【技术实现步骤摘要】
一种雌二醇酶结合物的制备方法
本专利技术涉及一种应用于化学发光免疫分析技术中的雌二醇酶结合物的制备方法。技术背景雌二醇（E2）是育龄妇女体内卵巢或者黄体分泌的雌激素，由卵巢或前列腺分泌后，经血流和组织液转运到靶组织（子宫、输卵管、阴道、垂体等），能与血浆蛋白高度结合，在雌激素反应组织内能与特异性受体蛋白结合形成有活性的复合物，维持第二性征和调控副性器官的功能。雌二醇（E2）在血液中的浓度主要受下丘脑-垂体-性腺轴调节控制，呈周期性波动规律。雌二醇浓度过高或过低都会导致生殖及内分泌系统紊乱，从而引发多种疾病，例如幼女性早熟、月经紊乱、不孕不育、异位妊娠等，因此准确地测定血液中雌二醇浓度对于疾病的诊断和治疗具有十分重要的临床意义。用于体内雌二醇测定的主要方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等。目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I125标记雌二醇半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了RIA水平，特别是标记物的稳定...
【技术保护点】
1.一种雌二醇酶结合物的制备方法，其特征在于：所述雌二醇酶结合物是由雌二醇衍生物（E2‑NHS）与酶发生偶联反应生成，该反应不需要额外添加活化剂和偶联剂。
【技术特征摘要】
1.一种雌二醇酶结合物的制备方法，其特征在于：所述雌二醇酶结合物是由雌二醇衍生物（E2-NHS）与酶发生偶联反应生成，该反应不需要额外添加活化剂和偶联剂。2.根据权利要求1所述的一种雌二醇酶结合物的制备方法，其特征在于：所述雌二醇衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和雌二醇的化学合成物质，化学结构式为：。3.根据权利要求1所述的一种雌二醇酶结合物的制备方法，其特征在于：所述雌二醇衍生物为或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和雌二醇的化学合成物质，化学结构式为：。4.根据权利要求1或2所述的一种雌二醇酶结合物的制备方法，其特征在于，所述雌二醇衍生物的合成方法如下：S1、雌二醇二醋酸酯的制备：取雌二醇加入到无水吡啶、乙酸酐中，在油浴中回流2小时，冷却至室温后，冰浴降温2小时有结晶析出，用乙醇重结晶，得到白色片状结晶的雌二醇二醋酸酯；S2、雌二醇二醋酸酯-6-酮的制备：取步骤S1得到的雌二醇二醋酸酯于冰醋酸中，加入CrO3，于37℃水浴反应4小时，加入蒸馏水，用乙醚萃取，醚相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤至红色出现后，用蒸馏水洗涤至中性，加入硫酸镁干燥，得到黄色油状物，用乙酸乙酯：正已烷（1:4）溶解黄色油状物后,过色谱柱收集雌二醇二醋酸酯-6-酮的洗脱液，浓缩后，用无水乙醇重结晶，得到白色针状结晶的雌二醇二醋酸酯-6-酮；S3、6-酮-雌二醇的制备：取雌二醇二醋酸酯-6-酮溶解于氢氧化钠-甲醇溶液中，室温静置，加入蒸馏水，用稀盐酸调节PH至3.0左右,用无水乙醇重结晶得6-酮-雌二醇；S4、雌二醇-6-肟的制备：取6-酮-雌二醇溶解于甲醇溶液中，加入羧甲基羟胺半盐酸盐和醋酸钠溶液，37℃水浴反应8小时，冰浴降温4小时，析出针状结晶过滤，滤液用氢氧化钠溶液调整PH至8.5左右，用乙酸乙酯萃取；剩余滤液盐酸溶液调整PH至3.0左右用乙酸乙酯萃取；合并乙酸乙酯并减压蒸干，用丙酮-正已烷重结晶，得到雌二醇-6-肟；S5、N...
【专利技术属性】
技术研发人员：李明勇，姜雪莲，张玲，胡洁，黄伟，
申请(专利权)人：湖南远璟生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43
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