一种重组表达制备EV71衣壳蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种重组表达制备EV71衣壳蛋白的方法，在EV71的VP1蛋白第62‑63个氨基酸之间插入His‑FLAG双亲和标签，再通过杆状病毒表达系统、Sf9细胞在无血清培养基中表达重组蛋白EV71，并利用亲和柱层析纯化得到重组蛋白EV71衣壳蛋白VP1。本发明专利技术方法通过His FF的纯化一步就得到了可溶性的EV71蛋白，免除了之前传统繁复的CsCl2密度梯度离心的纯化方法，且得率比之前提到了3倍，为之后EV71亚单位疫苗的研制打下了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种重组表达制备EV71衣壳蛋白的方法
本专利技术涉及一种重组表达制备EV71衣壳蛋白的方法。
技术介绍
肠道病毒71型手足口病是由肠道病毒71型(简称EV71)感染所引起的一种急性传染病。好发于儿童，尤以3岁以下年龄组发病率最高，多数患者病情经过良好，少数重症患儿可发生无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿等并发症，极少数病情危重，可致死亡。存活者可留有后遗症，严重危害儿童身体健康和生命安全，被喻为21世纪的“脊髓灰质炎”。对其预防和治疗是当前医学界的热点之一。昆虫杆状病毒表达系统(insectbaculovirusexpressionvectorsystem，IBEVS)基于昆虫杆状病毒及其宿主细胞建立起来的表达体系，是将外源基因整合到杆状病毒基因组上形成重组杆状病毒，在昆虫细胞或虫体中可表达外源蛋白的一种真核表达系统。是继大肠杆菌、酵母和哺乳动物细胞表达系统之后建立起来的，现已成为基因工程四大表达系统之一。利用该系统获得的重组蛋白可用于药物开发、疫苗生产、生物杀虫剂等多个领域。但由于表达出来的EV71蛋白通过传统的CsCl2密度梯度离心的纯化方法过程比较复杂，并且得率较低。专利本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组表达制备EV71衣壳蛋白的方法，其特征在于，在EV71的VP1蛋白第62‑63个氨基酸之间插入His‑FLAG双亲和标签，再通过杆状病毒表达系统、Sf9细胞在无血清培养基中表达重组蛋白EV71，并利用亲和柱层析纯化得到重组蛋白EV71衣壳蛋白VP1。

【技术特征摘要】
1.一种重组表达制备EV71衣壳蛋白的方法，其特征在于，在EV71的VP1蛋白第62-63个氨基酸之间插入His-FLAG双亲和标签，再通过杆状病毒表达系统、Sf9细胞在无血清培养基中表达重组蛋白EV71，并利用亲和柱层析纯化得到重组蛋白EV71衣壳蛋白VP1。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将表达重组蛋白的基因，与pFastBac1载体连接，将所得重组杆状病毒穿梭载体与Bacmid质粒发生定点转座，收集重组成功的Bacmid质粒；将重组Bacmid质粒转染Sf9昆虫细胞，在25-27℃培养72h-96h；...

【专利技术属性】
技术研发人员：张征田，杜瑞卿，夏敏，
申请(专利权)人：南阳师范学院，
类型：发明
国别省市：河南,41