抗ROR1抗体制造技术

本发明专利技术涉及靶向受体酪氨酸激酶样孤儿受体‑1(ROR1)的人或人源化抗体或基于抗体的结合蛋白、保留靶结合能力的经修饰的抗体形式、保留靶结合能力的抗体衍生物或片段。它还涉及双特异性或多特异性抗体、免疫配体‑药物缀合物、嵌合抗原受体和包含这种嵌合抗原受体的T细胞。

Anti ROR1 antibody

The present invention relates to human or humanized antibodies to target receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1 (ROR1), antibody-based binding proteins, modified antibody forms that retain target binding capacity, and antibody derivatives or fragments that retain target binding capacity. It also involves bispecific or multispecific antibodies, immune ligands, drug conjugates, chimeric antigen receptors and T cells containing such chimeric antigen receptors.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗ROR1抗体本专利技术涉及抗ROR1抗体，包括双特异性和多特异性抗体、靶向ROR1的免疫配体-毒素缀合物以及抗ROR1的CAR和CAR细胞。引言对于一些肿瘤疾病，尚未存在有效的治疗方法。对于慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和髓性恶性肿瘤，以及包括结肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌在内的实体瘤尤其如此。本专利技术的一个目的是提供解决这些疾病的新的治疗方法。优选实施方案应当理解，这里公开的实施方案并不意味着被理解为彼此不相关的单独实施方案。在一个实施方案中讨论的特征意味着在本文所示的其他实施方案中也已公开。如果在一种情况下，一个具体特征没有用一个实施方案公开，而是用另一个实施方案公开，本领域技术人员将理解这不必意味着所述特征不想用其他实施方案公开。本领域技术人员将理解，本申请的主旨是公开的所述特征也用于其他实施方案，但仅为清楚并将说明书保持在适当篇幅范围内的目的，因此而未一一枚举。根据本专利技术的第一实施方案，提供了人或人源化的抗体、或基于抗体的结合蛋白、或保留靶结合能力的经修饰的抗体形式、或保留靶结合能力的抗体衍生物或片段，其靶向受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1(ROR1)。在第二实施例中，还提供了所述第一实施例的免疫配体-药物缀合物，其具有与人或人源化的抗体、或基于抗体的结合蛋白、或保留靶结合能力的修饰的抗体形式、或保留靶结合能力的抗体衍生物或片段共价偶联的功能性部分，其靶向受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1(ROR1)。该缀合物优选是抗体药物缀合物(ADC)，其优选与小分子量细胞毒素进行缀合，优选是位点特异性的，并且优选通过但不限于在WO2014140317中公开的分选酶-酶介导的缀合技术(SMAC-技术)进行缀合。在第三实施例中，还提供了携带受体的哺乳动物细胞包含人或人源化的抗体、或基于抗体的结合蛋白、或保留靶结合能力的经修饰的抗体形式、或保留靶结合能力的抗体衍生物或片段，其靶向受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1(ROR1)。此类哺乳动物细胞优选为免疫系统的T细胞，其优选携带嵌合抗原受体(CAR)，所述CAR包含人或人源化的抗体、或基于抗体的结合蛋白、或保留靶结合能力的修饰的抗体形式、或保留靶结合能力的抗体衍生物或片段，其靶向受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1(ROR1)。因此，在另一个优选的实施例中，这些哺乳动物细胞是CART细胞，其包含人或人源化的抗体、或基于抗体的结合蛋白、或保留靶结合能力的经修饰的抗体形式、或保留靶结合能力的抗体衍生物或片段，其靶向受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1(ROR1)。受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1(ROR1)是细胞表面分子的受体酪氨酸激酶(RTK)家族的成员，其在胚胎和胎儿发育期间高度表达，并且其对于胚胎和胎儿发育是重要的，因为ROR-1敲除小鼠在新生时期死亡(NomiMetal.(2001)MolCellBiol.21,8329-35)。在人出生后的组织中，几乎没有发现ROR1的表达。在脂肪组织中观察到低表达，且在胰腺、肺和中间B细胞亚群中观察到较小程度的表达。然而，重要的是，在几种癌症中已经发现ROR1表达升高，包括血液恶性肿瘤如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和髓性恶性肿瘤，以及包括神经母细胞瘤、肉瘤、肾细胞癌、黑色素瘤、结肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、头颈癌和胰腺癌在内的实体瘤。因此，ROR1的表达模式被称为肿瘤-胚胎表达模式，并因此作为特定癌症和肿瘤的靶标具有很高的医学意义(BorcherdingNetal(2014)ProteinCell5,496–502；Hojjat-Farsangietal(2014)SeminarsinCancerBiology,29,21–31)。与出生后的组织中ROR1表达的实质缺失一致，当非人灵长类动物用ROR1特异性的细胞毒性T细胞治疗时没有观察到毒性，其表明在人类中ROR1特异性靶向用于癌症治疗是安全的(BergerCetal.(2015)CancerImmunolRes.3,206-16)。迄今为止，还没有ROR1特异性抗体在临床上批准用于癌症治疗。为了适用于人类疾病的治疗，靶向ROR-1的抗体和靶向ROR-1的免疫配体-毒素-缀合物应当显示出最小的免疫原性，从而最小化由患者的免疫系统将其从系统中清除的可能性，并因此导致延长的血清半衰期并因此具有更高的有效性。此外，降低的免疫原性避免了不期望的并且有时甚至危及生命的副作用，如免疫原性反应。因此，本专利技术提供了人和人源化的抗ROR-1抗体，预期其导致最小的免疫原性并具有治疗肿瘤病症的功效。在一个具体实施方案中，提供了人源化的抗ROR-1抗体、或基于抗体的结合蛋白、保留靶结合能力的经修饰的抗体形式、保留靶结合能力的抗体衍生物或片段。术语“人源化的抗体”是指含有源自人和非人(例如兔)免疫球蛋白的序列的嵌合抗体，使得基本上所有的CDR区都是非人来源的，而基本上所有的FR区都对应于人免疫球蛋白序列的FR区。在一个实施方案中，抗体已经从啮齿动物或兔亲代抗体中被人源化，即包含来源于啮齿动物或兔的CDR区。已经基于来自小鼠和兔来源的功能性表征的抗ROR1啮齿动物抗体(命名为R11、R12(均为兔))(WO2012/075158A1)和2A2(小鼠)(WO2010/124188A1)开发了人源化的抗体，其全部结合ROR1分子的不同细胞外结构域，即Ig、ROR1的卷曲蛋白结构域(Frizzleddomain)和Kringle结构域(YangJetal.(2011)PLoSONE6,e21018；BaskarSetal.(2012)mAbs4,1-13)。基于与来自人类抗体库的大量下一代测序数据的序列比对以及选择与人IgG重链和轻链序列具有最大相似性的人框架区，通过专有算法将这些抗体人源化。已经选择了与亲代抗体克隆具有期望的序列同源性的已鉴定的人框架区的集合，并将其与高亲和力啮齿类动物mAbR11、R12和2A2的CDR相结合。已经基因合成了多达183个预测的人源化的抗体的集合，并且单个IgG重链和轻链的文库已经被稳定地表达并通过使用所描述的转座介导的抗体展示(Transpo-mAb)(Waldmeieretal.(2016)MAbs8(4):726-740,WO2014013026)展示在哺乳动物细胞的表面上。已经基于ROR1靶向结合有效性选择了人源化的抗体的重链和轻链的各个组合，并分析了最佳克隆以回收序列。基于对更大规模的人源化IgG重链和轻链库的筛选，可鉴定高亲和力的人源化的mAb而无需进一步的亲和力成熟。在一些情况下，所提供的人源化的抗ROR-1抗体相对于衍生它们的亲代抗体来说，对ROR1的结合亲和力显示出预料不到的重大改进。这是预料不到的，因为抗体的人源化通常会导致亲和力的降低或丧失，这就需要繁琐地通过额外的亲和力成熟来补偿(Bacaetal.(1997)J.Biol.Chem.271:10678-84)。在一个优选的实施方案中，抗体包含至少3个CDR序列：SEQIDNo1CDR1HCSEQIDNo2CDR2HCSEQIDNo3CDR3HC或者SEQIDNO15CDR1HCSEQIDNO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人或人源化的抗体、或基于抗体的结合蛋白、保留靶结合能力的经修饰的抗体形式、保留靶结合能力的抗体衍生物或片段，其靶向受体酪氨酸激酶样孤儿受体‑1(ROR1)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.30 EP 15192446.11.人或人源化的抗体、或基于抗体的结合蛋白、保留靶结合能力的经修饰的抗体形式、保留靶结合能力的抗体衍生物或片段，其靶向受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1(ROR1)。2.如权利要求1所述的抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段，其包含至少3个CDR序列：SEQIDNo1CDR1HCSEQIDNo2CDR2HCSEQIDNo3CDR3HC或者SEQIDNO15CDR1HCSEQIDNO16CDR2HCSEQIDNO17CDR3HC或者SEQIDNO29CDR1HCSEQIDNO30CDR2HCSEQIDNO31CDR3HC。3.如权利要求1或2中任一项所述的抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段，其包含至少3个CDR序列：SEQIDNo4CDR1LCSEQIDNo5CDR2LCSEQIDNo6CDR3LC或者SEQIDNO18CDR1LCSEQIDNO19CDR2LCSEQIDNO20CDR3LC或者SEQIDNO32CDR1LCSEQIDNO33CDR2LCSEQIDNO34CDR3LC。4.如权利要求1至3中任一项所述的抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段，其包含与选自下列的序列具有至少95％相同性、优选具有96％或甚至97％相同性、更优选具有98％或甚至99％相同性、并且最优选具有100％相同性的重链或轻链可变区序列：SEQIDNO9VRHCSEQIDNO10VRLCSEQIDNO11VRHCSEQIDNO12VRLCSEQIDNO13VRHCSEQIDNO14VRLCSEQIDNO23VRHCSEQIDNO24VRLCSEQIDNO25VRHCSEQIDNO26VRLCSEQIDNO27VRHCSEQIDNO28VRLCSEQIDNO37VRHCSEQIDNO38VRLCSEQIDNO39VRHCSEQIDNO40VRLCSEQIDNO41VRHCSEQIDNO42VRLCSEQIDNO43VRHCSEQIDNO44VRLC。5.如权利要求1至5中任一项所述的抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段，其是人源化自·小鼠抗ROR抗体mAb2A2·兔抗ROR抗体mAbR11，和/或·兔抗ROR抗体mAbR12，和/或选自由以下组成的组：·hu2A2b-Q11(也称为msQ11-3)·hu2A2-D23(也称为msD23-19)·hu2A2-D16(也称为msD16-7)·rbQ11(也称为rbQ11-32)·rbD4(也称为rbD4-32)·rbQ12(也称为rbQ12-40)·huR12-4·huR12-7·huR12-11，和/或·huR12-16，和/或与以上提及的任何所述抗体享有至少95％、优选96％或甚至97％相同性、更优选98％或甚至99％相同性、并且最优选100％氨基酸序列相同性的抗体。6.如权利要求1至5中任一项所述的抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段，其中所述抗体具有表1或表2中列出的特征中的至少一种。7.人或人源化的抗体、或基于抗体的结合蛋白、保留靶结合能力的经修饰的抗体形式、保留靶结合能力的抗体衍生物或片段，其(i)对ROR1的结合亲和力至少与如权利要求1至6中任一项所述的抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段的结合亲和力一样高或基本上一样高，和/或(ii)与如权利要求1至6中任一项所述的抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段竞争结合至ROR1。8.前述权利要求中任一项所述的抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段，其中所述受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1(ROR1)是人ROR1。9.前述权利要求中任一项所述的基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段，其是双特异性抗体或多特异性抗体。10.分离的核酸序列或其集合，其编码如权利要求1至8中任一项所述的抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段，或如权利要求9所述的双特异性抗体或多特异性抗体。11.载体，其包含至少一种如权利要求10所述的核酸序列。12.分离的细胞，其表达如权利要求1至8中任一项所述的抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段，或如权利要求9所述的双特异性抗体或多特异性抗体，和/或其包含如权利要求10所述的核酸序列或其集合，或如权利要求11所述的载体。13.产生如权利要求1至8中任一项所述的抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段，或如权利要求9所述的双特异性抗体或多特异性抗体的方法，其包括培养如权利要求12所述的细胞，并纯化所述抗体、基于抗体的结合蛋白、经修饰的抗体形式、抗体衍生物或片段。14.具有通式A-(L)n-(T)m的免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·瓦尔德迈尔，U·格劳乌德，R·贝尔利，
申请(专利权)人：恩比伊治疗股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH