抗体及其相关分子和用途制造技术

本发明专利技术涉及分离的抗体，其选择性结合CLEC14A，其中所述抗体(a)包含至少一个包含3个CDR的重链可变区和至少一个包含3个CDR的轻链可变区,其中所述重链可变区包含：(i)可变重(VH)CDR1，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.105，优选SEQ ID NO:2或42；(ii)VH CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.106，优选SEQ ID NO:3或43；和/或(iii)VH CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.107，优选SEQ ID NO:4或44；和/或其中所述轻链可变区包含：(iv)可变轻(VL)CDR1，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.108，优选SEQ ID NO:6或46；(v)VL CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.109，优选SEQ ID NO:7或47；和/或(vi)VL CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.110，优选SEQ ID NO:8或48；或(b)包含至少一个包含3个CDR的重链可变区和至少一个包含3个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：(i)可变重(VH)CDR1，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:22；(ii)VH CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:23；和/或(iii)VH CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:24；和/或其中所述轻链可变区包含：(iv)可变轻(VL)CDR1，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:26；(v)VL CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:27；和/或(vi)VL CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:28；或(c)是能与抗体(a)或(b)竞争结合CLEC14A的抗体。本发明专利技术还提供了嵌合抗原受体、编码本发明专利技术的抗体或嵌合抗原受体的核酸分子、载体、细胞和方法/抗体和嵌合抗原受体的用途。

Antibodies and Related Molecules and Applications

The present invention relates to a separated antibody selectively binding to CLEC14A. The antibody (a) comprises at least one heavy chain variable region containing three CDRs and at least one light chain variable region containing three CDRs. The heavy chain variable region comprises: (i) variable weight (VH) CDR1, which has an amino acid sequence SEQ ID NO.105, preferably SEQ ID NO:2. Or 42; (ii) VH CDR2, which has the amino acid sequence SEQ ID NO.106, preferred SEQ ID NO:3 or 43; and/or (iii) VH CDR3, which has the amino acid sequence SEQ ID NO.107, preferred SEQ ID NO:4 or 44; and/or the light chain variable region described therein contains: (iv) variable light (VL) CDR1, which has the amino acid sequence SEQ ID NO.108, preferred. SEQ ID NO:6 or 46; (v) VL CDR2, which has amino acid sequence SEQ ID NO.109, preferred SEQ ID NO:7 or 47; and/or (vi) VL CDR3, which has amino acid sequence SEQ ID NO.110, preferred SEQ ID NO:8 or 48; or (b) contains at least one heavy chain variable region containing three CDRs and at least one light chain variable region containing three CDRs. The variable region of heavy chain includes: (i) variable weight (VH) CDR1, which has amino acid sequence SEQ ID NO: 22; (i i) VH CDR2, which has amino acid sequence SEQ ID NO: 23; and/or (i I i) VH CDR3, which has amino acid sequence SEQ ID NO: 24; and/or the variable region of light chain contained: (iv) variable light (VL) CDR1, which has ammonia. Base acid sequence SEQ ID NO:26; (v) VL CDR2, which has amino acid sequence SEQ ID NO:27; and/or (vi) VL CDR3, which has amino acid sequence SEQ ID NO:28; or (c) is an antibody that can compete with antibody (a) or (b) to bind CLEC14A. The invention also provides the use of chimeric antigen receptors, nucleic acid molecules encoding antibodies or chimeric antigen receptors of the invention, carriers, cells and methods/antibodies, and chimeric antigen receptors.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体及其相关分子和用途本专利技术一般涉及抗体，CLEC14A生物学和相关疗法，例如嵌合抗原受体(CAR)领域。更具体地，它提供与CLEC14A结合的抗体和针对抗原CLEC14A的CAR及其在免疫效应细胞中表达以靶向表达CLEC14A的靶细胞。此类抗CLEC14A抗体和免疫效应细胞在与CLEC14A相关的疾病和状况中具有治疗用途。例如，本专利技术提供了用于抑制血管生成和对抗与不需要的血管生成相关的疾病(例如癌症)的产品。本专利技术的抗体还可以在监测或预测肿瘤生长和进展中得到诊断效用，例如通过对血管系统成像。本专利技术的基于抗体的组合物和方法还延伸到免疫缀合物和其他治疗组合、试剂盒和方法的用途。本专利技术还提供编码此类抗体和CAR的核酸分子和含有它们的载体，其可用于修饰宿主细胞，例如免疫效应细胞，以表达抗体或CAR。特别地，本专利技术的CAR包含源自本专利技术抗体的抗原结合域。CLEC14A(也称为表皮生长因子受体5(EGFR5))是单通跨膜糖蛋白，其属于血管限制性C型凝集素家族14，它的其他成员包括CD248/TEM1/内皮唾液酸蛋白、血栓调节蛋白和CD93。它是长度为490个氨基酸(aa)的单通I型跨膜蛋白，其含有信号肽(aa1-21)，胞外区(aa22-398)，跨膜域(aa399-421)和胞质域(aa422-490)。胞外区具有一个C型凝集素样域(aa22-173)和表皮生长因子样区域(aa245-287)。人和小鼠CLEC14A蛋白显示67％的氨基酸序列同一性，在C型凝集素和表皮生长因子样域中具有甚至更大的序列保守性。关于CLEC14A的可用数据提示操纵CLEC14A水平或功能(例如使用阻断抗体)可以调节内皮迁移(WO2011/027132)。内皮细胞形成单个细胞层，其作为所有血管的衬里并调节血流和周围组织之间的交换。在称为血管生成的过程中，新血管通过内皮细胞的长出从现有小血管的壁发展。当在培养物中分离时，内皮细胞甚至具有形成中空毛细管的能力。一旦血管系统完全发育，血管的内皮细胞通常保持静止，没有新的血管形成，除了在自然伤口愈合中形成新血管。然而，一些肿瘤通过分泌刺激附近内皮细胞构建新毛细血管芽的因子来吸引新的血液供应。血管生成在实体瘤的进展中起主要作用，并且被广泛认为是实体瘤生长中的限速过程。未能吸引血液供应的肿瘤的生长受到严重限制。因此，抑制不适当的，不希望的或不需要的血管生成的能力可用于治疗实体瘤。新血管的发展对于局部肿瘤进展和远处转移的发展都是必不可少的。实际上，肿瘤的生长和存活取决于它们获得血液供应的能力，并且已经显示肿瘤内皮上施加的损伤有效地根除肿瘤。肿瘤血管生成涉及通过活化组织或循环内皮前体降解基底膜，内皮细胞的增殖和迁移，与细胞外基质的相互作用，形态分化，细胞粘附和血管形成。因此，抑制肿瘤血管生成是抗肿瘤治疗的目标，单独使用血管生成抑制剂或与标准癌症治疗组合使用。然而，将抗肿瘤剂靶向到血管生成部位取决于肿瘤血管生成的特异性标志物的鉴定。内皮在许多生理和病理过程中起重要作用，并且已知其是特别活跃的转录位点。在内皮细胞中表达大约1,000种不同的基因，尽管它们中的许多不是内皮细胞特异性的。CLEC14A已被鉴定为肿瘤内皮标志物(WO2011/027132)。CLEC14A在作为许多常见人癌症(包括乳腺癌，肝癌，前列腺癌，胰腺癌，膀胱癌和卵巢癌)的血管系统衬里的细胞表面高表达，但在健康组织的血管系统中表达低或不可检测。它在低剪切应力的条件下诱导，例如在肿瘤组织的不良形成血管中发生，并与细胞外基质内的MMRN2相互作用。它介导filipodia形成和内皮迁移，在发芽血管生成和促进小鼠肿瘤生长中起作用。因此，预期阻断或抑制CLEC14A功能或活性导致血管生成，特别是肿瘤血管生成的抑制。因此，需要抑制或阻断CLEC14A功能或活性的试剂和靶向表达CLEC14A的细胞，特别是肿瘤细胞(例如肿瘤血管系统)的试剂。近年来，使用抗体，特别是单克隆抗体的免疫疗法作为治疗各种疾病(包括癌症)的安全和选择性方法而出现。还发现抗体在体外和体内以及离体的各种诊断和预后分析中都是有效的。然而，并非所有能够结合特定抗原的抗体在治疗中都是有效的。因此，需要和期望能够特异性结合CLEC14A的抗体，特别是与先前表征的CLEC14A抗体结合不同表位，并且还可以是治疗有效的和/或能够阻断或抑制CLEC14A功能或活性的抗体，例如，用于抑制血管生成，特别是肿瘤血管生成，例如用于治疗癌症。涉及在T细胞或其他免疫效应细胞，例如NK细胞中表达嵌合抗原受体(CAR)的疗法也在近年发展起来。现在广泛已知并在本领域中描述的CAR是融合蛋白，其包含与T细胞受体(TcR)复合物的信号传导域(或等同物)连接的抗原结合域，通常但不总是源自抗体，并且若选择合适的抗原结合域或抗体，则可以用于引导针对肿瘤的T细胞或其他免疫效应细胞。CAR构建体通常包含抗原结合域，任选地为铰链域(其发挥间隔物功能以将抗原结合域延伸远离其表达的免疫效应细胞的质膜)，跨膜域，胞内信号传导域(例如，来自TcR复合物的CD3分子的zeta链(CD3ζ)的信号传导域，或等同物)和任选地一种或多种共刺激域，其可以帮助表达CAR的细胞的信号传导或功能性。不同的域可以直接连接或通过接头连接。这些不同的域和接头可用多种选择。因此，需要能够靶向表达CLEC14A的细胞，特别是肿瘤细胞的CAR，例如用于抑制血管生成，特别是肿瘤血管生成，例如用于治疗癌症。本专利技术人已经产生了特异性和有效地结合CLEC14A的抗体(本文称为CRT-2和CRT-3)。此外，如实施例中更详细讨论的，本专利技术人已经确定所述抗体可以单独和与细胞毒性药物组合(例如作为抗体药物缀合物(也称为免疫缀合物))具有有用的治疗性质。值得注意的是，专利技术人已经表征了所述抗体的抗原结合域，并且确定所述域，更具体地，所述域的可变区(VL和VH链)可以提供用于针对表达CLEC14A的细胞的过继细胞转移疗法的有效CAR。如下文将更详细描述的，在更具体的实施方案中，CAR可以包含与“信号传导尾”组合的基于或包含本专利技术抗体的VL和VH链，特别是基于其高变区或CDR(互补决定区)的抗原结合域，所述信号传导尾包括铰链，跨膜，共刺激和胞内信号传导域的组合。因此，在一个方面，本专利技术提供抗体，特别是分离的抗体，其选择性结合CLEC14A，其中所述抗体：(a)包含至少一个包含3个CDR的重链可变区和至少一个包含3个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：(i)可变重(VH)CDR1，其具有氨基酸序列SEQIDNO.105，优选SEQIDNO:2或42，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的任何前述SEQIDNO基本上同源的序列；(ii)VHCDR2，其具有氨基酸序列SEQIDNO.106，优选SEQIDNO:3或43，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的任何前述SEQIDNO基本上同源的序列；和/或(iii)VHCDR3，其具有氨基酸序列SEQIDNO.107，优选SEQIDNO:4或44，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的任何前述SEQIDNO基本上同源的序列；和/或其中所述轻链可变区包含：(iv)可变轻(VL)CDR1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分离的抗体，其选择性结合CLEC14A，其中所述抗体：(a)包含至少一个包含3个CDR的重链可变区和至少一个包含3个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：(i)可变重(VH)CDR1，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.105，优选SEQ ID NO:2或42，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；(ii)VH CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.106，优选SEQ ID NO:3或43，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或(iii)VH CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.107，优选SEQ ID NO:4或44，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或其中所述轻链可变区包含：(iv)可变轻(VL)CDR1，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.108，优选SEQ ID NO:6或46，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；(v)VL CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.109，优选SEQ ID NO:7或47，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或(vi)VL CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO.110，优选SEQ ID NO:8或48，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；或(b)包含至少一个包含3个CDR的重链可变区和至少一个包含3个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：(i)可变重(VH)CDR1，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:22或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；(ii)VH CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:23或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或(iii)VH CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:24或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或其中所述轻链可变区包含：(iv)可变轻(VL)CDR1，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:26或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；(v)VL CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:27或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或(vi)VL CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO:28或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；或(c)是能与抗体(a)或(b)竞争结合CLEC14A的抗体。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.15 GB 1604378.8;2016.07.19 GB 1612534.61.分离的抗体，其选择性结合CLEC14A，其中所述抗体：(a)包含至少一个包含3个CDR的重链可变区和至少一个包含3个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：(i)可变重(VH)CDR1，其具有氨基酸序列SEQIDNO.105，优选SEQIDNO:2或42，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；(ii)VHCDR2，其具有氨基酸序列SEQIDNO.106，优选SEQIDNO:3或43，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或(iii)VHCDR3，其具有氨基酸序列SEQIDNO.107，优选SEQIDNO:4或44，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或其中所述轻链可变区包含：(iv)可变轻(VL)CDR1，其具有氨基酸序列SEQIDNO.108，优选SEQIDNO:6或46，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；(v)VLCDR2，其具有氨基酸序列SEQIDNO.109，优选SEQIDNO:7或47，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或(vi)VLCDR3，其具有氨基酸序列SEQIDNO.110，优选SEQIDNO:8或48，或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；或(b)包含至少一个包含3个CDR的重链可变区和至少一个包含3个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：(i)可变重(VH)CDR1，其具有氨基酸序列SEQIDNO:22或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；(ii)VHCDR2，其具有氨基酸序列SEQIDNO:23或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或(iii)VHCDR3，其具有氨基酸序列SEQIDNO:24或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或其中所述轻链可变区包含：(iv)可变轻(VL)CDR1，其具有氨基酸序列SEQIDNO:26或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；(v)VLCDR2，其具有氨基酸序列SEQIDNO:27或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；和/或(vi)VLCDR3，其具有氨基酸序列SEQIDNO:28或具有1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失的与其基本上同源的序列；或(c)是能与抗体(a)或(b)竞争结合CLEC14A的抗体。2.权利要求1的抗体，其中所述抗体：(a)具有SEQIDNO:1或41的VH域和/或SEQIDNO:5或45的VL域；或(b)是能与抗体(a)竞争CLEC14A的的抗体。3.权利要求1的抗体，其中所述抗体：(a)具有SEQIDNO:21的VH域和/或SEQIDNO:25的VL域；或(b)是能与抗体(a)竞争结合CLEC14A的抗体。4.权利要求1(c)或2(b)的抗体，其中所述抗体包含至少一个包含3个CDR的重链可变区和至少一个包含3个CDR的轻链可变区。其中所述重链可变区包含(i)VHCDR1，其具有氨基酸序列SEQIDNO:2或42或与其基本上同源的序列；(ii)VHCDR2，其具有氨基酸序列SEQIDNO:3或43或与其基本上同源的序列；和/或(iii)VHCDR3，其具有氨基酸序列SEQIDNO:4或44或与其基本上同源的序列；和/或其中所述轻链可变区包含：(iv)VLCDR1，其具有氨基酸序列SEQIDNO:6或46或与其基本上同源的序列；(v)VLCDR2，其具有氨基酸序列SEQIDNO:7或47或与其基本上同源的序列；和/或(vi)VLCDR3，其具有氨基酸序列SEQIDNO:8或48或与其基本上同源的序列。5.权利要求1(c)或3(b)的抗体，其中所述抗体包含至少一个包含3个CDR的重链可变区和至少一个包含3个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)VHCDR1，其具有氨基酸序列SEQIDNO:22或与其基本上同源的序列；(ii)VHCDR2，其具有氨基酸序列SEQIDNO:23或与其基本上同源的序列；和/或(iii)VHCDR3，其具有氨基酸序列SEQIDNO:24或与其基本上同源的序列；和/或其中所述轻链可变区包含：(iv)VLCDR1，其具有氨基酸序列SEQIDNO:26或与其基本上同源的序列；(v)VLCDR2，其具有氨基酸序列SEQIDNO:27或与其基本上同源的序列；和/或(vi)VLCDR3，其具有氨基酸序列SEQIDNO:28或与其基本上同源的序列。6.权利要求1(c)、2(b)或4的抗体，其中所述抗体能与权利要求1(a)和/或2(a)中限定的抗体结合基本上相同的表位。7.权利要求1(c)、3(b)或5的抗体，其中所述抗体能与权利要求1(b)和/或3(a)中限定的抗体结合基本上相同的表位。8.权利要求1或4至7中任一项的抗体，其中所述基本上同源的序列具有一个或多个所述CDR中的1、2、3或4个氨基酸取代、添加和/或缺失，优选1、2、3或4个取代。9.权利要求8的抗体，其中所述氨基酸取代是保守取代。10.权利要求1至9中任一项的抗体，其中所述抗体是小鼠、人或人源化抗体。11.权利要求1至10中任一项的抗体，其中所述抗体包含整个或部分的抗体重链恒定区和/或整个或部分的抗体轻链恒定区。12.权利要求1至11中任一项的抗体，其中所述抗体是IgG抗体。13.权利要求1至12中任一项的抗体，其中所述抗体包含：(a)重链和轻链，所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:1或41或与其基本上同源的序列，所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:5或45或与其基本上同源的序列；或(b)重链和轻链，所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:21或与其基本上同源的序列，所述轻链包含氨基酸序列SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：R比克内尔，S李，
申请(专利权)人：癌症研究技术有限公司，伯明翰大学，
类型：发明
国别省市：英国,GB