The invention uses patient's peripheral blood for ctDNA sequencing or tumor tissue for whole exon sequencing, screens mutant sites for epitope prediction, links and synthesizes mutant polypeptide expression gene sequence; at the same time, constructs lentivirus vector, packages lentivirus, transfects APC cells, completes transformation of specific LV cells, co-cultures with PBMC isolated from peripheral blood in vitro, and screens out PBMC with mutant sites. Effective precise polypeptide, through the second shock of precise polypeptide stimulation, transforms ordinary T cells into LRFF cells with more precise killing ability, and improves the killing ability of T cells to cancer cells. The LRFF cells provided by the invention can be widely used in individualized and precise treatment of solid tumors.
【技术实现步骤摘要】
一种LRFF细胞的构建方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种LRFF细胞的构建方法。
技术介绍
目前，在肿瘤的特异性免疫治疗方面，现有的LAK、DC、CIK、DC-CIK细胞和方法基本被证明是无效的，而NK、CAR-NK、TIL等细胞技术还有待成熟，CAR－T细胞在安全性和实体瘤治疗中还有缺陷。现有技术一般通过改造DC细胞，由DC递呈T细胞产生特异杀伤。有些实验室在尝试用病毒做为载体的方法进行转染递呈T细胞，诱导T细胞的特异性杀伤。我们也曾用突变混合多肽直接刺激PBMC，诱导T细胞。以上治疗方法都有局限性，尤其是体外诱导DC细胞及DC细胞负载肿瘤抗原技术理论上研究较多，但在具体实施过程中还有许多问题，缺乏明确的、肿瘤细胞发生发展关键的信号传导通路相关分子作为诱导抗原，因为肿瘤抗原不明及肿瘤微环境免疫抑制的障碍，使实现特异性细胞靶向免疫治疗难以顺利实施。另外，有的虽然进行了抗原体外冲击，但没有进行体外共培育和体外扩增，让较为单薄的特异性细胞直接面对复杂的肿瘤免疫微环境，因此，很难起到预期的效果。也有的虽然也可以体外递呈和共培育，但靶点单一(MAGE-3)，仅...
【技术保护点】
1.一种LRFF细胞的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：1)使用人源外周血进行ctDNA测序或肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点；2)根据突变位点进行抗原表位预测，合成突变多肽的基因序列；3)构建表达突变多肽的慢病毒载体，包装慢病毒；4)转染抗原递呈细胞并与PBMC共培养，获得LFF细胞；4)所述突变多肽作为抗原刺激所述LFF细胞，筛选出有效的精准多肽；5)以所述精准多肽作为抗原再次刺激所述LFF细胞，筛选出能够识别所述精准多肽的特异性细胞，即得LRFF细胞。
【技术特征摘要】
1.一种LRFF细胞的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：1)使用人源外周血进行ctDNA测序或肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点；2)根据突变位点进行抗原表位预测，合成突变多肽的基因序列；3)构建表达突变多肽的慢病毒载体，包装慢病毒；4)转染抗原递呈细胞并与PBMC共培养，获得LFF细胞；4)所述突变多肽作为抗原刺激所述LFF细胞，筛选出有效的精准多肽；5)以所述精准多肽作为抗原再次刺激所述LFF细胞，筛选出能够识别所述精准多肽的特异性细胞，即得LRFF细胞。2.如权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：焦顺昌，张嵘，张天赋，周子珊，解佳森，王海燕，吴子明，
申请(专利权)人：北京鼎成肽源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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