巴戟天水提物、寡糖和多糖制备，及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种巴戟天水提物、粗多糖、寡糖和多糖组分，及其制备方法、用途。其优点在于：从巴戟天根中通过水浸提的方式提取得到巴戟天水提物和粗多糖，进而将粗多糖分离得到其中的寡糖和多糖组分，并进行了性质测定。实验表明本发明专利技术的巴戟天水提物和粗多糖均能促进小鼠脾脏细胞增殖和细胞因子分泌，促进人肝细胞的增殖和降低毒剂对细胞的损伤，能抑制乙肝表面抗原和核心抗原的表达，抑制肝癌细胞的增殖以及抑制ConA对小鼠肝脏和肾脏的造成的损伤，生物活性显著优于其他方法制得的巴戟天寡糖、多糖或巴戟天多糖组分，具备开发成免疫调节剂、抗肝损伤和抗肿瘤药物或保健食品的前景。制备步骤简单，制备过程对环境污染小，适于工业生产。

Preparation of water extract, oligosaccharide and polysaccharide from Morinda officinalis how, and its application

The invention relates to an aqueous extract, crude polysaccharide, oligosaccharide and polysaccharide component of Morinda officinalis, a preparation method and application thereof. The advantages of this method are: water extract and crude polysaccharide of Morinda officinalis L. were extracted from the roots of Morinda officinalis L. by water extraction, and then oligosaccharides and polysaccharides were separated from the crude polysaccharides, and their properties were determined. Experiments show that the water extract and crude polysaccharide of Morinda officinalis can promote the proliferation of mouse spleen cells and secretion of cytokines, promote the proliferation of human hepatocytes and reduce the damage of toxicants to cells, inhibit the expression of hepatitis B surface antigen and core antigen, inhibit the proliferation of hepatocellular carcinoma cells and inhibit ConA to mice liver and kidney. The bioactivity of Morinda officinalis oligosaccharides, polysaccharides or Morinda officinalis polysaccharides prepared by other methods is significantly better than that of other methods. It has the prospects of developing immunomodulators, anti-liver injury and anti-cancer drugs or health food. The preparation process is simple, and the preparation process has little environmental pollution and is suitable for industrial production.

【技术实现步骤摘要】
巴戟天水提物、寡糖和多糖制备，及其应用
本专利技术属于中药学、肝病学和免疫学
，涉及巴戟天寡糖、粗多糖和多糖组分，其制备方法及用途。具体地，本专利技术还涉及一种药物组合物以及所述巴戟天水提物、寡糖和多糖用于制备保肝和免疫调节之用途。
技术介绍
巴戟天是我国著名的四大南药之一，来源于茜草科巴戟天属(MorindaofficinalisHow)的干燥根，分布于广东、福建、广西、海南等省区的热带和亚热带地区。巴戟天具有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效，被誉为“补肾阳之要药”。巴戟天主要有环烯醚萜类、蒽醌化合物、糖类、有机酸类以及微量元素等。药理实验证明，巴戟天除具有补肾壮阳、祛风湿等作用外，还具有抗抑郁、抗炎、镇痛、抗氧化、抗衰老和免疫调节等多种生理作用【王欣，等.中国食品添加剂，2007,(6)：92-95.】。一、寡糖和多糖的化学研究巴戟天药材中含有较多的寡糖和多糖。崔承彬等从生巴戟天药材中分离得到4个寡糖成分，分别是耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、菊淀粉(2→1)-果呋喃糖基蔗糖的六聚糖和七聚糖【崔承彬，等.中国药物化学杂志，1995，5(1)：32-39】。杨振民等将巴戟天根粉碎后在70℃条件下加入20倍水浸提1.5小时，然后过滤、浓缩，在加入4倍体积乙醇醇沉过夜。沉淀部分水溶解后，采用Sevag试剂脱蛋白和双氧水脱色后，再加入4倍乙醇醇沉过夜。沉淀用无水乙醇洗涤，获得粗多糖(MOHP)。MOHP采用DEAE-SepharoseFF柱层析获得MOHP-1，MOHP-2和MOHP-3多糖组分。MOHP-1采用SephadexG-10进一步纯化，获得分子量均一多糖MOHP-1。MOHP-1分子量为2536Da，是由果糖以(2→1)糖苷键连接的菊淀粉性多糖，其结构为α-D-葡萄糖(1→2)-[β-D-果糖-(2→1)-β-D-果糖]n-(2→1)-β-D-果糖【杨振民，等.天然产物研究与开发，2011，23：1-5,24.】。冯峰等采用60％乙醇回流提取巴戟天，提取液经过HP-20大孔树脂分离，得到水洗脱部位。水洗部位在经过1号微晶纤维素和薄层层析硅胶柱(H)柱层析，分离出6个寡糖，分别为蔗糖(I)、耐斯糖(II)、菊粉六糖(III)、β-D-果吡喃糖-(2→1)-β-D-果呋喃糖-(2→1)-β-D-果呋喃糖(IV)、β-D-果吡喃糖-(2→1)-β-D-果呋喃糖-(2→1)-β-D-果呋喃糖-(2→1)-β-D-果呋喃糖(V)、β-D-果吡喃糖-(2→1)-β-D-果呋喃糖-(2→1)-β-D-果呋喃糖-(2→1)-β-D-果呋喃糖-(2→1)-β-D-果呋喃糖(VI)【中药材，2012，35(8)：1259-1262】。何传波等将巴戟天粉碎，经乙醚回流脱酯后，采用60℃热水浸提获得浸提液，在减压浓缩后加入5倍体积的95％醇沉过夜。沉淀加蒸馏水溶解，加入Sevage试剂脱蛋白、浓缩、冷冻干燥获得巴戟天粗多糖样品(MOHP)。MOHP经过DEAE-SepharoseCL-6B柱将离子交换柱和SephadexG100凝胶柱层析，得到了MOHP-I,MOHP-II,MOHP-III和MOHP-IV四个多糖组分。MOHP-I由葡萄糖和果糖组成，分子质量约为2ku，呋喃糖环结构；MOHP-III是一种糖蛋白，糖部分阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、果糖以及半乳糖组成，分子质量约为35ku。【何传波，等.华南理工大学学报(自然科学版)，2005，33(12)：29-33.】ZhangHL等将巴戟天先用95％乙醇回流后，残渣煎煮3次。煎煮液浓缩，加入乙醇醇沉，再Sevag法脱蛋白和活性炭脱色，继而冷冻干燥获得粗多糖MP。MP经DEAE-SepharoseCL-6B柱层析，水、0.1和0.3mol/LNaCl洗脱，获得MPA,MPB和MPC三个组分。MPA经SephadexG-75柱层析纯化，获得均一多糖MP-1。MP-1是一种果聚糖，2→1连接方式，葡萄糖和果糖的摩尔比为1:21。MPB和MPC经SephadexG-100柱层析得到二个酸性多糖MP-2和MP-3。【ZhangHL,etal.InterJBiolMacromol,2009,44:257-261】。何传波等将巴戟天经热水浸提、Sevag法除蛋白、乙醇沉淀和DEAE-SepharoseCL-6B离子交换柱层析，得到一种水溶性的巴戟天多糖MOPI-3.MOPI-3分子量为36061，是一种由阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖组成的杂多糖，以α-1,3-吡喃葡萄糖和α-1,4-吡喃半乳糖为主链，平均每5个葡萄糖连接一个半乳糖，每个重复单元具有一个支链，支链由3个呋喃阿拉伯糖以α-1,3-键型组成，连接在主链葡萄糖的6位碳上，MOPI-3含有乙酰基，连接在主链半乳糖的2位碳原子。该多糖的主要重复结构【何传波，等.高等学校化学学报，2009，30(12)：2391-2395】。二、寡糖和多糖生物活性研究1.抗抑郁刘建金在75℃条件下加入水提取巴戟天(W药材∶W水＝1：25)，再加热浓缩后，加入95％乙醇(W∶W＝1∶4)，静置于冰箱中12h，离心得巴戟天多聚糖，经膜过滤、去蛋白、冰冻干燥，得巴戟天多糖。采用T迷宫法研究巴戟天多聚糖抗抑郁作用。结果表明巴戟天多糖干预组T迷宫错误次数、海马区神经元数目和血清MDA水平均低于模型组和高于对照组，血清SOD水平高于模型组及对照组。提示巴戟天多糖能够减轻抑郁症大鼠体内氧化应激反应，减轻海马区神经元损伤，改善实验性抑郁症大鼠认知行为障碍【刘建金.中国现代医生，2011，49(16)：1-3】。张中启等采用小鼠强迫性游泳和获得性无助抑郁模型研究巴戟天寡糖(MOs)的抗抑郁作用。MOs含4聚糖8.27％,5聚糖6.10％,6聚糖13.09％和7聚糖45.38％；第2批(9905)含4聚糖13.60％,5聚糖7.74％,6聚糖12.87％和7聚糖30.96％；第3批(9906)含4聚糖12.17％,5聚糖7.68％,6聚糖11.74％和7聚糖31.57％(未提及制备方法和寡糖理化性质)。在大鼠获得性无助抑郁模型，MOs60～100mg/kg-1(ip,每天2次，连续8次)显著减少大鼠的逃避失败次数，60mg/kg-1还明显减少逃避失败动物数【张中启，等.中国药理与毒理学杂志，2001,15(4)：262-265】。邹连勇等研究巴戟天寡糖(北京同仁堂股份有限公司提供，寡糖含量占55.9％，未提及具体制备方法和性质)对海马神经细胞再生及神经元生长的影响。结果表明巴戟天寡糖50mg/kg能显著促进成年小鼠海马神经细胞的再生，10mg/mL能增加原代培养的海马神经元树突及分支数目(P＜0.05)【邹连勇，等.中国新药杂志，2012，21(22)：2623-2626】。2.抗骨质疏松刘亦恒等将巴戟天水煎煮、3倍乙醇醇沉、水复溶、Sevga法脱蛋白、活性炭脱色，再经无水乙醇，丙酮，乙醚洗涤，滤过。用蒸馏水溶解沉淀物，用无水乙醇加至其浓度为85％，得巴戟天多糖。研究该多糖对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响。结果表明巴戟天多糖(100mg/kg)给予模型大鼠3个月，能显著提高去卵巢大鼠的骨密度、骨矿物质、1,25一二羟基维生素D及骨钙素的含量【刘亦恒，等.海南本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种巴戟天水提物，其特征在于，所述的巴戟天水提物是按照以下方法制备得到的：取巴戟天根药材，加水浸提，料液比为1:(1‑20)kg/L，浸提温度为0‑100℃，浸提或煎煮，提取时间为1‑48小时，提取液过滤，滤渣在同样条件下再进行1‑2次提取；合并各次提取的水提液，离心，获得的上清液在50℃‑60℃下减压浓缩，得到浓缩的水提液，然后喷雾干燥或冷冻干燥，获得巴戟天水提物。

【技术特征摘要】
1.一种巴戟天水提物，其特征在于，所述的巴戟天水提物是按照以下方法制备得到的：取巴戟天根药材，加水浸提，料液比为1:(1-20)kg/L，浸提温度为0-100℃，浸提或煎煮，提取时间为1-48小时，提取液过滤，滤渣在同样条件下再进行1-2次提取；合并各次提取的水提液，离心，获得的上清液在50℃-60℃下减压浓缩，得到浓缩的水提液，然后喷雾干燥或冷冻干燥，获得巴戟天水提物。2.一种巴戟天粗多糖，其特征在于，所述的巴戟天粗多糖的制备方法包括以下步骤：步骤1：水提取巴戟天根药材粉碎，过10-30目筛，称取巴戟天根粉末，加水浸提，料液比为1:(1-20)kg/L，浸提温度为0-100℃，浸提或搅拌，提取时间为1-48小时，提取液过滤，滤渣在同样条件下再进行1-2次提取；合并各次提取的水提液，离心，获得的上清液在50℃-60℃下减压浓缩，得到浓缩的水提液；步骤2：醇沉向浓缩液中加入1-4倍体积的乙醇，使乙醇最终质量浓度为40％-80％，静置沉淀48-72小时后，离心，分离沉淀，沉淀部分加入水中搅拌溶解，离心，沉淀再加水进行1-2次如上的乙醇沉淀操作后，再用水反复溶解1-3次，离心，合并上清液；步骤3：除杂和回收将醇沉的沉淀再加水溶解，上清液装入截留分子量>1000Da的透析袋，用水透析24-72小时，进行1-3次透析；将透析袋内所截留的溶液在50℃-60℃下减压浓缩后，浓缩液进行冷冻干燥24-72小时，获得巴戟天粗多糖。3.根据权利要求2所述的巴戟天粗多糖，其特征在于，所述的巴戟天药材为未经提取的根块或粉末，或者经过有机溶剂萃取后得到的残渣根块或粉末。4.根据权利要求2所述的巴戟天粗多糖，其特征在于，所述的巴戟天粗多糖中以葡萄糖计算含糖量为40％-85％，以半乳糖醛酸计算糖醛酸含量为5-30％。5.一种巴戟天寡糖，其特征在于，所述的巴戟天寡糖是按照以下方法制备得到的：将权利要求2所述的巴戟天粗多糖加入一定体积水溶解，再加入2倍体积的乙醇，使乙醇终浓度50-70％，进行醇沉24-72小时，离心分离沉淀，上清部分再加入1-2倍...

【专利技术属性】
技术研发人员：高月求，刘晓燕，单俊杰，李曼，徐慧琳，周振华，陈彦旭，高亚婷，麻浩，赵修南，孙学华，张鑫，
申请(专利权)人：上海中医药大学附属曙光医院，中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，上海桑落医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31