基于gp5.5蛋白质的大肠杆菌总tRNA纯化方法技术

本发明专利技术公开一种基于gp5.5蛋白质的大肠杆菌总tRNA纯化方法，所述gp5.5蛋白质来自T7噬菌体基因5.5编码的小蛋白质或来自与所述T7噬菌体gp5.5蛋白质序列同源性高于30％并含有如序列表SEQ ID NO.1所示特征氨基酸序列，且总氨基酸序列数目在90～110之间的其他噬菌体编码的同源蛋白质；序列表SEQ ID NO.4为携带组氨酸标签及连接肽段的T7噬菌体gp5.5蛋白质氨基酸序列，所述蛋白质保守性较高，与其他噬菌体表达的同源蛋白质序列相似性较高。本发明专利技术通过高通量测序首次确证gp5.5蛋白质能结合大肠杆菌细胞内所有种类tRNA，且特异性极高。依赖gp5.5蛋白质分离纯化大肠杆菌总tRNA方法，利用了天然生物大分子相互作用特性，本发明专利技术方法快捷方便，无需传统繁琐纯化步骤，得到tRNA纯度显著提高，优势明显。

Purification method of Escherichia coli total tRNA based on gp5.5 protein

The invention discloses a method for purifying total tRNA of E. coli based on gp5.5 protein. The gp5.5 protein comes from a small protein encoded by T7 phage gene 5.5 or from a protein sequence homologous to the T7 phage gp5.5 protein sequence with a homology of more than 30% and contains a characteristic amino acid sequence as shown in the sequence table SEQ ID NO.1, and the total amino acid sequence. Other phage-encoded homologous proteins ranging in number from 90 to 110; SEQ ID NO.4 is a T7 phage gp5.5 protein amino acid sequence with histidine tags and linked peptides, which is highly conserved and highly similar to the homologous proteins expressed by other phages. The invention first confirms that the gp5.5 protein can bind to all kinds of tRNA in E. coli cells by high-throughput sequencing, and the specificity is very high. The method relies on gp5.5 protein to isolate and purify total tRNA of Escherichia coli, and utilizes the interaction characteristics of natural biological macromolecule. The method of the invention is fast and convenient, and does not need complicated traditional purification steps. The purity of tRNA is improved significantly, and the advantages are obvious.

【技术实现步骤摘要】
基于gp5.5蛋白质的大肠杆菌总tRNA纯化方法
本专利技术属于微生物核酸代谢相关蛋白质研究领域，具体涉及一种基于gp5.5蛋白质的大肠杆菌总tRNA纯化方法。
技术介绍
tRNA(转运核糖核酸)是所有生物遗传信息传递和表达最重要的一类核酸分子。tRNA作为连接遗传信息和对应氨基酸之间的“接头分子”，是蛋白质合成中的关键生物大分子之一，一般由76-90个核苷酸组成类似三叶草结构(Plesciaetal.，1965；Sharpetal.，1985)。同时tRNA在生物体内也扮演着多种多样的调控角色，一种tRNA只能携带一种氨基酸，如丙氨酸tRNA只携带丙氨酸，但一种氨基酸可由不止一种tRNA携带。同一生物中，携带同一种氨基酸的不同tRNA称作“同功受体tRNA”。组成蛋白质的氨基酸有20种，而tRNA可以有六七十种或更多。携带同一种氨基酸的细胞器tRNA与细胞质tRNA也不一样。生物体发生突变后，校正机制之一是通过校正基因合成一类校正tRNA，以维持翻译作用译码的相对正确性。在蛋白质翻译过程中，tRNA主要是携带氨基酸进入核糖体，在mRNA指导下合成蛋白质(Cricketal.，196本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种gp5.5蛋白质在分离纯化大肠杆菌总tRNA中的应用，其特征在于，所述gp5.5蛋白质来自T7噬菌体基因5.5编码的小蛋白质；或来自与所述T7噬菌体的gp5.5蛋白质序列同源性高于30％的并含有如序列表SEQ ID NO.1所示的特征氨基酸序列，且总氨基酸序列数目在90～110之间的其他噬菌体表达的gp5.5蛋白质，其中，序列表SEQ ID NO.1中每个“Xaa”独立代表任意氨基酸。

【技术特征摘要】
1.一种gp5.5蛋白质在分离纯化大肠杆菌总tRNA中的应用，其特征在于，所述gp5.5蛋白质来自T7噬菌体基因5.5编码的小蛋白质；或来自与所述T7噬菌体的gp5.5蛋白质序列同源性高于30％的并含有如序列表SEQIDNO.1所示的特征氨基酸序列，且总氨基酸序列数目在90～110之间的其他噬菌体表达的gp5.5蛋白质，其中，序列表SEQIDNO.1中每个“Xaa”独立代表任意氨基酸。2.根据权利要求1所述的一种gp5.5蛋白质在分离纯化大肠杆菌总tRNA中的应用，其特征在于，所述gp5.5蛋白质氨基端均加有蛋白标签，所述蛋白标签与gp5.5蛋白质之间由0～10个氨基酸组成保持柔性的肽段连接。3.根据权利要求2所述的一种gp5.5蛋白质在分离纯化大肠杆菌总tRNA中的应用，其特征在于，所述蛋白标签为FLAG标签、HA标签、SBP标签、Avi标签、Nus标签、V5标签、MBP标签中的一种。4.根据权利要求2所述的一种gp5.5蛋白质在分离纯化大肠杆菌总tRNA中的应用，其特征在于，所述gp5.5蛋白质为T7噬菌体基因组中核酸代谢区域基因表达的蛋白质，所述蛋白标签为组氨酸标签，所述组氨酸标签的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；所述组氨酸标签与所述gp5.5蛋白质之间的连接肽段由10个氨基酸组成，所述连接肽段的氨基酸序列如序列表SEQIDNO.3所示，携带序列表SEQIDNO.2所示组氨酸标签及序列表SEQIDNO.3所示连接肽段的gp5.5蛋白质的氨基酸序列如序列表SEQIDNO.4所示。5.基于gp5.5蛋白质的大肠杆菌总tRNA纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.在大肠杆菌中过表达权利要求1中所述的gp5.5蛋白质并通过镍柱纯化获得gp5.5蛋白质的洗脱液，所述纯化获得的gp5.5蛋白质结合有tRNA；S2.纯化gp5.5蛋白质结合的tRNA。6.根据权利要求5所述的基于gp5.5蛋白质的大肠杆菌总tRNA纯化方法，其特征在于，所述步骤S1的具体流程...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱斌，夏恒，黄锋涛，吴慧，陆雪玲，闫艳，余兵兵，
申请(专利权)人：华中科技大学，深圳华中科技大学研究院，
类型：发明
国别省市：湖北,42