本发明专利技术提供一种嵌合抗原受体修饰的T细胞（CAR‑T）的储存液，属于细胞生物学领域，是适合临床应用的CAR‑T细胞储存液的组合物。采用多种活性成分对储存条件进行优化，是含有腺苷、氯化钠、白蛋白、血管紧张素‑II、细胞来源的短肽和多肽类化合物、抗体T1，抗体T2，抗体T3，细胞因子白介素‑6的拮抗剂托珠单抗，细胞因子白介素‑15的水溶液。在上述储存液中，CAR‑T细胞在4‑8℃条件下在2天内的细胞活性保持在90%以上，杀伤效率保持在50%以上，细胞表型稳定。这种储存液保证了细胞的质量稳定，能够实现细胞的远距离运送，为临床细胞的广泛应用奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
一种嵌合抗原受体修饰的T细胞（CAR-T）的储存液
本专利技术属于医学生物
，具体涉及嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T)的储存液。
技术介绍
随着环境污染、人口老龄化、不良生活方式以及心理和精神等复合因素的影响，癌症的发病率在全世界范围内逐年上升，中国癌症的发病形势严峻，发病率与死亡率呈持续上升趋势，每年新发癌症病例约429.2万，因癌症死亡病例约281.4万。肺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌和食道癌是目前中国最普遍的恶性肿瘤类型，占所有癌症的64%；乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌、甲状腺癌和血液肿瘤则是发病率增长最快的几种类型。总体上看，各肿瘤发病率差别较大，缺乏有效的治疗手段。这些年，生物疗法包括细胞治疗在内的靶向治疗手段在肿瘤治疗领域产生了巨大的影响，成为了继手术、化疗、放疗后的新型肿瘤治疗方法，其中以嵌合抗原受体（chimericantigenreceptor，CAR）修饰的T细胞（CARTcells，CAR-T）靶向性治疗各种肿瘤的研究最为突出，在体外和临床试验中均表现出对肿瘤细胞良好的靶向杀伤效果。CAR的结构和生理性的T细胞表面受体（Tcellreceptor，TCR）相似，但T细胞以TCR引导杀伤肿瘤细胞时常受到人类白细胞抗原分子（humanleukocyteantigen，HLA）的限制,而肿瘤细胞限制HLA的表达，或通过改变肿瘤免疫微环境来逃避免疫系统的监视和攻击，从而限制T细胞的活化来抑制对肿瘤细胞的杀伤作用，也因此限制了TCR的进一步发展。但是CAR-T细胞与肿瘤抗原接触识别是通过表达于其表面的特定蛋白与肿瘤抗原特异性结合来识别肿瘤抗原，不需要依赖于抗原提呈细胞（antigenpresentingcell，APC）的加工和MHC的表达，克服了在抗原提呈过程中的免疫逃逸，增强其识别和杀伤肿瘤细胞的作用。目前，血液肿瘤和实体瘤方面都在进行着各种临床前和临床阶段的研究。在临床应用过程中，CAR-T细胞需要保存在专门配制的储存液中，随储存液一起输进患者体内。良好的储存液必须保持CAR-T细胞的活率及表型，并且不受运输时间和运输条件的限制。现有的储存液是沿用普通免疫细胞的储存液，在保存和运输过程中会影响细胞活性，进而影响CAR-T细胞的治疗效果。因此需要一种专门配置的储存液能实现以下优势，在24小时内实现4-8℃保存的CAR-T细胞的活性保持96%以上，在48小时内实现4-8℃保存的CAR-T细胞的活性保持90%以上，并且储存液的成分符合医用标准对人体安全可靠，这样储存的CAR-T细胞制剂可直接应用人体，在应用上将能够实现远距离运送和临床推广。
技术实现思路
为了解决CAR-T细胞制剂储存液的应用问题，本专利技术提供了一种CAR-T细胞制剂储存液的配比方案，使用该储存液能够实现CAR-T细胞制剂在4-8℃储存48小时而活率保持在90%以上，并且该储存液成分均为临床验证可应用的成分或注射试剂。本专利技术的技术方案如下：一种CAR-T细胞制剂的低温储存方法，其中采用多个活性成分对细胞储存条件进行优化，是含有腺苷、氯化钠、白蛋白、血管紧张素-II、细胞来源的短肽和多肽类化合物、抗体T1，抗体T2，抗体T3，细胞因子白介素-6的拮抗剂托珠单抗，细胞因子白介素-15的水溶液。各成分的浓度可以为：1）腺苷，0.5-2mmol/L；2）氯化钠，8.5-10g/L；3）白蛋白，10-100g/L；4）血管紧张素-II，50-400ng/mL；5）细胞的条件培养基中分离出的短肽和多肽类化合物，50-400ng/mL；6）抗体T1，10ng/mL-100ng/mL；7）抗体T2，10ng/mL-100ng/mL；8）抗体T3，10ng/mL-100ng/mL；9）白介素-6的拮抗剂托珠单抗，200ng/mL-3200ng/mL；10）白介素-15，50-400ng/mL。一种优选的配方是对上述成分进一步优化，各成分的浓度分别优化为：1）腺苷，1-2mmol/L；2）氯化钠，8.5-10g/L；3）白蛋白，30-100g/L；4）血管紧张素-II，100-400ng/mL；5）细胞的条件培养基中分离出的短肽和多肽类化合物，100-400ng/mL；6）抗体T1，20ng/mL-100ng/mL，；7）抗体T2，20ng/mL-100ng/mL；8）抗体T3，20ng/mL-100ng/mL；9）白介素-6的拮抗剂托珠单抗，400ng/mL-3200ng/mL；10）白介素-15，100-400ng/mL。前述的细胞储存液可以进一步优化，各成分的浓度优化为：1）腺苷，1.5-2mmol/L；2）氯化钠，9-10g/L；3）白蛋白，60-100g/L；4）血管紧张素-II，200-400ng/mL；5）细胞的条件培养基中分离出的短肽和多肽类化合物，200-400ng/mL；6）抗体-T1，40ng/mL-100ng/mL；7）抗体-T2，40ng/mL-100ng/mL；8）抗体-T3，40ng/mL-100ng/mL;9）白介素-6的拮抗剂托珠单抗，800ng/mL-3200ng/mL；10）白介素-15，200-400ng/mL。前述的细胞储存液可以进一步优化，各成分的浓度优化为：1）腺苷，1.5-2mmol/L；2）氯化钠，9-10g/L；3）白蛋白，80-100g/L；4）血管紧张素-II，300-400ng/mL；5）细胞的条件培养基中分离出的短肽和多肽类化合物，300-400ng/mL；6）抗体T1，80ng/mL-100ng/mL；7）抗体T2，80ng/mL-100ng/mL；8）抗体T3，80ng/mL-100ng/mL;9）白介素-6的拮抗剂托珠单抗，1600ng/mL-3200ng/mL；10）白介素-15，300-400ng/mL。在上述技术方案中，储存液各组分的作用如下：添加的腺苷可在保存过程中保持CAR-T细胞的ATP水平的稳定，保证CAR-T细胞生长必须的能量物质，其在CAR-T细胞代谢过程中有着重要的细胞营养作用，并可增加CAR-T细胞活性同时发挥细胞保护作用，通过直接升高细胞内ATP水平，能进入细胞内使细胞内外保持细胞的正常形态，防止低糖条件下造成的功能损伤。在储存液中加入适量的氯化钠，在生理盐水浓度下可有效调节溶液的渗透压，保持液体渗透压相对平衡，从而使细胞不受渗透压影响，使细胞内外保持细胞的正常形态，防止细胞的急速脱水造成的功能损伤。在储存液中加入适量的白蛋白，主要调节CAR-T细胞水分动态平衡，维持细胞溶液渗透压作用，也是一种CAR-T细胞的防冻保护剂，储存液中加入适量的医用白蛋白，保证了CAR-T细胞临床应用的安全性和可靠性。在储存液中加入适宜浓度血管紧张素-II，主要调节CAR-T细胞的活性状态，可促进CAR-T细胞的增殖、减少其凋亡，发挥促进CAR-T细胞存活、增殖和凋亡功能的作用，进而显著促进了CAR-T细胞临床应用的可靠性。在储存液中加入适宜浓度的从人脐带间充质干细胞的无血清培养液中收获的短肽和多肽类化合物。可以促进CAR-T细胞的增殖及迁移，抑制细胞的凋亡信号通路，有重要的临床应用价值。短肽和多肽类化合物来源丰富，易于获取，便于储存，有望成为重要的储存液添加物。在储本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体修饰的T细胞制剂的低温储存方法，其中采用多个活性成分对细胞储存条件进行优化，是含有腺苷、氯化钠、白蛋白、血管紧张素‑II、细胞来源的短肽和多肽类化合物、抗体T1，抗体T2，抗体T3，细胞因子白介素‑6的拮抗剂托珠单抗，细胞因子白介素‑15的水溶液。
【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体修饰的T细胞制剂的低温储存方法，其中采用多个活性成分对细胞储存条件进行优化，是含有腺苷、氯化钠、白蛋白、血管紧张素-II、细胞来源的短肽和多肽类化合物、抗体T1，抗体T2，抗体T3，细胞因子白介素-6的拮抗剂托珠单抗，细胞因子白介素-15的水溶液。2.如权利1要求所述的嵌合抗原受体CAR-T细胞储存液各成分的浓度可以为：1）腺苷，0.5-2mmol/L；2）氯化钠，8.5-10g/L；3）白蛋白，10-100g/L；4）血管紧张素-II，50-400ng/mL；5）细胞的条件培养基中分离出的短肽和多肽类化合物，50-400ng/mL；6）抗体T1，10ng/mL-100ng/mL；7）抗体T2，10ng/mL-100ng/mL；8）抗体T3，10ng/mL-100ng/mL；9）白介素-6的拮抗剂托珠单抗，200ng/mL-3200ng/mL；10）白介素-15，50-400ng/mL。3.如权利2要求所述的嵌合抗原受体CAR-T细胞储存液，优选的配方是对上述成分进一步优化，各成分的浓度分别优化为：1）腺苷，1-2mmol/L；2）氯化钠，8.5-10g/L；3）白蛋白，30-100g/L；4）血管紧张素-II，100-400ng/mL；5）细胞的条件培养基中分离出的短肽和多肽类化合物，100-400ng/mL；6）抗体T1，20ng/mL-100ng/mL，；7）抗体T2，20ng/mL-100ng/mL；8）抗体T3，20ng/mL-100ng/mL；9）IL-6的拮抗剂托珠单抗，400ng/mL-3200ng/mL；10）白介素-15，100...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘劼，梁爱斌，黄明辉，朱益辉，
申请(专利权)人：刘劼，梁爱斌，朱益辉，
类型：发明
国别省市：上海,31
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