一种石斛多糖提取方法技术

本发明专利技术公开了一种活性石斛多糖提取方法，其提取步骤如下:（1）新鲜石斛放入低温箱，并充入液氮保护，将温度降至‑45℃～‑55℃，并保温15～60 min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:5～10的固液比加入45℃～65℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）滤液采用Savg法去除蛋白质，离心分离，收集分离液；（5）分离液中加入浓度为85～97%的乙醇，沉淀得到石斛多糖；（6）将沉淀出的石斛多糖加入至石斛多糖溶解剂中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液冷冻干燥，即得高活性石斛多糖。采用本发明专利技术公开方法提取石斛多糖，成本低、得率高、生物活性物质含量高。

【技术实现步骤摘要】
一种石斛多糖提取方法
本专利技术涉及石斛，尤其是一种石斛多糖提取方法。
技术介绍
石斛（学名：DendrobiumnobileLindl），又名仙斛兰韵、不死草、还魂草、紫萦仙株、吊兰、林兰、禁生、金钗花等。茎直立，肉质状肥厚，稍扁的圆柱形，长10~60厘米，粗达1.3厘米。石斛作为一种名贵常用中草药，具有“阴伤津亏，口干烦渴，，食少干沤，病后虚热，目暗不明”之功效，被誉为中华九大仙草之首，《本草衍义》、《本草纲目拾遗》及《本草从新》等历代本草都倍加推崇，素有“千金草”之称，驰名中外。石斛中含有多种多糖、生物碱、氨基酸及淀粉等。其中石斛多糖、生物碱以及酚类等化合物的药理作用既相互联系又有一定的差别，生物碱的药理作用主要表现在抗肿瘤、对心血管疾病、胃肠道疾病的抑制作用及止痛退热等作用；酚类化合物主要表现在抗衰老等方面作用；而石斛多糖的药理作用主要表现在免疫、降血糖以及防癌、抗癌、抗衰老等方面。据报道石斛功效的强弱与多糖含量的高低密切相关。李满飞等对25种石解属植物36个样品进行研究，发现不同品种多糖含量差别很大。达到传统标准一一“嚼之粘牙，口甜者为优”的石斛样品中多糖含量均较高。目前，多糖的提取方法主要有加热浸提法、酶解法、超声提取法等，这些提取方法各有优劣，如罗傲雪等采用超声波辅助热回流技术提取马鞭石斛多糖,尚喜雨等采用水提法-酶法提取铁皮石斛多糖，中国专利技术专利ZL201610479404.2采用超声波辅助负压空化法提取铁皮石斛。但上述方法多采用水提取法，为了保证提取率都需要加热至80℃以上，温度升高虽有利于多糖的溶出，但也破坏了石斛多糖的生物活性。专利
技术实现思路
本专利技术目的在于，解决现有石斛多糖生物活性低的问题，提供一种得率高、成本低、生物活性高的石斛多糖提取方法。本专利技术公开的活性石斛多糖提取方法提取方法包括以下步骤：（1）新鲜石斛放入低温箱，并充入液氮保护，将温度降至-45℃～-55℃，并保温15～60min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:5～10的固液比加入45℃～65℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）滤液采用Savg法去除蛋白质，离心分离，收集液体；（5）液体加入浓度为85～97%的乙醇沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入至石斛多糖溶解剂中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液冷冻干燥，即得石斛多糖。冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎时，破碎至粒径为50～150目。Savg法去除蛋白质时，Sevage试剂由三氯甲烷与一元醇组成，三氯甲烷与一元醇的体积比为：3.5～5.5:1，其中一元醇为戊醇、正丁醇中的一种或两者的组合物。Savg法去除蛋白离心分离时，转速为4500～5000rpm，时间为10～20min；Savg法去除蛋白质离心分离后所得分离液进行乙醇沉淀时，分离液与乙醇的体积比为1:0.1～0.3。所述石斛多糖溶解剂由单糖、葡萄糖、环糊精、右旋糖酐、透明质酸、抗坏血酸、抗坏血酸钠中的一种或几种的组合物溶于去离子水中而得，溶质百分比浓度为0.1～15%。石斛多糖溶液进行冷冻干燥时，充入气态或液态的二氧化碳、氮气中的一种或两者的组合物进行保护，以防止石斛多糖氧化变质。采用本专利技术公开的方法提取石斛多糖，成本低、得率高、生物活性物质含量高。具体实施方式下面结合具体实施事例，进一步阐述本专利技术。应理解为，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解为，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术做出的各种改动或修改，这些等价形式仍属于本专利技术申请所附权利要求书限定的范围。实施例1:一种石斛多糖提取方法包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，充入液氮保护，将温度降至-50℃，并保温30min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，粉碎至粒径为60目；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:6的固液比加入50℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）选用三氯甲烷与戊醇体积比为4:1的混合溶剂为Sevage试剂，采用采用Savg法去除蛋白质，并在转速为4500rpm、时间为15min条件下离心分离，收集分离液；（5）分离液中按分离液与乙醇的体积比为1:0.15，加入浓度为90%的乙醇，沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入百分比浓度为5%的葡萄糖去离子水溶液中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液在二氧化碳保护下冷冻干燥，即得石斛多糖。采用本方法提取石斛多糖，得率可达33.35%，所得石斛多糖ABTS自由基的半数清除率达3.98mg/mL。实施例2:一种石斛多糖提取方法包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，充入液氮保护，将温度降至-55℃，并保温20min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，粉碎至粒径为80目；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:10的固液比加入60℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）选用三氯甲烷与正丁醇体积比为4.5:1的混合溶剂为Sevage试剂，采用采用Savg法去除蛋白质，并在转速为5000rpm、时间为10min条件下离心分离，收集分离液；（5）分离液中按分离液与乙醇的体积比为1:0.2，加入浓度为93%的乙醇，沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入百分比浓度为1%的右旋糖酐去离子水溶液中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液在氮气保护下冷冻干燥，即得石斛多糖。采用本方法提取石斛多糖，得率可达32.95%，所得石斛多糖ABTS自由基的半数清除率达3.95mg/mL。实施例3:一种石斛多糖提取方法，包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，充入液氮保护，将温度降-55℃，并保温15min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，粉碎至粒径为150目；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:9的固液比加入65℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）选用三氯甲烷：戊醇：正丁醇体积比为8:1:1的混合溶剂为Sevage试剂，采用采用Savg法去除蛋白质，并在转速为5000rpm、时间为15min条件下离心分离，收集分离液；（5）分离液中按分离液与乙醇的体积比为1:0.25，加入浓度为95%的乙醇，沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入百分比浓度为3%的透明质酸去离子水溶液中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液在氮气保护下冷冻干燥，即得石斛多糖。采用本方法提取石斛多糖，得率可达33.45%，所得石斛多糖ABTS自由基的半数清除率达4.01mg/mL。实施例4:一种活性石斛多糖提取方法，其特征在于：活性石斛多糖提取方法包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，充入液氮保护，将温度降至-45℃，并保温60min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，粉碎至粒径为120目；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:8的固液比加入60℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）选用三氯甲烷与戊醇体积比为3.6:1的混合溶剂为Sevage试剂，采用采用Savg法去除蛋白质，并在转速为45000rpm、时间为15分钟条件下离心分离，收集分离液。（5）分离液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种石斛多糖提取方法，其特征在于：活性石斛多糖提取方法包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，并充入液氮保护，将温度降至‑45℃～‑55℃，并保温15～60 min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:5～10的固液比加入45℃～65℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）滤液采用Savg法去除蛋白质，离心分离，收集分离液；（5）分离液中加入浓度为85～97%的乙醇，沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入至石斛多糖溶解剂中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液冷冻干燥，即得石斛多糖。

【技术特征摘要】
1.一种石斛多糖提取方法，其特征在于：活性石斛多糖提取方法包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，并充入液氮保护，将温度降至-45℃～-55℃，并保温15～60min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:5～10的固液比加入45℃～65℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）滤液采用Savg法去除蛋白质，离心分离，收集分离液；（5）分离液中加入浓度为85～97%的乙醇，沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入至石斛多糖溶解剂中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液冷冻干燥，即得石斛多糖。2.如权利要求1所述的石斛多糖提取方法，其特征在于：将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，破碎至粒径为50～150目。3.如权利要求1所述的石斛多糖提取方法，其特征在于：Savg法去除蛋白质时，Sevage试剂由三氯甲烷与一元醇组成，三氯甲烷与一元醇的体积比为：3.5～5....

【专利技术属性】
技术研发人员：夏谦，卢红，周路，
申请(专利权)人：云南和瑾科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53