一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物，生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，测试稀释液，三碘甲状腺原氨酸校准品，三碘甲状腺原氨酸质控品。本发明专利技术的试剂盒与现有试剂盒相比，制备工艺更简单，成本更低，检测范围宽，稳定性好。

【技术实现步骤摘要】
一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于免疫检测分析
，涉及检测血清中游离三碘甲状腺原氨酸FT3含量的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。
技术介绍
3，5，3’三碘甲腺原氨酸（Triiodothyronine，T3）是一种对各种靶器官起作用的重要甲状腺激素，分子量为651，血浆中半衰期为1.5天，血浆中大部分T3是由T4在外周组织中经脱碘作用代谢而来，其余的由甲状腺分泌释放，其活性为T4的3-8倍。T3是已知目前生物活性最强的甲状腺激素，在外周血中，99.6%T3通过与血清/血浆中的运载蛋白结合而被转运，只有0.4%的T3（FT3）是游离存在的，只有游离的T3具有代谢活性，而结合的则没有。体内主要的运载蛋白包括：甲状腺素结合球蛋白（TBG），甲状腺素结合前白蛋白和白蛋白。FT3可以通过细胞膜与受体结合发挥生理效应，因此它是甲状腺激素发生生理效应的的真正活性部分，而且体内FT3的浓度不受甲状腺激素结合蛋白的浓度的影响，能较确切地反映甲状腺的功能状态及其他对人体机能的影响。FT3含量对鉴别诊断甲状腺功能是否正常，亢进或低下有重要意义，对甲亢的诊断很敏感，是诊断T3型甲亢的特异性指标。临床上，TSH，FT3和FT4三项联检，常用以确认甲亢或甲低，以及追踪疗效。用于体内游离三碘甲状腺原氨酸测定的主要方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等。目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I125标记三碘甲状腺原氨酸半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了RIA水平，特别是标记物的稳定性和不污染环境是RIA法无法比拟的。目前各大中型医院均进口了全自动化学发光免疫分析系统，但是仪器和试剂价格昂贵。目前已有多件磁微粒化学发光方法检测三碘甲状腺原氨酸的专利申请，使用的是异鲁米诺发光标记物标记三碘甲状腺原氨酸抗体，检测灵敏度较低，稳定性较差。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是提供游离三碘甲状腺原氨酸的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，稳定性差，成本高的缺陷。本专利技术公开了一种制备工艺简单、成本低廉、稳定性好的游离三碘甲状腺原氨酸的化学发光免疫定量检测试剂盒以及制备方法。一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物，生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，测试稀释液，游离三碘甲状腺原氨酸校准品，游离三碘甲状腺原氨酸质控品。进一步地，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的四氧化三铁颗粒悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述磁微粒悬浮液的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL；磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物为碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形成的溶液，其中三碘甲状腺原氨酸衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质；所述酶标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体为生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物，稀释于生物素标记物缓冲液中所形成的溶液；其中三碘甲状腺原氨酸抗体为小鼠单克隆抗体，所述生物素标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0。所述游离三碘甲状腺原氨酸校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，所述游离三碘甲状腺原氨酸校准品的工作浓度分别为0，2.50，5.00，10.00，20.00，40.00pg/mL。所述游离三碘甲状腺原氨酸质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，所述游离三碘甲状腺原氨酸质控品的工作浓度分别为5.00，20.00pg/mL。进一步地，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的四氧化三铁颗粒，粒径为1um～1.5um，悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/mL；所述磁微粒包被物缓冲液为100mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH为7.0。进一步地，所述碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物为碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形的稀释液，所述三碘甲状腺原氨酸衍生物为碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物与酶标记物缓冲液的稀释比例为1:400～1:2000，优选的稀释比例为1:800；所述酶标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4。进一步地，所述生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体为生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物稀释于生物素标记物缓冲液中所形的稀释液，所述三碘甲状腺原氨酸抗体为生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物与生物素标记物缓冲液的稀释比例为1:200～1:1000，优选的稀释比例为1:500；生物素标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为8.0；其中三碘甲状腺原氨酸抗体为小鼠单克隆抗体。进一步地，所述游离三碘甲状腺原氨酸校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将三碘甲状腺原氨酸纯品稀释至工作浓度，分别为0，2.50，5.00，10.00，20.00，40.00pg/mL；所述校准品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4；所述游离三碘甲状腺原氨酸质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，将三碘甲状腺原氨酸纯品稀释至工作浓度，分别为5.00，20.00pg/mL；质控品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH值范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH值为7.4。进一步地，所述三碘甲状腺原氨酸衍生物是采用以下工艺步骤制备的：S1.三碘甲状腺原氨酸-丁二酸酯的制备：取三碘甲状腺原氨酸加入到蒸馏水中，加入硫酸铜，在100℃水浴中回流反应5小时，冷却至室温后，过滤除去固体杂质，然后将滤液冰浴降温到结晶析出，用乙醇重结晶，得到白色片状结晶三碘甲状腺原氨酸-丁二酸酯；S2.N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与三碘甲状腺原氨酸合成物的制备：取上述三碘甲状腺原氨酸-丁二酸酯溶解于柠檬酸溶液中，加入N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，避光条件下2～8℃反应8h，过色谱柱收集N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与三碘甲状腺原氨酸合成物的洗脱液，浓缩后，用无水乙醇重结晶，得到白色针状结晶N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与三碘甲状腺原氨酸合成物，即三碘甲状腺原氨酸衍生物。一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：它包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物，生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，测试稀释液，游离三碘甲状腺原氨酸校准品，游离三碘甲状腺原氨酸质控品。

【技术特征摘要】
1.一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：它包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物，生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，测试稀释液，游离三碘甲状腺原氨酸校准品，游离三碘甲状腺原氨酸质控品。2.根据权利要求1所述的一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的四氧化三铁颗粒悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述磁微粒悬浮液的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL；磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物为碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形成的溶液，其中三碘甲状腺原氨酸衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质；所述酶标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体为生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物，稀释于生物素标记物缓冲液中所形成的溶液；其中三碘甲状腺原氨酸抗体为小鼠单克隆抗体，所述生物素标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述游离三碘甲状腺原氨酸校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，所述游离三碘甲状腺原氨酸校准品的工作浓度分别为0，2.50，5.00，10.00，20.00，40.00pg/mL；所述游离三碘甲状腺原氨酸质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，所述游离三碘甲状腺原氨酸质控品的工作浓度分别为5.00，20.00pg/mL。3.根据权利要求2所述的一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的四氧化三铁颗粒，粒径为1um～1.5um，悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/mL；所述磁微粒包被物缓冲液为100mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH为7.0。4.根据权利要求2所述的一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物为碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形的稀释液，所述三碘甲状腺原氨酸衍生物为碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物与酶标记物缓冲液的稀释比例为1:400～1:2000，优选的稀释比例为1:800；所述酶标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4。5.根据权利要求2所述的一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体为生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物稀释于生物素标记物缓冲液中所形的稀释液，所述三碘甲状腺原氨酸抗体为生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物与生物素标记物缓冲液的稀释比例为1:200～1:1000，优选的稀释比例为1:500；生物素标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为8.0；其中三碘甲状腺原氨酸抗体为小鼠单克隆抗体。6.根据权利要求2所述的一种游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述游离三碘甲状腺原氨酸校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将三碘甲状腺原氨酸纯品稀释至工作浓度，分别为0，2.50，5.00，10.00，20.00，40.00pg/mL；所述校准品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4；所述游离三碘甲状腺原氨酸质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，将三碘甲状腺原氨酸纯品稀释至工作浓度，分别为5.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明勇，姜雪莲，张玲，胡洁，黄伟，
申请(专利权)人：湖南远璟生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43