一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物，生物素标记的孕酮抗体，测试稀释液，孕酮校准品，孕酮质控品。本发明专利技术的试剂盒与现有试剂盒相比，制备工艺更简单，成本更低，检测范围宽，稳定性好。

【技术实现步骤摘要】
一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于免疫检测分析
，涉及检测血清中孕酮P含量的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。
技术介绍
孕酮（P）孕酮是类固醇生物合成过程中生成的第一个具有生物活性的化合物，它由肾上腺皮质、男性睾丸，女性卵巢和胎盘生成，主要代谢产物为孕二醇-3-葡糖苷酸。LH作用于黄体调节孕酮的合成和分泌。随着LH在月经周期中期达到高峰，黄体开始发育，孕酮的水平也随之增长。如果怀孕，孕酮水平则随着其主要来源胎盘的发育而持续增长，并贯穿整个妊娠期。血液循环中的孕酮结合蛋白主要有类固醇结合蛋白、白蛋白、性激素结合蛋白，其中主要与白蛋白和类固醇结合蛋白结合，具有生物活性的游离型孕酮仅占总孕酮的2.5~3%。临床上检测孕酮主要用于确认排卵、评价黄体功能缺失，检验诱导排卵过程的有效性等。目前认为，结合孕酮的检测是除了子宫内膜活检以外可以正确评价黄体功能的一种方法，甚至可以替代子宫内膜活检。正常妊娠和异位妊娠时孕酮水平都会升高。血清孕酮的测定也可用于替代疗法的疗效监测和妊娠早期自发性流产危险性的评估。用于体内孕酮测定的主要方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等。目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I125标记孕酮半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了RIA水平，特别是标记物的稳定性和不污染环境是RIA法无法比拟的。目前各大中型医院均进口了全自动化学发光免疫分析系统，但是仪器和试剂价格昂贵。目前已有多件磁微粒化学发光方法检测孕酮的专利申请，如申请号（201110257759）的专利申请是化学发光板的方法，板间差异较大；申请号（201511019364）的专利申请使用的是异鲁米诺发光标记物标记孕酮抗体，检测灵敏度较低，稳定性较差。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是提供孕酮的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，稳定性差，成本高的缺陷。本专利技术公开了一种制备工艺简单、成本低廉、稳定性好的孕酮的化学发光免疫定量检测试剂盒以及制备方法。本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物，生物素标记的孕酮抗体，测试稀释液，孕酮校准品，孕酮质控品。优选地，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL；所述磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物为碱性磷酸酶和孕酮衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形成，其中孕酮衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和孕酮的化学合成物质，或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和孕酮的化学合成物质；所述生物素标记的孕酮抗体为生物素和孕酮抗体的偶联物稀释于生物素标记物缓冲液中所形成，其中孕酮抗体为小鼠单克隆抗体；所述测试稀释液为含有解离剂的缓冲液，其中解离剂为DANAZOL，所述缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述孕酮校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，所述孕酮校准品的工作浓度分别为0,1.0,5.0,10.0,25.0,50.0ng/mL；所述校准品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述孕酮质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，所述孕酮质控品的工作浓度，分别为1.0，25.0ng/mL；所述质控品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0。优选地，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/mL；所述磁微粒包被物缓冲液为100mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH为7.0。优选地，所述碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物为碱性磷酸酶和孕酮衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形成，其中孕酮衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和孕酮的化学合成物质，或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和孕酮的化学合成物质；所述碱性磷酸酶和孕酮衍生物的偶联物与酶标记物缓冲液的稀释比例为1:400～1:2000，优选的稀释比例为1:1000；所述酶标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4。优选地，所述生物素标记的孕酮抗体为生物素和孕酮抗体的偶联物稀释于生物素标记物缓冲液中所形成，其中孕酮抗体为小鼠单克隆抗体；所述生物素和孕酮抗体的偶联物与生物素标记物缓冲液的稀释比例为1:200～1:1000，优选的稀释比例为1:500；生物素标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为8.0。优选地，所述测试稀释液为含有解离剂的缓冲液，其中解离剂为DANAZOL，浓度范围为0.01%～1%，优选的浓度为0.1%；所述缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4；所述孕酮校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将孕酮纯品稀释至工作浓度，分别为0,1.0,5.0,10.0,25.0,50.0ng/mL；所述校准品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4；所述孕酮质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，将孕酮纯品稀释至工作浓度，分别为1.0，25.0ng/mL；所述质控品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4。优选地，所述孕酮衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和孕酮的化学合成物质，化学结构式如下：或者所述孕酮衍生物为N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和孕酮的化学合成物质,化学结构式如下：优选地，所述孕酮衍生物是采用以下工艺制备的：S1.孕酮琥珀酸酯的制备：取11-a-羟基孕酮加入到二氯甲烷、琥珀酸酐中，加入4-二甲氨基吡啶，在油浴中回流5小时，冷却至室温后，冰浴降温到结晶析出，用乙醇重结晶，得到白色片状结晶孕酮琥珀酸酯。S2.N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与孕酮合成物的制备：取孕酮琥珀酸酯溶解于柠檬酸溶液（PH4.0）中，加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，避光条件下2～8℃反应8h，过色谱柱收集N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与孕酮合成物的洗脱液，浓缩后，用无水乙醇重结晶，得到白色针状结晶N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与孕酮合成物，即孕酮衍生物。一种孕酮磁本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：它包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物，生物素标记的孕酮抗体，测试稀释液，孕酮校准品，孕酮质控品。

【技术特征摘要】
1.一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：它包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物，生物素标记的孕酮抗体，测试稀释液，孕酮校准品，孕酮质控品。2.根据权利要求1所述的一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL；所述磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物为碱性磷酸酶和孕酮衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形成，其中孕酮衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和孕酮的化学合成物质，或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和孕酮的化学合成物质；所述生物素标记的孕酮抗体为生物素和孕酮抗体的偶联物稀释于生物素标记物缓冲液中所形成，其中孕酮抗体为小鼠单克隆抗体；所述测试稀释液为含有解离剂的缓冲液，其中解离剂为DANAZOL，所述缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述孕酮校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，所述孕酮校准品的工作浓度分别为0,1.0,5.0,10.0,25.0,50.0ng/mL；所述校准品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述孕酮质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，所述孕酮质控品的工作浓度，分别为1.0，25.0ng/mL；所述质控品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0。3.根据权利要求2所述的一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/mL；所述磁微粒包被物缓冲液为100mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH为7.0。4.根据权利要求2所述的一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物为碱性磷酸酶和孕酮衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形成，其中孕酮衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和孕酮的化学合成物质，或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和孕酮的化学合成物质；所述碱性磷酸酶和孕酮衍生物的偶联物与酶标记物缓冲液的稀释比例为1:400～1:2000，优选的稀释比例为1:1000；所述酶标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4。5.根据权利要求2所述的一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述生物素标记的孕酮抗体为生物素和孕酮抗体的偶联物稀释于生物素标记物缓冲液中所形成，其中孕酮抗体为小鼠单克隆抗体；所述生物素和孕酮抗体的偶联物与生物素标记物缓冲液的稀释比例为1:200～1:1000，优选的稀释比例为1:500；生物素标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为8.0。6.根据权利要求2所述的一种孕酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述测试稀释液为含有解离剂的缓冲液，其中解离剂为DANAZOL，浓度范围为0.01%～1%，优选的浓度为0.1%；所述缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4；所述孕酮校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将孕酮纯品稀释至工作浓度，分别为0,1.0,5.0,10.0,25.0,50.0ng/mL；所述校准品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4；所述孕酮质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，将孕酮纯品稀释至工作浓度，分别为1.0，25.0ng/mL；所述质控品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明勇，姜雪莲，黄金浪，张玲，胡洁，黄伟，
申请(专利权)人：湖南远璟生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43