The invention provides a gene regulation or editing system utilizing RNA interference mechanism. The gene regulation or editing system comprises the following parts: 1. CRISPR Cas9 gene regulation or editing module; 2. precursor single-stranded guided RNA (pre sgRNA), which contains a sequence completely complementary to the target microRNA or siRNA. And synthesize the sequence of RNA (sgRNA). The gene regulation or editing system can be used to regulate and edit target genes in cells containing target microRNAs or siRNAs.
【技术实现步骤摘要】
一种利用RNA干扰机制的基因调控或编辑系统
本专利技术涉及分子生物学领域,具体而言涉及一种利用RNA干扰机制的基因调控或编辑系统。
技术介绍
RNA干扰机制RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指由单链或双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)诱发的同源mRNA高效特异性降解的现象。RNAi具有如下特征:1)RNAi是转录后水平的基因沉默机制;2)RNAi具有很高的特异性,只降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA;3)RNAi抑制基因表达具有很高的效率,表型可以达到缺失突变体表型的程度,而且相对很少量的dsRNA分子(数量远远少于内源mRNA的数量)就能完全抑制相应基因的表达,是以催化放大的方式进行的;4)RNAi抑制基因表达的效应可以穿过细胞界限,在不同细胞间长距离传递和维持信号甚至传播至整个有机体以及可遗传等特点;5)dsRNA不得短于21个碱基,并且长链dsRNA也在细胞内被Dicer酶切割为21bp左右的siRNA,并由siRNA来介导mRNA切割。而且大于30bp的dsRNA不能在哺乳动物中诱导特异的RNA干扰,而是细胞非特异性和全面的基因表达受抑和凋亡;6)ATP依赖性:在去除ATP的样品中RNA干扰现象降低或消失显示RNA干扰是一个ATP依赖的过程。可能是Dicer和RISC的酶切反应必须由ATP提供能量。小干扰RNA(SiRNA)病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时,常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅即产生反应,其胞质中的核酸内 ...
【技术保护点】
1.一种利用RNA干扰机制的基因调控或编辑系统,所述基因调控或编辑系统包括以下几个部分:(1)CRISPR‑Cas9基因调控或编辑组件;(2)前体单链引导RNA(pre‑sgRNA),所述前体合成引导RNA含有与目标miRNA或siRNA完全互补的序列以及合成引导RNA(sgRNA)的序列;所述基因调控或编辑系统可用于对含有目标miRNA或siRNA的细胞内的目标基因进行控制。
【技术特征摘要】
1.一种利用RNA干扰机制的基因调控或编辑系统,所述基因调控或编辑系统包括以下几个部分:(1)CRISPR-Cas9基因调控或编辑组件;(2)前体单链引导RNA(pre-sgRNA),所述前体合成引导RNA含有与目标miRNA或siRNA完全互补的序列以及合成引导RNA(sgRNA)的序列;所述基因调控或编辑系统可用于对含有目标miRNA或siRNA的细胞内的目标基因进行控制。2.根据权利要求1所述的利用RNA干扰机制的基因调控或编辑系统,所述目标基因为内源基因或外源基因。3.根据权利要求1所述的利用RNA干扰机制的基因调控或编辑系统,其中所述CRISPR-Cas9基因调控或编辑组件为与转录激活因子相连接的核酸酶缺陷型CRISPR-Cas9蛋白。4.根据权利要求1所述的利用RNA干扰机制的基因调控或编辑系统,其中所述合成引导RNA(sgRNA)含有与目标基因的启动子的一段序列互补的序列,或者其中所述合成引导RNA(sgRNA)含有与目标基因的转录起始位点的一段序列互补的序列。5.根据权利要求1或4任一项所述的利用RNA干扰机制的基因调控或编辑系统,其中所述CRISPR-Cas9基因调控或编辑组件为具有激活或抑制基因表达的功能的核酸酶缺陷型Cas9蛋白。6.根据权利要求1所述的利用RNA干扰机制的基因调控或编辑系统,其中所述CRISPR-Cas9基因调控或编辑组件为具有核酸酶切割活性的CRI...
【专利技术属性】
技术研发人员:汪阳明,王茜雯,胡鲁峰,廖乐祺,邱雅姿,石铭,
申请(专利权)人:北京大学,
类型:发明
国别省市:北京,11
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