用于生产糖蛋白的动物细胞株及方法、糖蛋白及其用途技术

本发明专利技术涉及用于生产糖蛋白的动物细胞株及方法、糖蛋白及其用途，本发明专利技术的用于生产以高甘露糖型糖链为主要N‑糖链结构的糖蛋白的动物细胞株的特征在于，所述细胞株的高尔基体甘露糖苷酶基因和内质网甘露糖苷酶基因中的至少两种基因被破坏或敲除。根据本发明专利技术，可以获得具有复合型糖链含量大大降低、以Man9‑GlcNAc2和Man8‑GlcNAc2等高甘露糖型N‑糖链为主要结构的糖蛋白。本发明专利技术生产的以高甘露糖型糖链为主要N‑糖链结构的糖蛋白可用于生产包含溶酶体酶，抗体等生物药物分子，从而能够用于治疗各种溶酶体贮积症。

【技术实现步骤摘要】
用于生产糖蛋白的动物细胞株及方法、糖蛋白及其用途
本专利技术涉及用于生产糖蛋白的动物细胞株及方法、糖蛋白及其用途，具体而言涉及用于生产以高甘露糖型糖链为主要N-糖链结构的糖蛋白的动物细胞株、使用该动物细胞株进行糖蛋白生产的方法，利用所述动物细胞株生产的糖蛋白以及该糖蛋白的用途。技术背景糖蛋白是生物体中一类重要的功能性蛋白，从结构上讲，糖蛋白是分支的寡糖链与多肽链共价相连所构成的复合糖，其中寡糖链与多肽链的连接方式主要分为以下几种类型：Asn残基结合型(也称为N-糖苷键型)、O-Ser/Thr型、GPI锚定型和蛋白聚糖型。本专利技术主要涉及具有N-糖苷键型糖链(也称为N糖链)的糖蛋白(俗称N-糖)的生产。N-糖苷键型糖链具有五糖核心，主要包括三类寡糖链：①高甘露糖型，由GlcNAc和甘露糖组成；②复合型：除了GlcNAc和甘露糖外，还有果糖、半乳糖、唾液酸等；③杂合型，同时包含①和②的特征。其中，高甘露糖型糖链是糖蛋白转运进哺乳动物细胞如人类细胞的溶酶体的标记，已发现该糖链被除去后糖蛋白不再能发挥其固有活性。溶酶体中含有多种水解酶，这些水解酶大部分是带有糖链的糖蛋白，它们可以将蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于生产以高甘露糖型糖链为主要N‑糖链结构的糖蛋白的动物细胞株，其特征在于，所述细胞株的高尔基体甘露糖苷酶基因和内质网甘露糖苷酶基因中的至少两种基因被破坏或敲除。

【技术特征摘要】
1.一种用于生产以高甘露糖型糖链为主要N-糖链结构的糖蛋白的动物细胞株，其特征在于，所述细胞株的高尔基体甘露糖苷酶基因和内质网甘露糖苷酶基因中的至少两种基因被破坏或敲除。2.根据权利要求1所述的动物细胞株，其中，所述高甘露糖型糖链为选自Glc1-Man9-GlcNAc2、Man9-GlcNAc2、Man8-GlcNAc2、Man7-GlcNAc2、Man6-GlcNAc2和Man5-GlcNAc2中的至少一种。3.根据权利要求1所述的动物细胞株，其中，所述细胞株来自选自人胚肾细胞(HEK293)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、COS、3T3、myeloma、BHK、HeLa、Vero中的哺乳动物细胞、或者选自爪蟾卵子细胞或昆虫细胞Sf9、Sf21、Tn5中的两栖类动物细胞。4.根据权利要求3所述的动物细胞株，其中，所述细胞株来自人胚肾细胞(HEK293)或中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。5.根据权利要求1所述的动物细胞株，其中，所述破坏是通过以高尔基体甘露糖苷酶和/或内质网甘露糖苷酶基因为靶的基因破坏方法实现的，所述敲除是通过以高尔基体甘露糖苷酶和/或内质网甘露糖苷酶基因为靶的基因敲除方法实现的。6.根据权利要求5所述的动物细胞株，其中，所述内质网甘露糖苷酶是下述蛋白：(a)由序列号43所示的DNA序列编码的蛋白(b)与由序列号43所示的DNA序列编码的蛋白的氨基酸序列具有20％以上的同源性且具有内质网甘露糖苷酶活性的蛋白。7.根据权利要求5所述的动物细胞株，其中，所述高尔基甘露糖糖苷酶I是下述蛋白：(a)由序列号44所示的DNA序列编码的蛋白，(b)与由序列号44所示的DNA序列编码的蛋白的氨基酸序列具有20％以上的同源性且具有高尔基甘露糖糖苷酶I活性的蛋白，(c)由序列号45所示的DNA序列编码的蛋白，(d)与由序列号45所示的DNA序列编码的蛋白的氨基酸序列具有20％以上的同源性且具有高尔基甘露糖糖苷酶I活性的蛋白，(e)由序列号46所示的...

【专利技术属性】
技术研发人员：藤田盛久，金则成，喜多岛敏彦，张慧杰，高晓冬，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32