用于癌症治疗的AXL特异性抗体药物缀合物制造技术

结合至人AXL的抗体‑药物缀合物(ADC)，与一种或多种MAPK途径抑制剂例如BRAF抑制剂和/或MEK抑制剂组合，用于治疗用途，特别是用于治疗黑色素瘤。

AXL Specific Antibody Drug Conjugates for Cancer Therapy

Antibody-drug conjugate (ADC) binding to human AXL, combined with one or more MAPK pathway inhibitors such as BRAF inhibitors and/or MEK inhibitors, is used for therapeutic purposes, especially for melanoma.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于癌症治疗的AXL特异性抗体药物缀合物专利
本专利技术涉及结合至人AXL的抗体-药物缀合物(ADC)，其用于治疗用途，特别是与至少一种治疗剂组合治疗黑色素瘤。
技术介绍
AXL是一种104-140kDa跨膜蛋白，其属于哺乳动物受体酪氨酸激酶(RTKs)的TAM亚家族，且具有转化能力(Paccez等人,2014)。在各种癌症(包括胃癌、前列腺癌、卵巢癌和肺癌)中已报道了AXL的增强或从头表达(Paccez等人,2014)。值得注意的是，已发现对酪氨酸激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂和/或化学疗法具有抗性的几种癌症显示出AXL蛋白的增强或从头表达(Wilson等人,2014;Brand等人,2015;Zhang等人,2012;Blakely等人,2012)。特别是，对丝氨酸/苏氨酸激酶B-raf(BRAF)、MEK和ERK(MEK也是酪氨酸激酶)抑制剂具有抗性的黑色素瘤细胞显示出增强的或从头的AXL表达(Müller等人,2014;Konieczkowski等人,2014)。BRAF、MEK和ERK都是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径的一部分。大多数恶性黑色素瘤在BRAF或NRAS中具有致癌突变，这可导致组成型活性MAPK途径(Sullivan等人,2016)。AXL细胞外结构域由两个膜-远端N-末端免疫球蛋白(Ig)样结构域(Ig1和Ig2结构域)和两个膜-近侧纤连蛋白III型(FNIII)重复(FN1-和FN2-结构域)的组合构成(Paccez等人,2014)。AXL可以在结合其配体，维生素K依赖性生长停滞特异性因子6(Gas6)后被活化。Gas6结合至AXL导致AXL二聚化、自磷酸化以及后续的细胞内信号传导途径的活化，如PI3K/AKT、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、STAT和NF-κB级联(Leconet等人,2013)。在癌细胞中，AXL表达已经与肿瘤细胞运动性、侵袭、迁移相关，并且参与上皮至间质转化(EMT)(Linger等人,2010)。已经描述了抗AXL抗体，其通过下调受体表达、降低肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡来减弱NSCLC和乳腺癌异种移植物的体内生长(Li等人等人,2009；Ye等人,2010；WO2011/159980,Genentech)。也已报道了各种其它抗AXL抗体(Leconet等人,2013；Iida等人,2014；WO2012/175691,INSERM；WO2012/175692,INSERM；WO2013/064685,PierreFabréMedicaments；WO2013/090776,INSERM；WO2009/063965,ChugaiPharmaceuticals，WO2010/131733和WO2016/005593)，包括基于抗AXL抗体和吡咯并苯并-二氮杂䓬(PBD)二聚体的ADC(WO2014/174111,PierreFabréMedicament和SpirogenSarl)。然而，仍然需要改进的基于AXL-ADC的治疗黑色素瘤的方法，特别是考虑到对MAPK抑制剂的抗性。专利技术概述本专利技术人已发现，基于抗AXL抗体的ADC(本文也称为“AXL-ADC”)可与一种或多种MAPK途径的抑制剂组合用于有效治疗黑色素瘤。因此，在一个方面，本专利技术涉及包含结合至人AXL的抗体的ADC，其用于与一种或多种MAPK途径的抑制剂组合治疗黑色素瘤。在一个实施方案中，一种或多种MAPK途径的抑制剂包含BRAF抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂或其任何两种或更多种的组合。ADC和一种或多种抑制剂可以例如同时、分开或顺序施用。在一个方面，本专利技术涉及包含结合至人AXL的抗体的ADC，其用于与BRAF抑制剂和MEK抑制剂组合治疗黑色素瘤。ADC、BRAF抑制剂和MEK抑制剂可以例如同时、分开或顺序施用。在一个方面，本专利技术涉及治疗受试者的黑色素瘤的方法，该方法包括向受试者施用(i)包含结合至人AXL的抗体的ADC，和(ii)一种或多种MAPK途径的抑制剂，其中ADC和一种或多种抑制剂以治疗有效量同时、分开或顺序施用。在一个实施方案中，一种或多种MAPK途径的抑制剂包含BRAF抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂或其任何两种或更多种的组合。在一个方面，本专利技术涉及治疗受试者的黑色素瘤的方法，该方法包括向受试者施用(i)包含结合至人AXL的抗体的ADC；(ii)BRAF抑制剂；和(iii)MEK抑制剂；其中ADC、BRAF抑制剂和MEK抑制剂以治疗有效量同时、分开或顺序施用。这些和其它方面和实施方案，包括使用基于特征在于其抗原结合特性或序列的抗AXL抗体的AXL-ADC，适用于此类ADC的治疗性部分，此类ADC与某些治疗剂的组合，和治疗黑色素瘤的相关方法，在下面进一步详细描述。实际上，涉及根据本专利技术与一种或多种抑制剂组合用于治疗黑色素瘤的AXL-ADC的每个方面或实施方案同样适用于涉及通过施用AXL-ADC和一种或多种抑制剂治疗黑色素瘤的方法的方面或实施方案，反之亦然。此外，如本文任何方面或实施方案中所定义的任何AXL-ADC可以与一种或多种MAPK途径的抑制剂组合使用，例如，如本文所述的丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂。附图说明图1.抗AXL抗体与用以下转染的HEK293细胞的结合曲线：(A)人AXL-ECD，(B)食蟹猴AXL-ECD，或(C)小鼠AXL-ECD。所显示的数据是一个代表性实验的平均荧光强度(MFI)，如实施例2中所述。图2.抗AXL抗体与小鼠-人AXL嵌合体的结合如实施例3中所述进行。测试了以下智人AXL(hsAXL)和小家鼠AXL(mmAXL)嵌合蛋白：(A)hsAXL和模拟物，(B)hsAXL-mmECD，(C)hsAXL-mmIg1，(D)hsAXL-mmIg2，(E)hsAXL-mmFN1，(F)hsAXL-mmFN2。图3.在A431细胞中，抗AXL抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。如实施例4中所述测定了在A431细胞中由抗AXL抗体引起的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。图4.AXL抗体-药物缀合物(AXL-ADC)的结合特性。如实施例5中所述测定了AXL-ADC与用人AXL瞬时转染的HEK293T细胞的结合。所显示的数据是一个代表性实验的平均荧光强度(MFI)。图5.由AXL抗体-药物缀合物诱导的体外细胞毒性。如实施例6中解释的，测定了由AXL抗体-药物缀合物诱导的细胞毒性。图6.允许结合至AXL的抗体VH和VL变体。比对了具有相同VL或VH区的抗体，并且分别鉴定了VH(图A-D)或VL(图E)序列中的差异并在图中用方框标明。CDR区用下划线标明。图7.如实施例8中所述测定了LCLC-103H细胞中由ADC诱导的细胞毒性。图8.如实施例9中所述，在治疗性LCLC-103H异种移植模型中MMAE缀合的AXL抗体的抗肿瘤活性。图9.如实施例10中所述，使用AXL单克隆抗体的集合进行冷冻PAXF1657肿瘤切片(胰腺癌PDX模型)的免疫组织化学染色。图10.(A)用AXL-ADC治疗性处理后的平均肿瘤尺寸(PAXF1657模型)。未缀合的AXLHumab(C)和未靶向的ADC(D)未显示出抗肿瘤活性，表明AXL-ADC的治疗能力依赖于MMAE的细胞毒性活性并且本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.包含结合至人AXL的抗体的抗体‑药物缀合物(ADC)，用于与一种或多种MAP激酶(MAPK)途径的抑制剂组合治疗受试者的黑色素瘤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.07.08 EP PCT/EP2016/066353;2016.01.13 US 62/21.包含结合至人AXL的抗体的抗体-药物缀合物(ADC)，用于与一种或多种MAP激酶(MAPK)途径的抑制剂组合治疗受试者的黑色素瘤。2.权利要求1的ADC，其中一种或多种MAPK途径的抑制剂包含B-RAF(BRAF)抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂或其任何两种或更多种的组合。3.前述权利要求中任一项的ADC，其中一种或多种MAPK途径的抑制剂包含丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂或两者。4.权利要求1至3中任一项的ADC，其中一种或多种MAPK途径的抑制剂包含BRAF抑制剂或由BRAF抑制剂组成。5.权利要求4的ADC，其中BRAF抑制剂选自威罗菲尼、达拉菲尼、encorafenib、索拉菲尼、PLX4720、GDC-0879、RAF265、SB590885、AZ628、AB-024、TAK-580、BAL-3833、BGB-283，或其任何治疗有效的类似物或衍生物，任选地其中黑色素瘤在BRAF中表现出突变，提供BRAF抑制剂对突变BRAF的激酶活性的抑制。6.权利要求5的ADC，其中BRAF抑制剂是威罗菲尼或其治疗有效的类似物或衍生物。7.权利要求5的ADC，其中BRAF抑制剂是达拉菲尼或其治疗有效的类似物或衍生物。8.权利要求5的ADC，其中BRAF抑制剂是encorafenib或其治疗有效的类似物或衍生物。9.权利要求5的ADC，其中BRAF抑制剂是索拉菲尼或其治疗有效的类似物或衍生物。10.权利要求5至9中任一项的ADC，其中黑色素瘤在BRAF中表现出突变。11.权利要求10的ADC，其中突变位于选自V600、L597和K601的BRAF残基中，例如V600。12.权利要求11的ADC，其中BRAF中的突变选自V600E、V600K、V600D、L597R和K601E，例如V600E。13.权利要求5至12中任一项的ADC，其中黑色素瘤在NRAS中不表现出选自残基Q61、G12和G13的突变。14.权利要求13的ADC，其中黑色素瘤在NRAS中不表现出活化突变。15.权利要求1至3中任一项的ADC，其中一种或多种MAPK途径的抑制剂包含MEK抑制剂或由MEK抑制剂组成。16.权利要求15的ADC，其中MEK抑制剂选自曲美替尼、cobimetinib、binimetinib、selumetinib、refametinib、pimasertib、U0126-EtOH、PD184352、BIX02189，或其任何治疗有效的类似物或衍生物。17.权利要求16的ADC，其中MEK抑制剂是曲美替尼或其治疗有效的类似物或衍生物。18.权利要求16的ADC，其中MEK抑制剂是cobimetinib或其治疗有效的类似物或衍生物。19.权利要求16的ADC，其中MEK抑制剂是binimetinib或其治疗有效的类似物或衍生物。20.权利要求16的ADC，其中MEK抑制剂是selumetinib或其治疗有效的类似物或衍生物。21.权利要求15至20中任一项的ADC，其中黑色素瘤在NRAS中表现出突变，例如在选自Q61、G12和G13的NRAS残基中，例如Q61。22.权利要求21的ADC，例如在NRAS中选自Q61R、Q61K、Q61L、G12D、G12S、G12C、G12V、G13D和G13R的突变。23.权利要求1至3中任一项的ADC，其中一种或多种MAPK途径的抑制剂包含ERK抑制剂或由ERK抑制剂组成。24.权利要求23的ADC，其中ERK抑制剂选自LTT-462、ulixertinib、SCH772984和VTX11E，或其任何治疗有效的类似物或衍生物。25.前述权利要求中任一项的ADC，其与BRAF抑制剂和MEK抑制剂组合。26.权利要求25的ADC，其中(a)BRAF-抑制剂选自威罗菲尼、达拉菲尼、encorafenib、索拉菲尼、GDC-0879、RAF265、SB590885、AZ628、AB-024、TAK-580、BAL-3833、BGB-283，或其任何治疗有效的类似物或衍生物；和/或(b)MEK抑制剂选自曲美替尼、cobimetinib、binimetinib、selumetinib、refametinib、pimasertib、U0126-EtOH、PD184352、BIX02189，或其治疗有效的类似物或衍生物。27.权利要求25和26中任一项的ADC，其与以下组合：(a)威罗菲尼和曲美替尼；(b)威罗菲尼和cobimetinib；(c)威罗菲尼和binimetinib；(d)威罗菲尼和selumetinib；(e)达拉菲尼和曲美替尼；(f)达拉菲尼和cobimetinib；(g)达拉菲尼和binimetinib；(h)达拉菲尼和selumetinib；(i)encorafenib和曲美替尼；(j)encorafenib和cobimetinib；(k)encorafenib和binimetinib；(l)encorafenib和selumetinib；(m)索拉菲尼和曲美替尼(n)索拉菲尼和cobimetinib；(o)索拉菲尼和binimetinib；或(p)索拉菲尼和selumetinib，任选地其中黑色素瘤表现出BRAF突变，提供BRAF抑制剂对突变BRAF的激酶活性的抑制。28.权利要求27的ADC，其与威罗菲尼和曲美替尼组合。29.权利要求27的ADC，其与达拉菲尼和曲美替尼组合。30.权利要求26-28中任一项的ADC，其中BRAF突变位于选自V600、L597和K601的BRAF残基中，例如V600。31.权利要求30的ADC，其中BRAF突变选自V600E、V600K、V600D、L597R和K601E，例如V600E。32.权利要求26-28中任一项的ADC，其中黑色素瘤在选自Q61、G12和G13的残基中不表现出NRAS突变。33.权利要求32的ADC，其中黑色素瘤不表现出活化的NRAS突变。34.前述权利要求中任一项的ADC，其中ADC和一种或多种MAPK途径的抑制剂同时、分开或顺序施用。35.权利要求34的ADC，其中黑色素瘤早先未用所述至少一种抑制剂治疗。36.权利要求1至34中任一项的ADC，其中黑色素瘤正在用一种或多种MAPK途径的抑制剂进行治疗。37.权利要求1至34中任一项的ADC，其中黑色素瘤早先用一种或多种MAPK途径的抑制剂治疗。38.前述权利要求中任一项的ADC，其中黑色素瘤对一种或多种MAPK途径的抑制剂具有抗性。39.权利要求38的ADC，其中黑色素瘤对一种或多种MAPK途径的抑制剂具有内在抗性。40.权利要求38的ADC，其中黑色素瘤对一种或多种MAPK途径的抑制剂具有获得性抗性。41.前述权利要求中任一项的ADC，其中黑色素瘤是复发的黑色素瘤。42.权利要求38至41中任一项的ADC，其中黑色素瘤对威罗菲尼、达拉菲尼、encorafenib和索拉菲尼中的至少一种具有抗性。43.权利要求38至41中任一项的ADC，其中黑色素瘤对曲美替尼、cobimetinib、binimetinib和selumetinib中的至少一种具有抗性。44.权利要求1至37中任一项的ADC，其中黑色素瘤对所述一种或多种抑制剂无抗性。45.前述权利要求中任一项的ADC，其中ADC在4周内每1周、每2周、每3周或3次施用。46.前述权利要求中任一项的ADC，其中ADC以0.02-30mg/kg，例如约0.05-10mg/kg的剂量施用。47.前述权利要求中任一项的ADC，其中ADC包含与抗体连接的细胞毒性剂、化疗药物或放射性同位素。48.前述权利要求中任一项的ADC，其中治疗性部分是细胞毒性剂，其任选地用接头连接到ADC。49.权利要求48的ADC，其中接头是mc-vc-PAB且细胞毒性剂是MMAE。50.前述权利要求中任一项的ADC，其中抗体不与生长停滞特异性6(Gas6)竞争结合至人AXL。51.权利要求50的ADC，其中在Gas6存在的情况下抗体与人AXL的最大结合为在Gas6不存在的情况下的结合的至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少99％、例如100％，如通过竞争测定法所测定，其中所述结合至人AXL的抗体和所述Gas6之间的竞争在与Gas6和不与Gas6预孵育的A431细胞上确定。52.前述权利要求中任一项的ADC，其包含至少一个结合区，所述结合区包含选自以下的VH区和VL区：(a)VH区，其包含分别为SEQIDNo：36、37和38的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：39、GAS和40的CDR1、CDR2和CDR3序列，[107]；(b)VH区，其包含分别为SEQIDNo：46、47和48的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：49、AAS和50的CDR1、CDR2和CDR3序列，[148]；(c)VH区，其包含分别为SEQIDNo：114、115和116的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：117、DAS和118的CDR1、CDR2和CDR3序列，[733]；(d)VH区，其包含分别为SEQIDNo：51、52和53的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：55、GAS和56的CDR1、CDR2和CDR3序列，[154]；(e)VH区，其包含分别为SEQIDNo：51、52和54的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：55、GAS和56的CDR1、CDR2和CDR3序列，[154-M103L]；(f)VH区，其包含分别为SEQIDNo：57、58和59的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：60、GAS和61的CDR1、CDR2和CDR3序列，[171]；(g)VH区，其包含分别为SEQIDNo：62、63和64的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：65、GAS和66的CDR1、CDR2和CDR3序列，[172]；(h)VH区，其包含分别为SEQIDNo：67、68和69的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：70、GAS和71的CDR1、CDR2和CDR3序列，[181]；(i)VH区，其包含分别为SEQIDNo：72、73和75的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：76、ATS和77的CDR1、CDR2和CDR3序列，[183]；(j)VH区，其包含分别为SEQIDNo：72、74和75的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：76、ATS和77的CDR1、CDR2和CDR3序列，[183-N52Q]；(k)VH区，其包含分别为SEQIDNo：78、79和80的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：81、AAS和82的CDR1、CDR2和CDR3序列，[187]；(l)VH区，其包含分别为SEQIDNo：83、84和85的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：86、GAS和87的CDR1、CDR2和CDR3序列，[608-01]；(m)VH区，其包含分别为SEQIDNo：88、89和90的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：91、GAS和92的CDR1、CDR2和CDR3序列，[610-01]；(n)VH区，其包含分别为SEQIDNo：93、94和95的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：96、GAS和97的CDR1、CDR2和CDR3序列，[613]；(o)VH区，其包含分别为SEQIDNo：98、99和100的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：101、DAS和102的CDR1、CDR2和CDR3序列，[613-08]；(p)VH区，其包含分别为SEQIDNo：103、104和105的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：106、GAS和107的CDR1、CDR2和CDR3序列，[620-06]；(q)VH区，其包含分别为SEQIDNo：108、109和110的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：112、AAS和113的CDR1、CDR2和CDR3序列，[726]；(r)VH区，其包含分别为SEQIDNo：108、109和111的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：112、AAS和113的CDR1、CDR2和CDR3序列，[726-M101L]；(s)VH区，其包含分别为SEQIDNo：41、42和43的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：44、AAS和45的CDR1、CDR2和CDR3序列，[140]；(t)VH区，其包含分别为SEQIDNo：93、94和95的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：128、XAS(其中X是D或G)和129的CDR1、CDR2和CDR3序列，[613/613-08]；(u)VH区，其包含分别为SEQIDNo：46、119和120的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：49、AAS和50的CDR1、CDR2和CDR3序列，[148/140]；(v)VH区，其包含分别为SEQIDNo：123、124和125的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：60、GAS和61的CDR1、CDR2和CDR3序列，[171/172/181]；以及(w)VH区，其包含分别为SEQIDNo：121、109和122的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：112、AAS和113的CDR1、CDR2和CDR3序列，[726/187]；以及(x)VH区，其包含分别为SEQIDNo：93、126和127的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：96、GAS和97的CDR1、CDR2和CDR3序列，[613/608-01/610-01/620-06]。53.前述权利要求中任一项的ADC，其包含至少一个结合区，所述结合区包含(a)包含分别SEQIDNo.:36、37和38的CDR1、CDR2和CDR3序列的VH区，和(b)包含分别SEQIDNo.:39、GAS和40的CDR1、CDR2和CDR3序列的VL区，[107]。54.前述权利要求中任一项的ADC，其中抗体包含至少一个结合区，所述结合区包含选自以下的VH区和VL区：(a)与SEQIDNo:1具有至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少99％同一性的VH区，和与SEQIDNo:2具有至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少99％同一性的VL区，[107...

【专利技术属性】
技术研发人员：J伯舒依泽，E布雷吉，L科普曼，D撒亭金，E范登布林克，D维兹基，R德荣，R梵迪克胡依泽拉达斯马，D皮帕，P帕伦，
申请(专利权)人：根马布股份公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK