一种高血脂或动脉粥样硬化兔模型的构建方法及sgRNA技术

本发明专利技术公开了一种高血脂或动脉粥样硬化兔模型的构建方法及sgRNA。构建方法包括：以兔LDLR基因第2外显子或/和第7外显子为靶向，删除LDLR基因部分序列，使得兔子呈现高血脂和动脉粥样硬化的表型。设计的sgRNA引导序列如SEQ ID NO.1～4所示，本发明专利技术对兔特定基因的特定位点进行编辑，可成功获得自发性的高血脂和动脉粥样硬化兔，提供了高血脂和动脉粥样硬化兔模型的建立方法，可用于降血脂功效研究，如类似药物的筛选与评价，和对AS病因病机的探讨、治疗对策的探索和防治药物的研发。

Construction method and sgRNA of a hyperlipidemic or atherosclerotic rabbit model

The invention discloses a method for constructing a hyperlipidemic or atherosclerotic rabbit model and a sgRNA. The construction methods include: taking rabbit LDLR gene exon 2 or/and exon 7 as target, deleting part of LDLR gene sequence, making rabbits present hyperlipidemia and atherosclerosis phenotype. The designed sgRNA guiding sequence, as shown in SEQ ID NO.1-4, edits specific loci of specific genes in rabbits, and successfully obtains spontaneous hyperlipidemia and atherosclerosis rabbits. It provides a method for establishing models of hyperlipidemia and atherosclerosis rabbits, and can be used for the study of hypolipidemic efficacy, such as the screening of similar drugs. And evaluation, and explore the etiology and pathogenesis of AS, explore the treatment strategy, and research and development of drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种高血脂或动脉粥样硬化兔模型的构建方法及sgRNA
本专利技术属于生命科学和生物
，特别涉及一种基于基因敲除兔子高血脂和动脉粥样硬化模型的构建方法，主要是LDLR突变位点的选择，用于模拟人体高血脂和动脉粥样硬化，同时出现总胆固醇和甘油三酯异常增高的兔模型的建立方法。
技术介绍
脂质代谢紊乱引起高血脂症，主要表现为血浆总胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)升高，现有报道表明，高血脂症与动脉粥样硬化、冠心病、高血压、糖尿病等疾病的发生有关。原发性高血脂症的因素很多，如遗传因素、饮食结构、生活习惯、神经因素等。越来越多的报道显示家族性高血脂与LDLR遗传突变有连锁关系。LDLR主要参与VLDL、IDL和LDL的分解代谢，近年来研究表明低密度脂蛋白受体(LDLR)基因突变导致LDLR缺陷是高胆固醇血症的主要发病原因之一，LDLR基因变异，可导致LDLR数量及生物活性的异常，引起血清TC浓度大幅度升高，在组织过度沉积，最终导致动脉粥样硬化(As)。世界各地陆续发现LDLR基因突变的种类已超过1500多种。动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高血脂或动脉粥样硬化兔模型的构建方法，其特征在于，包括：以兔LDLR基因第2外显子或/和第7外显子为靶向，删除或改变LDLR基因部分DNA序列，使得兔子呈现高血脂或动脉粥样硬化的表型。

【技术特征摘要】
1.一种高血脂或动脉粥样硬化兔模型的构建方法，其特征在于，包括：以兔LDLR基因第2外显子或/和第7外显子为靶向，删除或改变LDLR基因部分DNA序列，使得兔子呈现高血脂或动脉粥样硬化的表型。2.根据权利要求1所述的高血脂或动脉粥样硬化兔模型的构建方法，其特征在于，以兔LDLR基因第2外显子4265-4341bp序列或/和第7外显子7041-7155bp序列为靶向。3.根据权利要求1所述的高血脂或动脉粥样硬化兔模型的构建方法，其特征在于，采用基因编辑的方法删除或改变LDLR部分基因序列，步骤包括：(1)根据靶向位点设计sgRNA，与CRISPR/Cas9质粒载体相连构建CRISPR/Cas9二合一质粒；(2)以构建的CRISPR/Cas9二合一质粒为模板，扩增sgRNA和Cas9mRNA的转录模板，根据转录模板体外转录出sgRNA和Cas9mRNA；(3)将上述质粒转录的sgRNA和Cas9mRNA共同导入受精卵，获得高血脂或动脉粥样硬化兔。4.根据权利要求3所述的高血脂或动脉粥样硬化兔模型的构建方法，其特征在于，步骤(3)导入cas9mRNA和sgRNA混合液，其中cas9mRNA的终浓度分别为40～50ng/μL，sgRNA的终浓度为10～20ng/μL。5.根据权利要求3或4所述的高血脂或动脉粥样硬化兔模型的构建方法，其特征在于，基因编辑时，设计sgRNA的模板序列选自如下任意一条或多条：sgRNA-1模板：5’-CAGGGGACAAGTGTGGCCGGAATGAGTTCCAATGCCGGAAC-3’；sgRNA-2模板：5’-ATGCCGGAACGGGAAGTGTATCTCCTACAAGTGGGTGTGTGAC-3’；sgRNA-3模板：5’-CGGTGCAGCGACCAATGAGTGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：成勇，梁景岩，吴岱津，袁婷婷，张婷，周敏雅，陆睿，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32