识别人c-Met蛋白的人源单链抗体、诊断试剂及其CAR-T细胞制剂制造技术

本发明专利技术涉及单链抗体的核苷酸序列和氨基酸序列，其可特异识别人c‑Met蛋白。基于该单链抗体，可获得特异性地识别c‑Met阳性的肿瘤细胞的融合蛋白。体外实验证明此融合蛋白可介导补体依赖的细胞毒作用和抗体依赖的细胞毒作用；当注入到荷瘤小鼠体内，可杀伤肿瘤细胞;基于此单链抗体，构建了识别c‑met的嵌合抗原受体(CAR)，并制备和扩增了CAR‑T细胞。该c‑Met CAR‑T细胞可特异识别c‑Met表达阳性的人源肿瘤细胞并体外有效杀伤；当此c‑Met CAR‑T细胞注入到荷瘤小鼠体内，表现出特异识别c‑Met的，对肿瘤细胞生长抑制的治疗效果。

Human scFv, diagnostic reagents and CAR-T cell preparations for identifying human c-Met protein

The present invention relates to nucleotide sequence and amino acid sequence of single chain antibody, which can specifically recognize human c_Met protein. Based on the scFv, fusion protein of C Met positive tumor cells can be specifically identified. In vitro experiments showed that the fusion protein could mediate complement-dependent cytotoxicity and antibody-dependent cytotoxicity; when injected into tumor-bearing mice, it could kill tumor cells; based on this single-chain antibody, a chimeric antigen receptor (CAR) recognizing c_met was constructed, and CAR_T cells were prepared and amplified. The c_Met CAR_T cells could specifically recognize human tumor cells with positive expression of c_Met and kill them effectively in vitro. When c_Met CAR_T cells were injected into tumor-bearing mice, the cells showed specific recognition of c_Met and showed therapeutic effect on tumor cell growth inhibition.

【技术实现步骤摘要】
识别人c-Met蛋白的人源单链抗体、诊断试剂及其CAR-T细胞制剂
本专利技术涉及生物技术
，尤其涉及识别人c-Met蛋白的人源单链抗体、诊断试剂以及其CAR-T细胞制剂。
技术介绍
癌症是威胁人类健康的常见疾病。目前临床上普遍应用的癌症治疗方法包括外科手术及放疗/化疗等。由于这些方法不能精准地区分肿瘤和周围的正常组织。因此，不可避免地对机体造成损失和破坏，引起严重的副反应，特别是一些处于发展晚期及发生转移的肿瘤。人类社会迫切需要更加有效，安全，及特异针对肿瘤组织的治疗手段及方法。受体酪氨酸激酶c-Met及其唯一的已知配体HGF(hepatocytegrowthfactor)在细胞的增殖、存活、侵袭、组织发育及器官再生等过程中扮演重要作用。HGF同c-Met可以形成一个紧密复合体，并启动信号转导过程。活性复合体的形成，会导致受体的多聚化、内吞、胞内激酶结构域中多个酪氨酸残基的磷酸化，从而激活多条信号级联通路，并与肿瘤的发展、侵袭及转移密切相关。尽管HGF/c-met信号通路存在着严格的调控，但在多种类型的恶性肿瘤中均检测到了该信号通路的异常调节。C-MET的异常激活可通本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人源单链抗体，其特征在于，所述人源单链抗体用于特异性识别人c‑Met蛋白，包括重链可变区以及轻链可变区；所述重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID 1；所述轻链可变区的核苷酸序列为SEQ ID 2。

【技术特征摘要】
1.一种人源单链抗体，其特征在于，所述人源单链抗体用于特异性识别人c-Met蛋白，包括重链可变区以及轻链可变区；所述重链可变区的核苷酸序列为SEQID1；所述轻链可变区的核苷酸序列为SEQID2。2.一种人源单链抗体，其特征在于，所述人源单链抗体用于特异性识别人c-Met蛋白，包括重链可变区以及轻链可变区；所述重链可变区的氨基酸序列为SEQID3；所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQID4。3.一种DNA序列，其特征在于，所述DNA序列用于编码人源单链抗体和人IgGFc的融合蛋白；所述人源单链抗体包括如权利要求1或2所述的人源单链抗体；所述DNA序列为SEQID5，所述DNA序列编码的氨基酸序列为SEQID6。4.一种DNA序列，其特征在于，所述DNA序列用于编码人源单链抗体和鼠IgG2aFc的融合蛋白；所述人源单链抗体包括如权利要求1或2所述的人源单链抗体；所述DNA序列为SEQID7，所述DNA序列编码的氨基酸序列为SEQID8。5.一种DNA序列，其特征在于，所述DNA序列用于编码人源单链抗体和兔IgGFc的融合蛋白；所述人源单链抗体包括如权利要求1或2所述的人源单链抗体；所述DNA序列为SEQID9，所述DNA序列编码的氨基酸序列为SEQID10。6.一种诊断...

【专利技术属性】
技术研发人员：李永海，储年生，李正红，
申请(专利权)人：李永海，
类型：发明
国别省市：美国,US