离疏水性差异明显的SUMO化肽段与非SUMO化肽段，从而实现SUMO化肽段的富集。2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：封闭多肽侧链的自由氨基的过程，采用特殊试剂特异性地封闭多肽中赖氨酸侧链的自由氨基，而不封闭肽段N端的α-氨基；试剂有醛类、酸酐类、卤化物、胍基化试剂、琥珀酰化类或Traut’s试剂中的一种或二种以上。3.按照权利要求1所述的方法，特征在于：肽段N端修饰上强疏水基团的过程，采用带有碳链的氨基活性试剂作为强疏水基团标记肽段N端的α-氨基。4.按照权利要求1所述的方法，特征在于：采用反相色谱固定相分离SUMO化肽段与非SUMO化肽段的过程，利用标记后SUMO化肽段与非SUMO化肽段间的疏水性差异，在反相色谱固定相上分离SUMO化肽段与非SUMO化肽段，从而实现SUMO化肽段的富集。5.按照权利要求1或2所述的方法，其特征在于：封闭多肽侧链的自由氨基的过程，1)所述的能够特异性地封闭多肽中赖氨酸侧链的自由氨基的试剂有醛类、酸酐类、卤化物、胍基化试剂、琥珀酰化类或Tra...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，李洋，单亦初，杨开广，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁,21