CD40L-FC融合多肽及其使用方法技术

本文提供了CD40L‑Fc融合蛋白和使用该融合蛋白治疗癌症的方法，该方法包括给予该CD40L‑Fc融合蛋白、或给予该CD40L‑Fc融合蛋白与一种或多种免疫检查点抑制剂(例如，抗CTLA4抗体、抗PD‑L1抗体)的组合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD40L-FC融合多肽及其使用方法相关申请的交叉引用本专利申请要求2016年5月13日提交的美国临时专利申请号62/336,129的权益，该临时专利申请通过引用以其全文并入本文。序列表的引用本申请通过引用结合作为文本文件与本申请一起提交的序列表，该文本文件名称为“CD40F-100-WO-SeqListing.txt”，其创建于2017年5月11日，并且具有41,547字节的大小。
技术介绍
癌症一直是主要的全球健康负担。尽管在癌症的治疗方面有所进展，但对于更有效且毒性更小的疗法仍然存在未满足的医疗需求，尤其对于患有对现有治疗具有抗性的晚期疾病或癌症的那些患者。免疫系统，特别是T细胞介导的细胞毒性在肿瘤控制中的作用是公认的。有越来越多的证据表明T细胞在癌症患者中控制肿瘤生长和存活，无论是在该疾病的早期和晚期阶段。然而，肿瘤特异性T细胞应答很难在癌症患者中上升和维持。迄今为止受到显著关注的T细胞通路包括通过毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4，CD152)和程序性死亡配体1(PD-L1，也被称为B7-H1或CD274)发信号。然而最近，对CD40配体(CD40L)作为肿瘤控制的介质产生了兴趣。CD40L是TNF分子家族的成员，其主要在激活的T细胞(包括Th0、Th1和Th2亚型)上表达，并形成与该家族的其他成员类似的同源三聚体。此外，还发现CD40L在肥大细胞和激活的嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞上表达。CD40L与抗原呈递细胞(APC)上的其受体CD40结合，这导致取决于靶细胞类型的许多作用。通常，CD40L起到共刺激分子的作用并通过APC上的MHC分子诱导与T细胞受体刺激相关的APC中的激活。尽管在过去十年在开发用于对抗癌症和其他疾病的策略中做出了显著的进步，但是患有晚期、难治性和转移性疾病的患者具有有限的临床选择。化疗、放射、和高剂量化疗已成为剂量限制。仍然存在对新的毒性更少的方法和具有更好的疗效、更长的临床益处、和改进的安全性特性的治疗的大量未满足的需要，特别是对于患有对现有的治疗具有抗性的晚期疾病或癌症的那些患者。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术提供了一种融合蛋白(例如，CD40L-Fc融合蛋白)，该融合蛋白包括经由肽接头彼此共价连接的三个CD40配体(CD40L)亚基或其片段(scCD40L)的单链融合；和Fc单体，其中该scCD40L经由肽接头与Fc单体共价连接。在另一个方面，本专利技术提供了两种融合蛋白(例如，CD40L-Fc融合蛋白)的二聚体，每种融合蛋白包括经由肽接头彼此共价连接的三个CD40配体(CD40L)亚基或其片段(scCD40L)的单链融合；和Fc单体，其中该scCD40L经由肽接头与Fc单体共价连接，并且其中该二聚体经由Fc单体的相互作用而形成。在一个特定方面，本专利技术提供了一种含有单链融合的融合蛋白，该单链融合从N-末端到C-末端包括具有如下氨基酸序列的第一CD40L亚基：NPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLWLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL(SEQIDNO:1)该第一CD40L亚基与具有如下氨基酸序列的第一肽接头共价连接：GGGGSGGGS(SEQIDNO:2)该第一肽接头与具有如下氨基酸序列的第二CD40L亚基共价连接：QIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLWLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL(SEQIDNO:3)该第二CD40L亚基与具有如下氨基酸序列的第二肽接头共价连接：GGGGSGGGS(SEQIDNO:2)该第二肽接头与具有如下氨基酸序列的第三CD40L亚基共价连接：QIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLWLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL(SEQIDNO:3)该第三CD40L亚基与具有如下氨基酸序列的第三肽接头共价连接：GGGGSGGGGSGGGGS(SEQIDNO:4)该第三肽接头与Fc多肽共价连接。在另一个方面，本专利技术提供了激活CD40多肽的方法，该方法涉及使CD40多肽与根据本文描述的任何方面的分离的融合蛋白(例如，CD40L-Fc融合蛋白)接触。在另一个方面，本专利技术提供了在受试者中增强抗肿瘤免疫应答的方法，该方法涉及向受试者给予根据本文描述的任何方面的分离的融合蛋白(例如，CD40L-Fc融合蛋白)。在另一个方面，本专利技术提供了治疗患有癌症的受试者的方法，该方法涉及向受试者给予根据本文描述的任何方面的分离的融合蛋白(例如，CD40L-Fc融合蛋白)，和任选的一种或多种免疫检查点抑制剂。在另一个方面，本专利技术提供了含有编码根据本文描述的任何方面的融合蛋白(例如，CD40L-Fc融合蛋白)的核酸分子的多核苷酸。在相关方面，本专利技术提供了含有根据本文描述的任何方面的多核苷酸的载体。在另一个相关方面，本专利技术提供了含有根据本文描述的任何方面的载体的宿主细胞，该宿主细胞包括表达根据本文描述的任何方面的分离的融合蛋白(例如，CD40L-Fc融合蛋白)的宿主细胞。在另一个方面，本专利技术提供了制备根据本文描述的任何方面的融合蛋白(例如，CD40L-Fc融合蛋白)的方法，该方法涉及培养根据本文描述的任何方面的宿主细胞；和分离融合蛋白。在另一个方面，本专利技术提供了一种试剂盒，该试剂盒含有本文描述的任何方面的分离的融合蛋白(例如，CD40L-Fc融合蛋白)、多核苷酸、载体或宿主细胞。在本文描述的任何方面的不同的实施例中，融合蛋白(例如，CD40L-Fc融合蛋白)结合并激活CD40(例如，CD40激动剂)。在不同的实施例中，scCD40L折叠为CD40L同源三聚体。在不同的实施例中，分离的融合蛋白(例如，CD40L-Fc融合蛋白)是二聚体。在不同的实施例中，CD40L亚基与Fc单体的比率为3:1。在不同的实施例中，分离的融合蛋白在约21℃或更高温度下具有小于约10％的聚集，持续至少3天。在不同的实施例中，分离的融合蛋白在约21℃下具有小于约1％的聚集，持续至少7天或更长时间。在某些实施例中，分离的融合蛋白在约45℃下具有小于约10％的聚集，持续至少3天或更长时间。在本文描述的任何方面的不同的实施例中，CD40L-Fc融合蛋白或CD40L亚基包括与如下具有至少约85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：QIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLWLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合蛋白，该融合蛋白包含：(a)单链融合，该单链融合包含经由肽接头彼此共价连接的三个CD40配体(CD40L)亚基或其片段(scCD40L)；和(b)Fc单体，其中该scCD40L经由肽接头与Fc单体共价连接。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.13 US 62/3361291.一种融合蛋白，该融合蛋白包含：(a)单链融合，该单链融合包含经由肽接头彼此共价连接的三个CD40配体(CD40L)亚基或其片段(scCD40L)；和(b)Fc单体，其中该scCD40L经由肽接头与Fc单体共价连接。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其中这些CD40L亚基包含与SEQIDNO:3具有至少约85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的融合蛋白，其中一个或多个CD40L亚基包含在位置74处的Trp残基。4.如权利要求3所述的融合蛋白，其中该在位置74处的Trp残基是C→W取代。5.如权利要求1-4中任一项所述的融合蛋白，其中一个或多个CD40L亚基包含人CD40L序列。6.如权利要求1-5中任一项所述的融合蛋白，其中该scCD40L与Fc单体的N-末端或C-末端连接。7.如权利要求1-6中任一项所述的融合蛋白，其中该Fc单体包含铰链区。8.如权利要求1-7中任一项所述的融合蛋白，其中该Fc单体包含人Fc序列。9.如权利要求1-8中任一项所述的融合蛋白，其中该Fc单体包含人IgG4氨基酸序列。10.如权利要求1-9中任一项所述的融合蛋白，其中与这些CD40L亚基或其片段共价连接的这些肽接头包含约9至约20个氨基酸。11.如权利要求1-10中任一项所述的融合蛋白，其中与这些CD40L亚基或其片段共价连接的这些肽接头包含约9至约15个氨基酸。12.如权利要求1-11中任一项所述的融合蛋白，其中与这些CD40L亚基或其片段共价连接的这些肽接头包含9个氨基酸。13.如权利要求1-12中任一项所述的融合蛋白，其中这些肽接头包含一个或多个甘氨酸(Gly)或丝氨酸(Ser)残基。14.如权利要求1-13中任一项所述的融合蛋白，其中这些接头是(Gly4Ser)n(SEQIDNO:5)，其中n是选自2、3和4的正整数；(Gly3Ser)n(SEQIDNO:6)，其中n选自3、4和5；Gly(Gly3Ser)n(SEQIDNO:7)，其中n选自2、3和4；或Gly(Gly2Ser)n(SEQIDNO:8)，其中n选自3、4、5和6。15.如权利要求1-14中任一项所述的融合蛋白，其中这些接头是SEQIDNO:4或SEQIDNO:2。16.如权利要求1-15中任一项所述的融合蛋白，其中该scCD40L折叠为CD40L同源三聚体。17.如权利要求1-16中任一项所述的融合蛋白，其中这些CD40L亚基与该Fc单体的比率为3:1。18.一种融合蛋白，该融合蛋白包含：单链融合，该单链融合从N-末端到C-末端包含具有SEQIDNO:1的氨基酸序列的第一CD40L亚基，该第一CD40L亚基与具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的第一肽接头共价连接，该第一肽接头与具有SEQIDNO:3的氨基酸序列的第二CD40L亚基共价连接，该第二CD40L亚基与具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的第二肽接头共价连接，该第二肽接头与具有SEQIDNO:3的氨基酸序列的第三CD40L亚基共价连接，该第三CD40L亚基与具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的第三肽接头共价连接，且该第三肽接头与Fc多肽共价连接。19.如权利要求1-18中任一项所述的融合蛋白，该融合蛋白包含SEQIDNO:9；SEQIDNO:10；或SEQIDNO:11的氨基酸序列。20.如权利要求1-19中任一项所述的融合蛋白，其中该分离的融合蛋白在约21℃或更高温度下具有小于约10％的聚集，持续至少3天。21.如权利要求20所述的融合蛋白，其中该分离的融合蛋白在约21℃下具有小于约1％的聚集，持续至少7天或更长时间。22.如权利要求1-19中任一项所述的融合蛋白，其中该分离的融合蛋白在约45℃下具有小于约10％的聚集，持续至少3天或更长时间。23.一种二聚体，该二聚体包含两种融合蛋白，每种融合蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：M巴卡，S德拉比奇，P恩塔奇，R赫布斯特，
申请(专利权)人：免疫医疗有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US