基于RT-WES的转录组测序方法技术

本发明专利技术公开了一种基于RT‑WES的转录组测序方法，步骤包括：1)提取样本总RNA；2)以总RNA为模板合成cDNA；3)构建cDNA片段化文库；4)对所述片段化文库进行全外显子捕获，富集功能基因的转录组片段；5)对所述转录组片段测序并分析测序数据。本发明专利技术采用反转录‑全外显子组测序技术，通过cDNA合成过程，先将RNA转化成DNA，再通过全外显子捕获来富集外显子信息，获得rRNA和基因组DNA干扰少、功能基因表达富集高、背景低的转录组测序数据，如此降低了对RNA的质量和起始量的要求，免去了去除rRNA干扰的步骤，为突变基因转录本表达变化分析提供了更为精准高效的途径。

【技术实现步骤摘要】
基于RT-WES的转录组测序方法
本专利技术涉及生物领域，特别是涉及转录组的数据获得和分析技术，更具体的说，是涉及一种基于逆转录-全外显子捕获技术(RT-WES)的转录组测序方法。
技术介绍
转录组是在某一特定发育时期或某一生理条件下，一个活细胞所能转录出来的所有RNA的总和。转录组分析是研究细胞表型和功能的一个重要手段。目前常规的转录组分析方法主要有基于杂交技术的生物芯片(包括cDNA芯片和寡聚核苷酸芯片)技术和基于序列分析的RNA测序技术。其中：生物芯片技术是半定量杂交分析技术，只能分析不同基因转录本表达高低，无法同时大量地分析组织或细胞内基因组表达的状况，而且由于芯片技术需要准备基因探针，所以可能漏掉那些未知的、表达丰度不高的、但可能很重要的调节基因，因此已无法满足现代肿瘤学研究的需求。RNA测序技术(RNA-seq)的优点是：可以定量分析转录本表达量的变化；在肿瘤学研究中，可以通过RNA突变获得突变基因表达的信息，并有效准确地获得融合基因是否存在的信息。缺点是：对样本RNA的质量和起始量要求高(要求RNA完整性RIN>7，起始量>2μg)，需要使用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于RT‑WES的转录组测序方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取样本总RNA；2)以所述总RNA为模板，合成cDNA；3)构建cDNA片段化文库；4)对所述片段化文库进行全外显子捕获，富集功能基因的转录组片段；5)对所述转录组片段进行测序并分析测序数据。

【技术特征摘要】
1.基于RT-WES的转录组测序方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取样本总RNA；2)以所述总RNA为模板，合成cDNA；3)构建cDNA片段化文库；4)对所述片段化文库进行全外显子捕获，富集功能基因的转录组片段；5)对所述转录组片段进行测序并分析测序数据。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1),所述样本为临床样本。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1),所述样本为用福尔马林固定和石蜡包埋的组织样本。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)进一步包括以下步骤：21)以所述总RNA为模板，在逆转录酶的作用下，合成cDNA的第一链；22)以所述第一链为模板，在DNA聚合酶的作用下，合成cDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：王冠，王晨，魏金旺，张敖，戴春，许强，
申请(专利权)人：领星生物科技上海有限公司，上海领安生物科技有限公司，启东领星医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31