从血清中提取载脂蛋白B的方法及载脂蛋白B技术

本发明专利技术提供了一种从血清中提取载脂蛋白B的方法及载脂蛋白B，涉及生物化学技术领域，本发明专利技术提供的从血清中提取载脂蛋白B的方法，包括将血清预处理后得到的载脂蛋白B粗样品经疏水层析，洗脱得到所述载脂蛋白B。本发明专利技术选用疏水层析的方法提取载脂蛋白B，显著提高了载脂蛋白B的纯化效率，既缓解了现有技术中应用化学沉淀法提取蛋白纯度低的问题，又避免了超速离心法成本高的问题，还能够大大提高提取得到的载脂蛋白B的浓度和纯度。并且，该方法操作简单，成本低廉，对设备及技术人员要求不高，易于推广应用。此外，还具有提取效果明显，回收率高，可处理量大的优点，为实现工业化大生产提供基础。

【技术实现步骤摘要】
从血清中提取载脂蛋白B的方法及载脂蛋白B
本专利技术涉及生物化学
，尤其是涉及一种从血清中提取载脂蛋白B的方法及载脂蛋白B。
技术介绍
载脂蛋白B(ApoB)是人血清中低密度脂蛋白(LDL)的主要结构蛋白，约占LDL蛋白质含量的97％，其含量可反应LDL水平，血清中ApoB增高是心脑血管病的危险因素。临床上ApoB测定常作为心脑血管病的风险度估计。所有ApoB的免疫测定技术均需用ApoB抗血清，日前国际和国内通用的ApoB测定试剂盒均采用免疫比浊法(Immunoturbidimetricassay，ITA)，因其快速、准确、精密并适用于各种类型的自动生化分析仪，特别适用大批量标本的测定。为了满足临床检验需要，大批量制备高纯度ApoB抗血清显得非常重要。常规从血清中提取ApoB一般通过化学沉淀和超速离心两种方法。化学沉淀法一般经过硫酸葡聚糖(DS)和二价金属离子进行沉淀，富集血清中的脂蛋白。然后经过细化分离条件，如改变沉淀剂或缓冲条件等，进行二次分离，得到富含ApoB的低密度脂蛋白样品。化学沉淀法工艺简单、成本低，但所得样品纯度很低。超速离心法借助于不同的密度梯度溶液，经过多次的长时间高速离心，可以得到纯度较高的ApoB。超速离心作为经典的分离载脂蛋白的手段，其操作繁琐、对技术人员要求高，且耗时长、成本高，这都阻碍了超速离心技术在载脂蛋白纯化中的大规模应用。因此，开发一种蛋白回收率高、纯度高、提取成本低，且对设备及技术人员要求低，易于推广的提取载脂蛋白B的方法尤为重要。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种从血清中提取载脂蛋白B的方法，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。本专利技术的第二个目的在于提供一种载脂蛋白B，该载脂蛋白B具有高纯度的优点。本专利技术提供了一种从血清中提取载脂蛋白B的方法，所述方法包括将血清预处理后得到的载脂蛋白B粗样品经疏水层析，洗脱得到所述载脂蛋白B。进一步地，所述预处理包括从血清中获取低密度脂蛋白并透析得到载脂蛋白B粗样品。进一步地，将血清经高分子化合物和二价金属离子处理后，得到所述低密度脂蛋白。进一步地，所述高分子化合物包括硫酸葡聚糖、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种；优选地，所述高分子化合物的用量为0.01％-0.2％(W/V)，优选用量为0.05％-0.15％(W/V)；优选地，所述二价金属离子包括硫酸锰、氯化钙或氯化锰中的一种或多种；优选地，所述二价金属离子的浓度为0.1-1M，优选用量为0.3-0.7M。进一步地，将所述低密度脂蛋白在高盐缓冲液中进行透析，并经还原剂处理后，固液分离得到所述载脂蛋白B粗样品；优选地，所述高盐缓冲液中无机盐的浓度为0.5-2M，优选浓度为0.8-1.8M；优选地，所述高盐缓冲液中无机盐包括氯化钠、硫酸铵或硫酸钠中的一种或多种；优选地，所述还原剂包括二硫苏糖醇、巯基乙醇、β-巯基乙醇或三(2-羧乙基)膦中的一种或多种。进一步地，采用离心的方式进行固液分离；优选地，离心后取上清得到所述载脂蛋白B粗样品；优选地，所述离心的转速为10000-14000rpm，温度为0-8℃。进一步地，所述疏水层析使用的结合缓冲液含有0.5-2M的无机盐，优选含有0.8-1.8M的无机盐；优选地，所述无机盐包括氯化钠、硫酸铵或硫酸钠中的一种或多种；优选地，所述疏水层析使用的洗脱液为tris缓冲液。进一步地，所述疏水层析使用的层析柱的填料选自ButylBeads4FF填料、Octyl填料或Phenyl填料。进一步地，所述疏水层析使用0-100％BufferB线性梯度洗脱，得到所述载脂蛋白B；优选地，合并20％-50％BufferB洗脱部分，得到所述载脂蛋白B。另外，本专利技术还提供了一种载脂蛋白B，应用上述的从血清中提取载脂蛋白B的方法制备得到。本专利技术提供的从血清中提取载脂蛋白B的方法，包括将血清预处理后得到的载脂蛋白B粗样品经疏水层析，洗脱得到所述载脂蛋白B。本专利技术选用疏水层析的方法提取载脂蛋白B，显著提高了载脂蛋白B的纯化效率，既缓解了现有技术中应用化学沉淀法提取蛋白纯度低的问题，又避免了超速离心法成本高的问题，还能够大大提高提取得到的载脂蛋白B的浓度和纯度。并且，该方法操作简单，成本低廉，对设备及技术人员要求不高，易于推广应用。此外，还具有提取效果明显，回收率高，可处理量大的优点，为实现工业化大生产提供基础。具体实施方式除非本文另有定义，连同本专利技术使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰，然而，在任何潜在不明确性的情况下，本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意味着“和/或”。此外，术语“包括”及其他形式的使用是非限制性的。一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本专利技术的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学使用的命名法、以及其实验室程序和技术是本领域众所周知和通常使用的那些。本专利技术提供了一种从血清中提取载脂蛋白B的方法，所述方法包括将血清预处理后得到的载脂蛋白B粗样品经疏水层析，洗脱得到所述载脂蛋白B。本专利技术所用到的生物材料为血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。本专利技术中的从血清中提取载脂蛋白B的方法适用于的血清包括但不限于人血清、猪血清、羊血清、马血清、牛血清或鼠血清等。疏水层析也称疏水作用下层析(hydrophobicinteractionchromatographyHIC)，属于吸附层析一类。疏水层析利用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离。该方法基于的是蛋白质的疏水差异，在高盐溶液中，蛋白质会与疏水配基相结合，而其他的杂蛋白则没有此种性质，利用此种性质，可以将蛋白质分离。本专利技术提供的从血清中提取载脂蛋白B的方法，选用疏水层析的方法提取载脂蛋白B，显著提高了载脂蛋白B的纯化效率，既缓解了现有技术中应用化学沉淀法提取蛋白纯度低的问题，又避免了超速离心法成本高的问题，还能够大大提高提取得到的载脂蛋白B的浓度和纯度。并且，该方法操作简单，对设备及技术人员要求不高，易于推广应用。此外，还具有提取效果明显，可处理量大的优点，为实现工业化大生产提供基础。在一些实施方式中，所述预处理包括从血清中获取低密度脂蛋白并透析得到载脂蛋白B粗样品。在一些优选的实施方式中，将血清经高分子化合物和二价金属离子处理后，得到所述低密度脂蛋白。利用高分子化合物和二价金属离子处理血清，能够有效沉淀血清中的低密度脂蛋白，提高后续载脂蛋白B的提取效率。高分子化合物一般指相对分子质量高达几千到几百万的化合物，由千百个原子以共价键相互连接而成的，虽然它们的相对分子质量很大，但都是以简单的结构单元和重复的方式连接的。在本专利技术中，高分子化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述方法包括将血清预处理后得到的载脂蛋白B粗样品经疏水层析，洗脱得到所述载脂蛋白B。

【技术特征摘要】
1.一种从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述方法包括将血清预处理后得到的载脂蛋白B粗样品经疏水层析，洗脱得到所述载脂蛋白B。2.根据权利要求1所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述预处理包括从血清中获取低密度脂蛋白并透析得到载脂蛋白B粗样品。3.根据权利要求2所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，将血清经高分子化合物和二价金属离子处理后，得到所述低密度脂蛋白。4.根据权利要求3所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，所述高分子化合物包括硫酸葡聚糖、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种；优选地，所述高分子化合物的用量为0.01％-0.2％(W/V)，优选用量为0.05％-0.15％(W/V)；优选地，所述二价金属离子包括硫酸锰、氯化钙或氯化锰中的一种或多种；优选地，所述二价金属离子的浓度为0.1-1M，优选用量为0.3-0.7M。5.根据权利要求2所述的从血清中提取载脂蛋白B的方法，其特征在于，将所述低密度脂蛋白在高盐缓冲液中进行透析，并经还原剂处理后，固液分离得到所述载脂蛋白B粗样品；优选地，所述高盐缓冲液中无机盐的浓度为0.5-2M，优选浓度为0.8-1.8M；优选地，所述高盐缓冲液中无机盐包括氯化钠、硫酸铵或硫...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯拓，
申请(专利权)人：广东菲鹏生物有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44