The invention relates to an enterokinase light chain mutant and its application. The present invention discloses a sequence modified enterokinase light chain mutant, which has stronger enzyme activity, higher expression efficiency (including renaturation rate and recovery rate) and stability than the wild type.
【技术实现步骤摘要】
肠激酶轻链突变体及其应用
本专利技术属于生物工程领域，更具体地，本专利技术涉及一种肠激酶轻链突变体及其应用。
技术介绍
肠激酶(Enterokinase，EK)属于丝氨酸类的蛋白酶，主要出现在哺乳动物的十二指肠当中。肠激酶的轻链和重链两个亚单位构成了其主要结构，轻链作为酶的催化活性的中心，拥有全酶的催化活性，并且可以识别然后酶解专一性的氨基酸序列(Asp)4-Lys位点(DDDDK)，然后水解赖氨酸之后羧基末端的肽键来切割胰蛋白酶原，从而激活胰蛋白酶原，使胰蛋白酶具有活性。其还被广泛的被使用在了融合蛋白的技术当中。天然肠激酶是一个通过二硫键连接的异源二聚体，包括一条82-140KDa大小的重链和一条35-62KDa大小的轻链，肠激酶的两条链都包含30％-50％的碳水化合物。重链能将肠激酶锚定在肠膜上。在重链中还包含一个氨基末端的跨膜结构域，在识别小分子肽方面的影响很小，但是对识别特异性小分子物质和抑制剂方面有很大影响。轻链则是肠激酶的催化活性中心，包含一个糜蛋白酶样的丝氨酸蛋白酶结构域，氨基酸(Asp)4-Lys序列的专一性识别和酶解都是依靠轻链来实现的。使用基因...
【技术保护点】
1.一种肠激酶轻链突变体，其特征在于，其氨基酸序列在对应于SEQ ID NO:1氨基酸序列的第62位氨基酸突变为苏氨酸，第177位氨基酸突变为谷氨酸，以及第112位氨基酸突变为苏氨酸或丙氨酸。
【技术特征摘要】
1.一种肠激酶轻链突变体，其特征在于，其氨基酸序列在对应于SEQIDNO:1氨基酸序列的第62位氨基酸突变为苏氨酸，第177位氨基酸突变为谷氨酸，以及第112位氨基酸突变为苏氨酸或丙氨酸。2.如权利要求1所述的肠激酶轻链突变体，其特征在于，所述的第112位氨基酸突变为苏氨酸。3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸选自下组：(i)编码权利要求1所述的肠激酶轻链突变体的多核苷酸；或(ii)与(i)中的多核苷酸互补的多核苷酸。4.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。5.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求4所述的载体，或基因组中整合有权利要求3所述的多核苷酸。6.一种生产权利要求1所述的肠激酶轻链突变体的方法，其特征在于，包括步骤：(1)培养权利要求5所述的宿主...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵致，
申请(专利权)人：上海雅心生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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