【技术实现步骤摘要】
一种RASSF1A基因和P16基因甲基化检测的引物探针组合及其应用
本专利技术属于分子生物学
，涉及一种基因甲基化的检测产品，具体涉及一种RASSF1A基因和P16基因甲基化检测的引物探针组合及其应用。
技术介绍
原发性肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内，肝癌的发病率排行肿瘤第六位，死亡率则高居第三，每年新增病例超过60万。在中国，肝癌的发病率在所有肿瘤中居第三位，而其死亡率为第二位，每年约有23万人死于肝癌，占全世界肝癌死亡人数的55％。世界卫生组织指出：癌症患者如果能早期发现，治愈率可达到80％。然而肝癌早期无明显临床症状，发展快且易转移，目前临床上早期筛查HCC的主要指标是血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)水平和影像学B超监测，但是一部分HCC患者血清AFP长期保持低水平(<20ng/ml)，而B超在检测和进一步判断结节的特征时有一定的局限性，一旦发下大多已是中晚期，临床治疗效果不佳。但目前临床上未有十分有效的早期检测方法，因此建立高灵敏，经...
【技术保护点】
1.一种RASSF1A基因和P16基因甲基化检测的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括检测引物探针，所述检测引物探针由RASSF1A基因甲基化检测特异性引物对、RASSF1A基因特异性探针、P16基因甲基化检测特异性引物对和P16基因特异性探针。
【技术特征摘要】
1.一种RASSF1A基因和P16基因甲基化检测的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括检测引物探针，所述检测引物探针由RASSF1A基因甲基化检测特异性引物对、RASSF1A基因特异性探针、P16基因甲基化检测特异性引物对和P16基因特异性探针。2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述RASSF1A基因甲基化检测特异性引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示；优选地，所述RASSF1A基因特异性探针的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；优选地，所述P16基因甲基化检测特异性引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.4-5所示；优选地，所述P16基因特异性探针的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；优选地，所述引物探针组合还包括内参系统；优选地，所述内参系统包括内参基因引物对和内参探针；优选地，所述内参基因为β-actin基因；优选地，所述内参基因引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.7-8所示；优选地，所述内参探针的核苷酸序列如SEQIDNO.9所示。3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合，其特征在于，所述RASSF1A基因特异性探针、P16基因特异性探针和内参基因探针的5’端带有荧光基团；优选地，所述荧光基团为FAM、HEX或VIC中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述特异性探针与内参探针的5’端荧光基团不同；优选地，所述RASSF1A基因特异性探针和P16基因特异性探针的5’端1荧光基团为FAM；优选地，所述内参探针的5’端荧光基团为HEX；优选地，所述RASSF1A基因特异性探针、P16基因特异性探针和内参探针的3’端带有淬灭基团；优选地，所述淬灭基团选自MGB或BHQ，优选为MGB。4.一种检测RASSF1A基因和P16基因甲基化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的引物探针组合。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控、阳性质控和辅助试剂；优选地，所述阴性质控为RASSF1A基因和P16基因非甲基化片段；优选地，所述RASSF1A基因非甲基化片段的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；优选地，所述P16基因非甲基化片段的核苷酸序列如SEQIDNO.11所示；优选地，所述阳性质控为RASSF1A基因和P16基因甲基化片段；优选地，所述RASSF1A基因甲基化片段的核苷酸序列如SEQIDNO.12所示；优选地，所述P16基因甲基化片段的核苷酸序列如SEQIDNO.13所示；优选地，所述辅助试剂为RASSF1A基因检测预混液、P16基因检测预混液、微滴发生油、质控液和去离子水；优选地，所述RASSF1A基因检测预混液包括ddPCRsupermix、RASSF1A基因甲基化检测特异性引物对、RASSF1A基因甲基化特异性探针、内...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗敏，赵勇娟，韩玥斌，刘焕，
申请(专利权)人：天津智鱼生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12
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