本发明专利技术涉及以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白的制备，特别是涉及以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白调节血脂代谢的功能，及其在生产用于预防和治疗血脂代谢异常性疾病的药物中的应用。以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白的主要特征是蛋白组分包括使用甲基营养酵母生产的重组人载脂蛋白A‑I、重组人载脂蛋白E两种载脂蛋白；并以维生素E代替天然高密度脂蛋白中的胆固醇酯，作为以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白的核心部分，使其具有更强的抗氧化活性。
Preparation of recombinant high-density lipoprotein with vitamin E as core
The present invention relates to recombinant high density lipoprotein with vitamin E as the core of the preparation, in particular relates to recombinant high density lipoprotein with vitamin E as the core of the regulation of lipid metabolism function, and its application in the production of drugs for prevention and treatment of abnormal lipid metabolism disorders in. The main features of recombinant high density lipoprotein with vitamin E as the core of the protein components including the use of recombinant methylotrophic yeast production of apolipoprotein A I, recombinant human apolipoprotein E two apolipoprotein; cholesterol ester and vitamin E to replace natural in high density lipoprotein, as a core part of recombinant high density lipoprotein with vitamin E as the core, which has stronger antioxidant activity.
【技术实现步骤摘要】
以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白的制备
本专利技术涉及以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白的制备，特别是涉及以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白调节血脂代谢的功能，及其在生产用于预防和治疗血脂代谢异常性疾病的药物中的应用。以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白的主要特征是蛋白组分包括使用甲基营养酵母生产的重组人载脂蛋白A-I、重组人载脂蛋白E两种载脂蛋白；并以维生素E代替天然高密度脂蛋白中的胆固醇酯，作为以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白的核心部分，使其具有更强的抗氧化活性。
技术介绍
动脉粥样硬化(As)是危害人类健康的重要疾病之一，其病理损害可累及全身各个器官，已经成为多种中老年常见疾病的基础病变。流行病学调查显示，血浆高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平与As等心血管疾病的危险性呈高度负相关，并不依赖于血浆低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、其他的脂类参数(三酰甘油、总胆固醇)和非脂类危险因素。在调整了其他冠心病危险因素后，HDL-C水平每增加1mg/dL，冠心病危险性就减少2％～3％(PetrakiMP,MantaniPT,TselepisAD.RecentAdvancesontheAntiatherogenicEffectsofHDL-DerivedProteinsandMimeticPeptides[J].CurrPharmDes,2009,15(27):3146-3166.)。HDL的心血管保护作用主要体现在逆胆固醇转运(RCT)及抗炎、抗氧化功能，升高HDL己经成为针对As的一种疗效较为肯定的治疗方法(车兆义,宋清斌,张继文,等.大鼠动脉硬化闭塞模型两种构建方法的比较[J].中国组织工程研究与临床康复,2008,12(50):9841-9844.)。目前国内外学者在升高血浆HDL-C水平方面进行了相关研究：烟酸可显著升高HDL-C水平，但因其存在主要的副作用(导致病人皮肤潮红)而使应用受限(BenyóZ,GilleA,KeroJ,etal.GPr109A(PUMA-G/HM74A)mediatesnicotinicacid-inducedflushing[J].JClinInvest,2005,115(12):3634–3640.)；Clark等的研究表明胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制剂可升高血浆HDL-C水平，但随后对CETP抑制剂——torcetrapib进行的大型临床试验却因其靶点外作用(使治疗组与安慰剂组相比死亡率升高)而被迫中止(BarterPJ,CaulfieldM,ErikssonM,etal.Effectsoftorcetrapibinpatientsathighriskforcoronaryevents[J].NEnglJMed,2007,357(21):2109–2122.)；虽然卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)激活剂、肝X受体(LXRs)激活剂、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)激活剂等有望为提高HDL-C水平作出贡献，但其是否具有防治As的功效尚未有报道(Santos-GallegoCG,IbanezB,BadimonJJ.HDL-cholesterol:Isitreallygood？DifferencesbetweenapoA-IandHDL[J].BiochemPharmacol,2008,76(4):443-452.)。以上资料显示，血清HDL-C水平并不能直接反映HDL的整体功能，那么如何升高HDL-C水平才能起到防治As的作用呢？最近的研究显示，HDL亚类的组成和颗粒大小的异常与As、冠心病具有良好的相关性，是As及冠心病的独立危险因素。高脂血症作为As、冠心病的一个重要危险因素，患者除血脂异常外，其血清中HDL亚类组成也会发生一定变化：小颗粒的preβ-HDL及HDL3含量显著增加，而大颗粒的HDL2含量显著减少，表明患者HDL颗粒有变小趋势，HDL成熟代谢过程受阻(MiidaT，YamaguchiT，TsudaT，etal.Highprebeta1-HDLlevelsinhypercholesterolemiaaremaintainedbyprobucolbutreducedbyalow-cholesteroldiet[J].Atherosclerosis，1998，138(1)：129-134.)。因此，各种亚组分间比例的失调，可引起HDL功能的改变，导致其抗氧化、抗炎、抗凝血功能减弱，促进氧化应激。由此可见，单纯的升高血浆HDL-C水平而不纠正HDL亚类比例及功能的异常，不一定能有效防治As，将HDL-C作为调节血脂代谢、防治As的靶点，要从增强HDL的功能入手。因此，本专利技术选用维生素E替代HDL核心部分的胆固醇酯(增强rhHDL抗氧化作用)，合成含有载脂蛋白A-I(ApoA-I)、载脂蛋白E(ApoE)的新型的以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白(rhHDL)纳米颗粒。rhHDL颗粒包含两种主要的载脂蛋白成分——载脂蛋白A-I(ApoA-I)和载脂蛋白E(ApoE)。ApoA-I是天然HDL抗氧化活性的主要成份，可以通过清除低密度脂蛋白(LDL)、动脉壁细胞或两者中氧化的磷脂，抑制或延迟LDL氧化。ApoE的脂质转运功能和显著的抗氧化活性使其具有明确的抗动脉硬化活性。此外，ApoE作为受体识别标志能与低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)特异性结合，ApoE运载循环中的脂蛋白残体，与LRP结合后可以介导脂蛋白残体的清除。大量的研究已证实，人早期及进展型As斑块中平滑肌细胞、巨噬细胞均有LRP的高表达(LupuF,HeimD,BachmannF,KruithofEK.ExpressionofLDLreceptor-relatedprotein/alpha2-macroglobulinreceptorinhumannormalandatheroscleroticarteries.riosclerThromb,1994,14(9):1438-1444.)。新型rhHDL颗粒治疗As的创新之处就在于，通过rhApoE与患者As组织中高表达的LRP结合，实现rhHDL的靶向作用；ApoE-LRP特异性结合后，rhHDL颗粒的成分(ApoA-I、ApoE和维生素E)释放于血管局部，调节血脂转运及抵抗氧化应激作用双管齐下，从而减轻As患者血管损伤。
技术实现思路
本专利技术涉及以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白(rhHDL)，特别是涉及rhHDL调整血脂代谢异常、防治As的功能，及其在生产用于预防和治疗血脂代谢异常诱发相关疾病的药物中的应用。本专利技术的一个目的是提供一种以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白(rhHDL)的制备方法，特征在于它的蛋白组分包括使用甲基营养酵母生产的重组人载脂蛋白A-I和重组人载脂蛋白E两种载脂蛋白和维生素E。利用胆酸钠法制备rhHDL(KatoH，NakanoST，AraiH，etal.Purification,micoheterogeneity，andstabilityofhumanlipidtransferprotein[J].JBiolChem，1989，264(7)：4082-4087.)，可得到稳定、大小适宜的颗粒。胆本文档来自技高网...
【技术保护点】
以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白的制备，特征在于它的蛋白组分包括使用甲基营养酵母生产的重组人载脂蛋白A‑I、重组人载脂蛋白E两种载脂蛋白和维生素E。
【技术特征摘要】
1.以维生素E为核心的重组高密度脂蛋白的制备，特征在于它的蛋白组分包括使用甲基营养酵母生产的重组人载脂蛋白A-I、重组人载脂蛋白E两种载脂蛋白和维生素E。2.根据权利要求1的方法，其中所说的甲基营养酵母是巴斯德毕赤酵母，是用包括下列可操作连接的元件的DNA构建体转化的：(1)甲基可诱导的转录启动子；(2)编码载脂蛋白A-I或E的DNA片段；(3)转录终止子和(4)可选择标志，并且其中所说的甲基营养酵母是巴斯德毕赤酵母，并且所说的甲基可诱导的启动子和转录终止...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏曼曼，许天敏，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22
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