鸡传染性法氏囊病病毒的融合蛋白及其制备方法、应用、表达系统和疫苗技术方案

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种鸡传染性法氏囊病病毒的融合蛋白及其制备方法、应用、表达系统和疫苗。融合蛋白包括VP2区段和VP3区段，其中，VP2区段由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列表达，VP3区段由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列表达。该融合蛋白是将鸡传染性法氏囊病病毒的VP2和VP3的基因序列进行串联表达得到，本发明专利技术通过对VP2和VP3的基因序列进行分析，选取其中抗原性好，易高表达的区域进行串联，得到的融合蛋白具有抗原性好，表达量高的优点。将该融合蛋白作为抗原制备疫苗具有安全性好，效价稳定，无毒副作用的优势。本发明专利技术有提供了融合蛋白的制备方法和应用以及制备的疫苗。

Fusion protein of chicken infectious bursal disease virus and its preparation, application, expression system and vaccine

The invention relates to the field of biotechnology, in particular to providing a fusion protein of chicken infectious bursal disease virus and its preparation method, application, expression system and vaccine. The fusion protein consists of VP2 and VP3 segments, in which VP2 is expressed by the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO.1 and VP3 is expressed by the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO.2. The fusion protein is obtained by tandem expression of VP2 and VP3 gene sequences of chicken infectious bursal disease virus. By analyzing VP2 and VP3 gene sequences, the fusion protein has the advantages of good antigenicity and high expression. Using the fusion protein as antigen to prepare vaccine has the advantages of good safety, stable titer and non-toxic side effects. The invention provides a preparation method and application of fusion protein and a prepared vaccine.

【技术实现步骤摘要】
鸡传染性法氏囊病病毒的融合蛋白及其制备方法、应用、表达系统和疫苗
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种鸡传染性法氏囊病病毒的融合蛋白及其制备方法、应用、表达系统和疫苗。
技术介绍
鸡传染性法氏囊病(Infectiousbursaldisease，IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectiousbursaldiseasevirus，IBDV)引起的3-12周龄雏鸡及青年鸡鸡的一种急性、高度接触性免疫抑制传染病。IBDV为无囊膜病毒，双节段、双链RNA基因组，呈二十面体对称结构，大小为60-70nm。其核衣壳有dsRNA(双链核糖核酸)和蛋白质组成。除完整的病毒粒子外，还常见无核酸结构的病毒空衣壳。负染病毒三维立体结构电镜观察表明，IBDV病毒颗粒并非球形，呈T＝13对称，五倍轴延伸直径为72nm，而三倍轴延伸直径为66nm。IBDV主要以侵害雏鸡淋巴组织，特别是中枢免疫器官-法氏囊为主要特征，导致鸡只发生传染性法氏囊病。鸡传染性法氏囊病是危害养鸡业的重要传染病之一。病鸡表现为啄肛，减料，精神沉郁，羽毛蓬乱，被毛逆立，嗜睡，眼睑闭合，不愿走动，白色或水样腹泻，肛门周围羽毛污浊。由于继发感染其他病原微生物，在感染后的第二天开始陆续有死亡现象出现，死亡高峰期一般在感染后的第3-4天，第5-7天后开始恢复。目前国内外预防鸡传染性法氏囊病的疫苗多为灭活疫苗、活毒疫苗、重组活病毒载体疫苗等，在使用过程中发现有较多不足，主要体现在：活毒疫苗易造成法氏囊损伤，可能干扰其他疫苗的效力；重组疫苗制苗成本高，保护率低等。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种鸡传染性法氏囊病病毒的融合蛋白，该融合蛋白将鸡传染性法氏囊病病毒的VP2和VP3蛋白进行串联表达，以缓解现有技术中，预防鸡传染性法氏囊病的疫苗抗原来源不安全，效力不稳定的技术问题。本专利技术的另一个目的在于提供一种上述融合蛋白答制备方法，该制备方法可以实现大量表达高质量的上述融合蛋白。本专利技术的另一个目的在于提供一种能够表达上述融合蛋白的蛋白表达系统，可以直接快速大量得到上述融合蛋白。本专利技术的另一个目的在于提供上述融合蛋白的应用。本专利技术的另一个目的在于提供一种含有上述融合蛋白的疫苗，该疫苗免疫原性好，效价高，以缓解现有技术中疫苗安全性低，效力差或不稳定，生产成本高并且保护率低等技术问题。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种鸡传染性法氏囊病病毒的融合蛋白，包括VP2区段和VP3区段；所述VP2区段由SEQIDNO.1所示的核苷酸序列表达，所述VP3区段由SEQIDNO.2所示的核苷酸序列表达。进一步地，VP2区段和VP3区段的排列顺序为VP2-VP3，通过Linker连接；所述Linker具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列。进一步地，所述融合蛋白具有如SEQIDNO.4所示的氨基酸序列。一种上述融合蛋白的制备方法，将编码所述融合蛋白的基因在宿主中表达。进一步地，使用哺乳动物表达系统表达编码所述融合蛋白的基因；优选地，使用CHO细胞表达系统表达编码所述融合蛋白的基因；优选地，提供包含编码所述融合蛋白的基因的表达载体，将所述表达载体导入CHO细胞中，然后对CHO细胞进行筛选，得到稳定表达所述融合蛋白的CHO细胞株，所述CHO细胞株表达得到所述融合蛋白；优选地，所述筛选包括加压筛选和单克隆筛选；优选地，所述制备方法中还包括将稳定表达所述融合蛋白的CHO细胞驯化为悬浮培养的步骤。进一步地，使用谷氨酰胺合成酶筛选扩增系统筛选表达所述融合蛋白的CHO细胞株；优选地，所述谷氨酰胺合成酶筛选扩增系统中使用的表达载体为pEE6.4或pEE12.4。一种能够表达上述融合蛋白的蛋白表达系统。上述融合蛋白或制备方法制备得到的融合蛋白的应用，包括如下A)-D)中的至少一种：A)制备鸡传染性法氏囊病病毒疫苗；B)制备鸡传染性法氏囊病病毒的抗体；C)制备检测鸡传染性法氏囊病病毒的试剂盒；D)制备鸡传染性法氏囊病病毒诊断抗原。一种含有上述融合蛋白的鸡传染性法氏囊病病毒疫苗。进一步地，鸡传染性法氏囊病病毒疫苗中所述融合蛋白的浓度为20-100μg/ml，优选30-80μg/ml，更优选50μg/ml；优选地，所述疫苗还包括辅料，所述辅料包括疫苗佐剂、稳定剂和抗生素中的至少一种；优选地，所述疫苗佐剂包括氢氧化铝胶、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、白油佐剂、MF59佐剂或ISA201VG，优选使用ISA201VG。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供一种鸡传染性法氏囊病病毒的融合蛋白，包括VP2区段和VP3区段，其中，VP2区段由SEQIDNO.1所示的核苷酸序列表达，VP3区段由SEQIDNO.2所示的核苷酸序列表达。该融合蛋白是将鸡传染性法氏囊病病毒的VP2和VP3的基因序列进行串联表达得到，本专利技术通过对VP2和VP3的基因序列进行分析，选取其中抗原性好，易高表达的区域进行串联，得到的融合蛋白具有抗原性好，表达量高的优点。将该融合蛋白作为抗原制备疫苗具有安全性好，效价稳定，无毒副作用的优势。本专利技术提供上述融合蛋白的制备方法，该方法将编码上述融合蛋白的基因序列在宿主中表达即可。本专利技术提供能够表达上述融合蛋白的蛋白表达系统，该表达系统可以但不限为重组载体，重组细胞等含有表达上述融合蛋白基因序列的系统，利用该蛋白表达系统可以简便快捷地纯化得到大量的上述融合蛋白。本专利技术提供的上述含有上述融合蛋白的疫苗，该疫苗安全性好，不会引起不良反应，不会产生无关的抗体，同时效价高并且稳定性好，降低了性法氏囊病疫苗的生产成本，保护率高。附图说明图1为本专利技术实施例2中PEE6.4-VP2-VP3质粒图谱示意图；图2为本专利技术实施例2中PEE6.4-VP2-VP3质粒的PCR鉴定凝胶电泳结果图；图3为本专利技术实施例2中PEE6.4-VP2-VP3质粒双酶切鉴定凝胶电泳结果图；图4为本专利技术实施例6中融合蛋白SDS-PAGE检测结果图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。一种鸡传染性法氏囊病病毒的融合蛋白，包括VP2区段和VP3区段，其中，VP2区段由SEQIDNO.1所示的核苷酸序列表达，VP3区段由SEQIDNO.2所示的核苷酸序列表达。在IBDV结构蛋白中VP2和VP3是组成病毒核衣壳的主要成分。IBDV核衣壳的外表面有260个VP2三聚体形成，约占病毒蛋白的51％，在核衣壳的表面形成凸状结构。核衣壳的内表面由200个Y型VP3三聚体组成，约占病毒蛋白的40％。该融合蛋白是将鸡传染性法氏囊病病毒的VP2和VP3的基因序列进行串联表达得到，本专利技术通过对VP2和VP3的基因序列进行分析，选取其中抗原性好，易高表达的区域进行串联，得到的融合蛋白具有抗原性好，表达量高的优点。将该融合蛋白作为抗原制备疫苗具有安全性好，效价稳定，无毒副作用的优势。在本专利技术一些实施方式中，VP2区段和VP3区段的排列顺序为VP2-VP3，通过Linker连接，其中，Linker具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列。通过用L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡传染性法氏囊病病毒的融合蛋白，其特征在于，包括VP2区段和VP3区段；所述VP2区段由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列表达，所述VP3区段由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列表达。

【技术特征摘要】
1.一种鸡传染性法氏囊病病毒的融合蛋白，其特征在于，包括VP2区段和VP3区段；所述VP2区段由SEQIDNO.1所示的核苷酸序列表达，所述VP3区段由SEQIDNO.2所示的核苷酸序列表达。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，VP2区段和VP3区段的排列顺序为VP2-VP3，通过Linker连接；所述Linker具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有如SEQIDNO.4所示的氨基酸序列。4.一种权利要求1-3任一项所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，将编码所述融合蛋白的基因在宿主中表达。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，使用哺乳动物表达系统表达编码所述融合蛋白的基因；优选地，使用CHO细胞表达系统表达编码所述融合蛋白的基因；优选地，提供包含编码所述融合蛋白的基因的表达载体，将所述表达载体导入CHO细胞中，然后对CHO细胞进行筛选，得到稳定表达所述融合蛋白的CHO细胞株，所述CHO细胞株表达得到所述融合蛋白；优选地，所述筛选包括加压筛选和单克隆筛选；优选地，所述制备方法中还包括将稳定表达所述融合蛋白的CHO细胞驯化为悬浮培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，任立松，李延涛，任郭子君，
申请(专利权)人：天康生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆,65