GSDMD-N基因重组质粒及在乳腺表达的方法和应用技术

本发明专利技术公开一种GSDMD‑N基因重组质粒及在乳腺表达的方法和应用，通过构建GSDMD‑N基因的表达重组质粒，使其在乳腺组织及乳腺细胞内特异性表达，从而达到对金黄色葡萄球菌感染的乳腺炎的防治目的，属于基因工程领域。GSDMD‑N蛋白是近年发现的可以特异性的识别细菌的生物膜成分心磷脂并与之相结合，进而形成大量蜂窝状孔道，使细菌崩解死亡的多肽类化合物。本技术通过乳腺生物反应器，利用乳腺组织的特异性启动子WAP使外源基因GSDMD‑N在动物乳腺中高效表达，并以此杀灭造成奶牛乳腺炎的金黄色葡萄球菌，从而达到预防和治疗由金黄色葡萄球菌感染造成的奶牛乳腺炎的目的。本发明专利技术提供的重组质粒及重组减毒沙门菌具有高效、安全、成本低等优点，为防治金黄色葡萄球菌感染所致奶牛乳腺炎提供新途径，具有良好的应用前景。

Recombinant plasmid of GSDMD-N gene and its application in breast expression

The present invention discloses a recombinant plasmid of GSDMD N gene and its method and application in breast expression. By constructing the recombinant plasmid of GSDMD N gene expression, the recombinant plasmid can be specifically expressed in breast tissue and breast cells, thus achieving the purpose of preventing and treating mastitis caused by Staphylococcus aureus infection, and belongs to the field of genetic engineering. GSDMD N protein is a recently discovered polypeptide compound that can specifically recognize and bind to cardiolipin, a biofilm component of bacteria, and then form a large number of honeycomb-like channels, causing bacterial disintegration and death. In this technique, the exogenous gene GSDMD N is highly expressed in mammary glands of animals through mammary gland bioreactor using WAP, a specific promoter of mammary tissue, in order to kill Staphylococcus aureus causing mastitis in dairy cows, so as to prevent and treat mastitis in dairy cows caused by Staphylococcus aureus infection. The recombinant plasmid and the recombinant attenuated Salmonella provided by the invention have the advantages of high efficiency, safety and low cost, and provide a new way for preventing and treating dairy cow mastitis caused by Staphylococcus aureus infection, and have a good application prospect.

【技术实现步骤摘要】
GSDMD-N基因重组质粒及在乳腺表达的方法和应用
：本专利技术提供了一种GSDMD-N基因重组质粒，是由鼠GSDMD-N基因构建而成的；本专利技术进一步提供了GSDMD-N基因重组质粒及其在乳腺表达的方法；利用减毒沙门菌使其在牛乳腺细胞及鼠乳腺组织中表达的方法，从而达到利用GSDMD-N蛋白对金黄色葡萄球菌感染的乳腺炎的防治目的，属于基因工程

技术介绍
：Gasdermin家族是一种含有DFNA5结构域的但是功能未知的蛋白家族，该家族主要有12个成员，该家族蛋白主要在肠道上皮和胃肠道上皮中表达，该家族蛋白的突变会造成毛囊生长发育异常，同时该家族的蛋白表达异常与肿瘤的发生密切相关，Gasdermin家族的成员N端有介导细胞焦亡的功能。GasdmerminD(GSDMD)蛋白是近Gasdermin家族年来发现的天然免疫防御分子，其前体不具有生物活性。当PRRs识别外源性的PAMP，或内源性的DAMP激活炎性体后，募集接头蛋白ASC和激活Caspase-1，4，5，进而剪切GSDMD产生具有生物活性的N末端GSDMD-N蛋白。GSDMD-N蛋白可以特异性的识别细菌的生物膜成分磷本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种GSDMD‑N基因重组质粒，其核苷酸序列如SEQ no.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种GSDMD-N基因重组质粒，其核苷酸序列如SEQno.1所示。2.如权利要求1所述的一种GSDMD-N基因重组质粒的制备方法，包括以下步骤：（1）GSDMD-N及相关基因的引物合成；引物如下：GSDMD-N-FGAATTCATGCCATCGGCCTTTGAGGSDMD-N-RGGATCCATCTGACAGGAGACTGAGCWAP-FCTCGAGGGCCACAGTGAAGACCTWAP-RGAATTCGGTGTCGGCGGCGGEGFP+His-FGGATCCATGGTGAGCAAGGGCGEGFP+His-RGGCCGCTTAATGATGATGGTGATGATGCTTGTACAGCTCGTCCAT（2）GSDMD-N及相关基因片段的Pcr扩增；（3）将各片段连接到克...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨勇军，颜世卿，马超颖，潘志明，马轲，陈巍，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22