利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测麦芽五糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用超高效液相色谱‑质谱联用技术检测麦芽五糖的方法，包括以下步骤：（1）取麦芽五糖适量，加水溶解，配置成一定浓度的供试品溶液。（2）进样，按以下色谱条件和质谱条件进行检测；色谱条件为：色谱柱：Waters Xbridge BEH Amide 2.1x100mm；流动相：乙腈‑水梯度洗脱，0～15min保持87％乙腈，15～20min由87％乙腈逐渐下降至15％乙腈，20～30min保持15％乙腈；质谱条件为：ESI源，选择离子监测（SIM）模式，碎裂电压：130v，鞘气流速：12L/min，毛细管电压：4000v，提取精确质量数[M‑H]

Detection of malt five sugar by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry

The invention discloses a method for detecting maltopentose by ultra high performance liquid chromatography mass spectrometry, which comprises the following steps: (1) taking appropriate amount of maltopentose, adding water to dissolve it, and configuring it into a certain concentration of sample solution. (2) Sampling was carried out under the following chromatographic and mass spectrometric conditions: chromatographic column: Waters Xbridge BEH Amide 2.1x100mm; mobile phase: acetonitrile-water gradient elution, keeping 87% acetonitrile in 0-15 minutes, gradually decreasing from 87% acetonitrile to 15% acetonitrile in 15-20 minutes and 15% acetonitrile in 20-30 minutes; The components are: ESI source, selective ion monitoring (SIM) mode, breaking voltage: 130v, sheath flow rate: 12L/min, capillary voltage: 4000v, extracting accurate mass number [M H]

【技术实现步骤摘要】
利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测麦芽五糖的方法
本专利技术涉及一种利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测麦芽五糖的方法，属于化学分析及检测领域。
技术介绍
麦芽五糖是一种低聚糖，其甜度较低，对肠道内腐败菌有抑制作用，被广泛用于食品、化妆品、医药等领域。蜂蜜为蜜蜂科昆虫中华蜜蜂ApisceranaFabricius或意大利蜂ApismelliferaLinnaeus所酿的蜜。近年来，在天然蜂蜜中掺入各种低廉的果葡糖浆、麦芽糖浆等掺杂蜂蜜的情况十分严重，以富含淀粉的植物，通过水解制取果葡糖浆等水解糖浆，因水解糖浆类会存在水解不完全的寡糖成分，如麦芽五糖及分子量更高的糖类化合物；而天然蜂蜜中不含有五糖及分子量更高以上的寡糖，因此通过研究麦芽五糖的分析检测方法，可以为蜂蜜的防伪检验提供新的思路。麦芽五糖，分子式为：C30H52O26，分子量828.7，CAS号为34620-76-3，其结构如图：。目前常用于糖类分析的方法主要有离子交换色谱法（IEC）、凝胶色谱法（GPC）、高效液相色谱法（HPLC）、高效毛细管电泳法（HPCE）；测定糖类的主要的检测器是紫外检测器、红外检测器、电化学检测器、示差折光检测器和蒸发光散射检测器。由于糖类物质沸点高、难挥发、不易气化等特点，必须经过一次或两次的衍生反应进行检测，这样对实际分析带来误差和不便。吴红京等人通过高效液相色谱-示差折光检测器对麦芽低聚糖的组分进行定性及定量，该方法虽过程简单，但需要用时间窗法和标样加样品重叠法对样品中的六种糖进行定性，且麦芽五糖呈现双峰，线性拟合度差，检测限太高，灵敏度低，给定性和定量带来干扰。因此有必要探索出快速定性且准确定量的检测方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于，提供一种操作时间短、灵敏度高、重复性好、线性拟合度高的麦芽五糖含量检测方法，同时为糖类化合物分析检测提供新的思路。为解决上述技术问题，本专利技术提供的利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测麦芽五糖的方法，可以通过下列步骤来实现：（1）取麦芽五糖适量，加水溶解，配置成一定浓度的供试品溶液；（2）进样，按以下色谱条件和质谱条件进行检测；色谱条件为：色谱柱：WatersXbridgeBEHAmide2.1x100mm；流动相：乙腈-水梯度洗脱，0～15min保持87％乙腈，15～20min由87％乙腈逐渐下降至15％乙腈，20～30min保持15％乙腈；流动相中的百分比为体积百分比；质谱条件为：ESI源，选择离子监测（SIM）模式，碎裂电压（Fragmentor）：130v，鞘气流速（Sheathgasflow）：12L/min，毛细管电压（Caplliary）：4000v，提取精确质量数[M-H]-827.4，运用浓度与峰面积的常用对数进行线性定量。具体的色谱条件中，流速为0.2~0.8mL/min；柱温为37~42℃；进样量为0.1~1μL；优选的色谱条件为：流速为0.4mL/min；柱温为40℃；进样量为0.5μL。在步骤（1）中，麦芽五糖线性溶液浓度范围为：1.775-28.4μg/mL。在步骤（1）中，麦芽五糖重复性溶液浓度为：7.1μg/mL。在步骤（1）中，麦芽五糖检出限溶液浓度为：0.355μg/mL。在步骤（2）中，色谱条件中色谱柱为WatersXbridgeBEHAmide2.1x100mm，PartNo.:186006091。在步骤（2）中，质谱条件中碎裂电压分别设置为：40，50，60，70，80，90，100，110，120，130，140，提取精确质量数[M-H]-827.4丰度值进行比较，当碎裂电压为130v时，丰度值最高。在步骤（2）中，以麦芽五糖标准工作溶液浓度的常用对数为横坐标，以提取的[M-H]-827.4的峰面积常用对数为纵坐标，绘制标准曲线进行定量。本专利技术提供的检测麦芽五糖的方法具有下列优点：（1）定性精准（2）灵敏度高（3）精密度高（4）线性拟合度高（5）操作简便，适合于麦芽五糖的分析检测。由于麦芽五糖具有α、β两种同分异构，在色谱分析中很容易呈现异常峰双峰或拖尾峰，给定性和定量带来干扰。在本专利技术的液-质联用检测条件下，麦芽五糖呈现单峰，峰形好，数据处理更加准确。麦芽五糖分析检测的难点在于其紫外显色弱、沸点高、难挥发、不易气化，紫外检测和气相检测等手段难以检出，示差折光检测的精确度低。本专利技术采用液-质联用检测方法，灵敏度高、重现性好。麦芽五糖分子结构中含有五个重复单元，质谱检测时重复单元之间的C-O键易断裂产生大量碎片离子峰，造成分子离子峰丰度低，对实际分析带来误差和不便。本专利技术通过采用质谱选择离子监测(SIM)模式，避免产生大量碎片离子，麦芽五糖分子离子峰的丰度高，以[M-H]-形式检出。本专利技术的方法采用浓度的对数与峰面积对数拟合的幂函数方程进行定量，线性关系好（R2=0.9997），使定量检测的准确度更高，解决了用质谱检测器检测糖类化合物时常规的浓度与峰面积拟合的线性方程的线性差的问题。附图说明图1为本专利技术方法实施例1的线性方程标准曲线。图2为本专利技术方法实施例1的幂函数方程标准曲线。图3为本专利技术方法实施例2的重复性质谱图。图4为本专利技术方法实施例3的检出限质谱图。图5为本专利技术方法实施例4的不同碎裂电压曲线图。图6为本专利技术方法实施例4的碎裂电压130v对应的质谱图。图7为实施例5的流动相筛选的检测结果图。图8为实施例6的麦芽五糖与单糖、二糖分离效果的检测结果图。图9为实施例6的麦芽五糖与蔗果三糖分离效果的检测结果图。图10A-10B为实施例7不同柱温下麦芽五糖检测结果图。图10C为实施例7不同柱温下麦芽五糖离子丰度值曲线图。具体实施方式下面将对本专利技术的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1：色谱条件：Agilent1290；色谱柱：WatersXbridgeBEHAmide(2.1x100mm)，PartNo.：186006091；流动相：乙腈-水梯度洗脱，0～15min87％乙腈，15～20min87％乙腈-15％乙腈，20～30min15％乙腈；流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量：0.5μL。质谱条件：Agilent6460；ESI源，SIM模式，碎裂电压：130v，鞘气流速：12L/min，毛细管电压：4000v，提取精确质量数827.4（[M-H]-），运用浓度与峰面积的常用对数进行线性定量。供试品溶液的制备：取麦芽五糖2.84mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加入水溶解并定容，摇匀，精密移取1mL，置10mL容量瓶中，加入水溶解并定容，摇匀，制备成麦芽五糖母液，浓度为：28.4μg/mL；依次逐级稀释2倍，配置麦芽五糖线性溶液浓度分别为：28.4μg/mL、14.2μg/mL、7.1μg/mL、3.55μg/mL、1.775μg/mL。测定法：精密吸取供试品溶液0.5μL，注入超高效液相色谱-质谱联用仪测定，以标准工作溶液浓度为横坐标，以[M-H]-峰面积为纵坐标，分别以线性方程和幂函数方程绘制标准曲线。结果：线性方程为y本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用超高效液相色谱‑质谱联用技术检测麦芽五糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取麦芽五糖适量，加水溶解，配置成一定浓度的供试品溶液；（2）进样，按以下色谱条件和质谱条件进行检测；色谱条件为：色谱柱：Waters Xbridge BEH Amide 2.1x100mm；流动相：乙腈‑水梯度洗脱，0～15min保持87％乙腈，15～20min由87％乙腈逐渐下降至15％乙腈，20～30min保持15％乙腈；柱温为37~42℃；质谱条件为：ESI源，SIM模式， 碎裂电压：130v，鞘气流速：12L/min，毛细管电压：4000v，提取精确质量数[M‑H]‑ 827.4，运用浓度与峰面积的常用对数进行线性定量。

【技术特征摘要】
1.一种利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测麦芽五糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取麦芽五糖适量，加水溶解，配置成一定浓度的供试品溶液；（2）进样，按以下色谱条件和质谱条件进行检测；色谱条件为：色谱柱：WatersXbridgeBEHAmide2.1x100mm；流动相：乙腈-水梯度洗脱，0～15min保持87％乙腈，15～20min由87％乙腈逐渐下降至15％乙腈，20～30min保持15％乙腈；柱温为37~42℃；质谱条件为：ESI源，SIM模式，碎裂电压：130v，鞘气流速：12L/min，毛细管电压：4000v，提取精确质量数[M-H]-827.4，运用浓度与峰面积的常用对数进行线性定量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件中，流速为0.2~0.8mL/min；进样量为0.1~1μL。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述色谱条件中，流速为0.4mL/min；进样量为0.5μL。4.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈君子，许纪锋，张磊，谢良山，钱勇，谢天培，
申请(专利权)人：上海佰年诗丹德检测技术有限公司，上海诗丹德标准技术服务有限公司，上海诗丹德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31