因子XA解毒剂的冻干制剂制造技术

本公开涉及制备因子Xa(fXa)解毒剂的冻干制剂的溶液和方法。适用于冻干的合适的水性制剂可以包括fXa解毒剂、增溶剂、以及稳定剂，其中所述制剂在冻干期间不塌陷。

Freeze-dried preparation of factor XA antidote

The present disclosure relates to the solution and method of lyophilized preparation of factor Xa (fXa) antidote. Suitable water-based preparations for freeze-drying may include fXa antidote, solvents, and stabilizers, in which the preparation does not collapse during freeze-drying.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】因子XA解毒剂的冻干制剂
技术介绍
抗凝剂满足了市场上对在有形成血凝块的倾向的患者，例如像患有凝血障碍、被局限于一段时间不动或接受医疗手术的那些患者中治疗或预防不期望的血栓形成的需求。然而，抗凝治疗的主要局限之一是与所述治疗相关的出血风险以及在给药过量的情况下或如果需要紧急手术程序的话，快速逆转抗凝剂活性的能力方面的限制。因此，非常需要针对所有形式的抗凝治疗的特异性的和有效的解毒剂。当口服递送不可行或需要即时治疗活性时，通过注射递送生物活性蛋白质一般是所选择的递送途径。然而，生物学障碍、化学障碍、以及物理障碍，如不佳的长期储存、重量克分子渗透压浓度、溶解度、以及稳定性使得通过注射向哺乳动物递送生物活性剂是有问题的。冻干可以解决长期储存问题。尽管如此，在冻干的情况下也存在问题，如冻干物的溶解度和稳定性不佳。因此，存在对针对抗凝剂的解毒剂的改进的注射制剂的需求，所述注射制剂是稳定的并且可溶的。本公开满足了这些需求和其它需求。本文提到的任何和所有出版物、专利、专利申请在此以引用的方式整体并入本文。
技术实现思路
本公开提供了被称为“r-解毒剂”的因子Xa(fXa)蛋白质的衍生物(SEQIDNO:8)或它的变体(例如SEQIDNO:9)的冻干制剂。与野生型fXa蛋白质相比，所述r-解毒剂和它的变体包括对Gla结构域和活性位点的修饰，保留fXa结合fXa抑制剂的能力，但是不能组装成凝血酶原酶复合物。所述r-解毒剂是双链多肽(参见表3中的SEQIDNO.7，它包括轻链(SEQIDNO.2)和重链(SEQIDNO.3)，所述轻链和所述重链以所述轻链的半胱氨酸98(Cys98)与所述重链的半胱氨酸108(Cys108)之间的单个二硫键连接。还如同野生型fXa，所述r-解毒剂经历翻译后修饰，从而引起某些氨基酸残基处的糖基化，例如所述轻链的Ser56、Ser72、Ser76和Thr82以及所述重链的Thr249；和修饰的残基，即所述轻链的Asp29处的(3R)-3-羟基Asp。此外，除了链间二硫键之外，在所述轻链的半胱氨酸16与半胱氨酸27、半胱氨酸21与半胱氨酸36、半胱氨酸38与半胱氨酸47、半胱氨酸55与半胱氨酸66、半胱氨酸62与半胱氨酸75、和半胱氨酸77与半胱氨酸90之间、以及在所述重链的半胱氨酸7与半胱氨酸12、半胱氨酸27与半胱氨酸43、半胱氨酸156与半胱氨酸170、和半胱氨酸181与半胱氨酸209之间还形成链内二硫键。当被配制成适用于施用的组合物时，诸如r-解毒剂的蛋白质可以在疏水界面处聚集并且形成颗粒。因此，在冷冻和冻干过程期间，可能期望使用各种冷冻保护剂和冻干保护剂将蛋白质维持在无定形相中。还期望开发高浓度的蛋白质的合适的无定形制剂。因此，本文提供了诸如r-解毒剂的蛋白质的冻干组合物。本文还提供了适用于冻干的诸如r-解毒剂的蛋白质的水性制剂。在一些实施方案中，所述冻干组合物是可通过将如本文所述的水性制剂冻干而获得的。一些实施方案提供了一种可通过将水性制剂冻干而获得的冻干组合物，其中所述水性制剂包含稳定剂、25mM至110mM的精氨酸、以及至少15mg/mL的双链多肽，所述双链多肽包含：包含氨基酸序列SEQIDNO.4的第一链和包含氨基酸序列SEQIDNO.5的第二链，其中所述多肽不能组装成凝血酶原酶复合物；所述水性制剂具有7.5至8的pH值；所述稳定剂包含2％至7％的蔗糖(w/v)和0％至5％的甘露糖醇(w/v)；并且所述稳定剂与所述多肽的摩尔比是至少100。在一些实施方案中，冻干组合物是可通过将水性制剂冻干而获得的，其中所述水性制剂包含约45mM的精氨酸、约6％的蔗糖(w/v)、0％的甘露糖醇、以及约20mg/mL的双链多肽，所述双链多肽包含：包含氨基酸序列SEQIDNO.4的第一链和包含氨基酸序列SEQIDNO.5的第二链，其中所述多肽不能组装成凝血酶原酶复合物；并且所述水性制剂具有约7.8的pH值。在一些实施方案中，冻干组合物是可通过将水性制剂冻干而获得的，其中所述水性制剂包含约100mM的精氨酸、约6％的蔗糖(w/v)、0％的甘露糖醇、以及约40mg/mL的双链多肽，所述双链多肽包含：包含氨基酸序列SEQIDNO.4的第一链和包含氨基酸序列SEQIDNO.5的第二链，其中所述多肽不能组装成凝血酶原酶复合物；并且所述水性制剂具有约7.8的pH值。本公开的另一个实施方案提供了一种溶液，所述溶液是通过溶解本公开的冻干组合物来制备的。在一些方面，溶剂是水或盐水。又另一个实施方案提供了一种在接受用因子Xa抑制剂进行的抗凝治疗的受试者中减少出血的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开的溶液。在一些方面，所述因子Xa抑制剂是阿哌沙班(apixaban)、利伐沙班(rivaroxaban)或贝曲西班(betrixaban)。具体实施方式I.定义所有数字指示，例如pH值、温度、时间、浓度、以及分子量(包括范围在内)都是变化(+)或(-)0.1％或10％的增量的近似值。应当了解的是，尽管并非总是明确说明，但是在所有数字指示之前都有术语“约”。还应当了解的是，尽管并非总是明确说明，但是本文所述的试剂仅仅是示例性的并且这些试剂的等同物是本领域已知的。除非上下文另外明确规定，否则如本说明书和权利要求书中所用的单数形式“一个(种)(a/an)”和“所述”包括复数指代对象。举例来说，术语“一种药学上可接受的载体”包括多种药学上可接受的载体，包括其混合物在内。如本文所用的术语“包含”意图意指组合物和方法包括所叙述的要素，但是并不排除其它要素。“基本上由……组成”在用于限定组合物和方法时应当意指排除对用于预期用途的组合具有任何重要意义的其它要素。因此，基本上由如本文所限定的要素组成的组合物将不会排除来自分离方法和纯化方法的痕量污染物和药学上可接受的载体，如磷酸盐缓冲盐水、防腐剂等。“由……组成”应当意指排除超过痕量的其它成分的元素和用于施用本公开的组合物的基本方法步骤。由这些过渡术语中的每一个过渡术语所限定的实施方案落入本公开的范围内。术语“蛋白质”和“多肽”是可互换使用的并且在它们的最广泛的意义上指的是两个或更多个亚基氨基酸、氨基酸类似物、或拟肽的化合物。所述亚基可以通过肽键连接。在另一个实施方案中，所述亚基可以通过其它键，例如酯、醚等来连接。蛋白质或肽必须含有至少两个氨基酸并且可以构成蛋白质的序列或肽的序列的氨基酸的最大数量没有限制。如本文所用的术语“氨基酸”指的是天然氨基酸和/或非天然氨基酸或合成氨基酸，包括甘氨酸以及D型光学异构体和L型光学异构体这两者、氨基酸类似物以及拟肽。天然存在的氨基酸的单字母缩写和三字母缩写列于下文中。“因子Xa”或“fXa”或“fXa蛋白质”是血液凝固途径中的丝氨酸蛋白酶，所述丝氨酸蛋白酶由无活性的因子X(fX，SEQIDNO.1，表1)产生。编码人类因子X(“fX”)的核苷酸序列可以登录号“NM_000504”在基因库中找到。在催化切割重链的前52个残基之后，fX被激活成fXa。FXa含有轻链和重链。轻链的前45个氨基酸残基(SEQIDNO.1的残基1-45)被称作Gla结构域，这是因为它含有11个翻译后修饰的γ-羧基谷氨酸残基(Gla)。它还含有短的(6个氨基酸残基)芳族本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种冻干组合物，所述冻干组合物能够通过将水性制剂冻干而获得，其中：所述水性制剂包含稳定剂、25 mM至110 mM的精氨酸、以及至少15 mg/mL的双链多肽，所述双链多肽包含：包含氨基酸序列SEQ ID NO. 4的第一链和包含氨基酸序列SEQ ID NO. 5的第二链，其中所述多肽不能组装成凝血酶原酶复合物；所述水性制剂具有7.5至8的pH值；所述稳定剂包含2%至7%的蔗糖(w/v)和0%至5%的甘露糖醇(w/v)；并且所述稳定剂与所述多肽的摩尔比是至少100。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.24 US 62/299,3691.一种冻干组合物，所述冻干组合物能够通过将水性制剂冻干而获得，其中：所述水性制剂包含稳定剂、25mM至110mM的精氨酸、以及至少15mg/mL的双链多肽，所述双链多肽包含：包含氨基酸序列SEQIDNO.4的第一链和包含氨基酸序列SEQIDNO.5的第二链，其中所述多肽不能组装成凝血酶原酶复合物；所述水性制剂具有7.5至8的pH值；所述稳定剂包含2%至7%的蔗糖(w/v)和0%至5%的甘露糖醇(w/v)；并且所述稳定剂与所述多肽的摩尔比是至少100。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述水性制剂包含40mM至50mM的精氨酸、5.5%至7.5%的蔗糖(w/v)、以及20mg/mL的所述多肽。3.如权利要求1所述的组合物，其中所述水性制剂包含90mM至110mM的精氨酸、5.5%至7.5%的蔗糖(w/v)、以及至少30mg/mL的所述多肽。4.如权利要求3所述的组合物，其中所述水性制剂包含45mg/mL的所述多肽。5.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述水性制剂不包含甘露糖醇。6.如权利要求1所述的组合物，其中所述水性制剂不包含甘露糖醇并且包含40mg/mL的所述多肽。7.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述多肽包含被修饰为与天然氨基酸不同的氨基酸残基。8.如权利要求6所述的组合物，其中所述第一链的残基Asp29在Asp29处被修饰成(3R)-3-羟基Asp。9.如权利要求1-6中任一项所述的组合物，其中所述多肽包含所述第一链和所述第二链中的每一个的至少一个...

【专利技术属性】
技术研发人员：蓬·M·阮，
申请(专利权)人：博尔托拉制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US