一种多糖及在CIK细胞培养方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多糖及在CIK细胞培养方面的应用，制备方法包括：步骤S1、紫穗槐叶用95％乙醇浸泡，过滤收集滤渣；滤渣用水提取，过滤收集滤液；滤液加入95％乙醇，静置，离心收集沉淀；沉淀用水复溶，冷冻干燥得到紫穗槐叶粗多糖；紫穗槐叶粗多糖配制成1％多糖溶液，缓慢滴加无水乙醇至乙醇浓度为30％，静置离心，沉淀复溶冻干得F30组分；上清液中缓慢滴加无水乙醇至乙醇浓度达40％，静置离心，沉淀复溶冻干得F40组分；上清液中缓慢滴加无水乙醇至乙醇浓度达50％，静置离心，沉淀复溶冻干得F50组分；上清液中缓慢滴加无水乙醇至乙醇浓度达60％，静置离心，沉淀复溶冻干得F60组分。

【技术实现步骤摘要】
一种多糖及在CIK细胞培养方面的应用
本专利技术属于化学领域，涉及一种多糖及在CIK细胞培养方面的应用。
技术介绍
紫穗槐Amorphafruticosa为豆科Leguminosae多年生落叶灌木，别名棉槐、椒条、棉条、穗花槐。花，清热、凉血、止血；叶，微苦、凉，具有祛湿消肿功效，主治痈肿、湿疹、烧烫伤。原产美国东北部和东南部，系多年生优良绿肥，蜜源植物，耐瘠，耐水湿和轻度盐碱土，又能固氮。现我国东北、华北、西北及山东、安徽、江苏、河南、湖北、广西、四川等省区均有栽培。枝叶作绿肥、家畜饲料；茎皮可提取栲胶，枝条编制篓筐；果实含芳香油，种子含油率10％，可作油漆、甘油和润滑油之原料。栽植于河岸、河堤、沙地、山坡及铁路沿线，有护堤防沙、防风固沙的作用。近年来，对紫穗槐的化学成分和药理活性研究的逐步深入，发现很多活性成分，在抗肿瘤、抗病毒、保肝、杀虫等方面显示出潜在的药用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种多糖及在CIK细胞培养方面的应用。本专利技术通过下面的技术方案实现：技术方案一：一种用于促进CIK细胞增殖的多糖，重均分子量为322.3KDa。上述多糖的制备方法，包括如下步骤：步骤S1、紫穗槐叶粗多糖的制备将紫穗槐叶剪碎，用体积分数95％乙醇溶液浸泡24h，料液比1:40，过滤收集滤渣；滤渣用水于85℃提取3次，每次2h，料液比1:25，合并提取液，过滤收集滤液；滤液真空浓缩至原有体积1/5，加入5倍体积95％乙醇，静置24h，离心收集沉淀；沉淀用水复溶，冷冻干燥得到紫穗槐叶粗多糖；步骤S2、紫穗槐叶分级多糖F30的制备每10g紫穗槐叶粗多糖溶解于1L的去离子水中形成浓度为1％(w/v，g/mL)的多糖溶液，然后向溶液中缓慢滴加无水乙醇，并不断搅拌使溶液至乙醇浓度为30％(v/v，mL/mL)，静置24h，离心20min(4℃、10000×g)，沉淀复溶冻干得F30组分；F30组分即为所述多糖。上述多糖在CIK细胞培养扩增方面的应用。技术方案二：一种用于促进CIK细胞增殖的多糖，重均分子量为258.1KDa。上述多糖的制备方法，包括如下步骤：步骤S1、紫穗槐叶粗多糖的制备将紫穗槐叶剪碎，用体积分数95％乙醇溶液浸泡24h，料液比1:40，过滤收集滤渣；滤渣用水于85℃提取3次，每次2h，料液比1:25，合并提取液，过滤收集滤液；滤液真空浓缩至原有体积1/5，加入5倍体积95％乙醇，静置24h，离心收集沉淀；沉淀用水复溶，冷冻干燥得到紫穗槐叶粗多糖；步骤S2、紫穗槐叶分级多糖F40的制备每10g紫穗槐叶粗多糖溶解于1L的去离子水中形成浓度为1％(w/v，g/mL)的多糖溶液，然后向溶液中缓慢滴加无水乙醇，并不断搅拌使溶液至乙醇浓度为30％(v/v，mL/mL)，静置24h，离心20min(4℃、10000×g)，沉淀复溶冻干得F30组分；然后向收集的上清液中缓慢滴加无水乙醇，直至混合溶液中乙醇浓度达到40％(v/v，mL/mL)，静置24h，离心20min(4℃、10000×g)，沉淀复溶冻干得F40组分；F40组分即为所述多糖。上述多糖在CIK细胞培养扩增方面的应用。技术方案三：一种用于促进CIK细胞增殖的多糖，重均分子量为153.2KDa。上述多糖的制备方法，包括如下步骤：步骤S1、紫穗槐叶粗多糖的制备将紫穗槐叶剪碎，用体积分数95％乙醇溶液浸泡24h，料液比1:40，过滤收集滤渣；滤渣用水于85℃提取3次，每次2h，料液比1:25，合并提取液，过滤收集滤液；滤液真空浓缩至原有体积1/5，加入5倍体积95％乙醇，静置24h，离心收集沉淀；沉淀用水复溶，冷冻干燥得到紫穗槐叶粗多糖；步骤S2、紫穗槐叶分级多糖F60的制备每10g紫穗槐叶粗多糖溶解于1L的去离子水中形成浓度为1％(w/v，g/mL)的多糖溶液，然后向溶液中缓慢滴加无水乙醇，并不断搅拌使溶液至乙醇浓度为30％(v/v，mL/mL)，静置24h，离心20min(4℃、10000×g)，沉淀复溶冻干得F30组分；然后向收集的上清液中缓慢滴加无水乙醇，直至混合溶液中乙醇浓度达到40％(v/v，mL/mL)，静置24h，离心20min(4℃、10000×g)，沉淀复溶冻干得F40组分；再向收集的上清液中缓慢滴加无水乙醇，直至混合溶液中乙醇浓度达到50％(v/v，mL/mL)，静置24h，离心20min(4℃、10000×g)，沉淀复溶冻干得F50组分；最后向收集的上清液中缓慢滴加无水乙醇，直至混合溶液中乙醇浓度达到60％(v/v，mL/mL)，静置24h，离心20min(4℃、10000×g)，沉淀复溶冻干得F60组分；F60组分即为所述多糖。上述多糖在CIK细胞培养扩增方面的应用。有益效果：本专利技术提供的紫穗槐叶分级多糖F30、F40、F60均一性较高，且可以显著促进CIK细胞的增殖，可以用于CIK细胞培养添加剂提高CIK细胞的增殖效率。附图说明图1为紫穗槐叶分级多糖F30、F40、F50、F60的HPGPC图谱；图2为紫穗槐叶分级多糖F30、F40、F60对CIK细胞的增殖促进作用。具体实施方式下面结合附图和实施例具体说明本专利技术实质性内容，但并不以此限定其保护范围。一、实验材料紫穗槐叶从东北林业大学林场苗圃采取，洗净阴干后备用。95％乙醇、无水乙醇购于南京化学试剂股份有限公司；GT-T551培养基、胎牛血清购于美国Gibco公司；CD3mAB购自北京同立源生物科技有限公司，IL-2购自江苏金丝利药业有限公司。二、实验方法1、紫穗槐叶粗多糖的制备将紫穗槐叶剪碎，用体积分数95％乙醇溶液浸泡24h，料液比1:40，过滤收集滤渣；滤渣用水于85℃提取3次，每次2h，料液比1:25，合并提取液，过滤收集滤液；滤液真空浓缩至原有体积1/5，加入5倍体积95％乙醇，静置24h，离心收集沉淀；沉淀用水复溶，冷冻干燥得到紫穗槐叶粗多糖；2、紫穗槐叶分级多糖(F30、F40、F50、F60)的制备每10g紫穗槐叶粗多糖溶解于1L的去离子水中形成浓度为1％(w/v，g/mL)的多糖溶液，然后向溶液中缓慢滴加无水乙醇，并不断搅拌使溶液至乙醇浓度为30％(v/v，mL/mL)，静置24h，离心20min(4℃、10000×g)，沉淀复溶冻干得F30组分；然后向收集的上清液中缓慢滴加无水乙醇，直至混合溶液中乙醇浓度达到40％(v/v，mL/mL)，静置24h，离心20min(4℃、10000×g)，沉淀复溶冻干得F40组分；再向收集的上清液中缓慢滴加无水乙醇，直至混合溶液中乙醇浓度达到50％(v/v，mL/mL)，静置24h，离心20min(4℃、10000×g)，沉淀复溶冻干得F50组分；最后向收集的上清液中缓慢滴加无水乙醇，直至混合溶液中乙醇浓度达到60％(v/v，mL/mL)，静置24h，离心20min(4℃、10000×g)，沉淀复溶冻干得F60组分。3、紫穗槐叶分级多糖(F30、F40、F50、F60)的均一性检测采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)对紫穗槐叶分级多糖F30、F40、F50、F60的均一性进行检测。利用Agilent1260HPLC进行分析，色谱条件：流动相为0.02％NaN3溶液，流速0.6mL/min；色谱柱Ultrahydroge本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于促进CIK细胞增殖的多糖，重均分子量为153.2KDa。

【技术特征摘要】
1.一种用于促进CIK细胞增殖的多糖，重均分子量为153.2KDa。2.权利要求1所述多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1、紫穗槐叶粗多糖的制备将紫穗槐叶剪碎，用体积分数95％乙醇溶液浸泡24h，料液比1:40，过滤收集滤渣；滤渣用水于85℃提取3次，每次2h，料液比1:25，合并提取液，过滤收集滤液；滤液真空浓缩至原有体积1/5，加入5倍体积95％乙醇，静置24h，离心收集沉淀；沉淀用水复溶，冷冻干燥得到紫穗槐叶粗多糖；步骤S2、紫穗槐叶分级多糖F60的制备每10g紫穗槐叶粗多糖溶解于1L的去离子水中形成浓度为1％(w/v，g/mL)的多糖溶液，然后向溶液中缓慢滴加无水乙醇，并不断搅拌使溶液至乙醇浓度为30％(v/v，mL/mL)，静置24...

【专利技术属性】
技术研发人员：林仁周，
申请(专利权)人：林仁周，
类型：发明
国别省市：江苏,32