一种磁珠法提取DNA的试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术公开了一种磁珠提取DNA提取试剂盒，以及快速简介的提取多糖真菌DNA的方法。所述试剂盒包含溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、溶液Ⅳ、洗涤液、洗脱液和磁珠悬浮液。本申请创新性的使用溶液Ⅱ对产菌核真菌的多糖物质进行剔除，使得在DNA提取过程中避免胞外多糖的干扰。试验过程中还创新性的对试剂盒所使用的磁珠进行了预处理，以DNA作为分子靶标，减少磁珠对RNA和蛋白质的吸附能力，该操作具有较高特异性的突出特点。该试剂盒适用于多糖类真菌的DNA提取，检测简单便捷，降低了胞外多糖对DNA提取的干扰。

A kit for extracting DNA from magnetic beads and its extraction method

The invention discloses a magnetic bead DNA extraction kit and a quick and brief method for extracting polysaccharide fungal DNA. The kit comprises solution I, solution II, solution III, solution IV, detergent, eluent and magnetic bead suspension. The application innovatively uses solution II to remove polysaccharides from Sclerotinia producing fungi so as to avoid the interference of extracellular polysaccharides during DNA extraction. During the experiment, the magnetic beads used in the kit were pretreated innovatively. DNA was used as a molecular target to reduce the ability of magnetic beads to adsorb RNA and protein. The operation has a high specificity. The kit is suitable for extracting DNA from polysaccharide fungi. The detection is simple and convenient, and the interference of exopolysaccharide on DNA extraction is reduced.

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法提取DNA的试剂盒及提取方法
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种磁珠法产菌核真菌DNA提取试剂盒，以及特异性强快速提取产菌核真菌DNA的方法。
技术介绍
菌核是由菌丝紧密连接交织而成的休眠体，其功能主要是抵御不良环境。常见的产菌核真菌有菌核属和丝核菌属真菌，该类真菌含有大量的胞外多糖。而真菌胞外多糖具有高吸附高粘稠特点，是困扰产菌核真菌分离提取高纯度DNA的难点之一。分子生物学手段目前已是真菌鉴定必不可少的技术之一，而DNA的分离纯化是进行分子生物学研究的基础。目前传统的CTAB法是提取的真菌DNA较常见的方法，其主要原理为CTAB是一种阳离子去污剂，可与蛋白质形成络合物，沉淀蛋白质物质，达到分离纯化核酸的目的，再经过酚、氯仿等物质的纯化离心、洗涤、洗脱等步骤后实现对DNA的提取工作。但是针对多糖含量较高的产菌核真菌的DNA提取无法达到理想的效果。并且好使较长，使用溶剂对人体伤害较大。后来，柱式法真菌DNA提取试剂盒的发展大大提高了DNA提取的便利性。其主要原理为利用包埋有纯化填料的纯化柱对DNA分子的吸附作用，在提取过程中将DNA有效吸附在过滤膜中，再经离心、洗涤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种磁珠法产菌核真菌DNA提取试剂盒，其特征在于包括：溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、溶液Ⅳ、洗涤液、洗脱液和磁珠悬浮液；所述磁珠悬浮液：磁珠材质为纳米磁性氧化铁，直径为1.2‑2mm；所述溶液Ⅰ由葡萄糖，Tris‑HCl和EDTA组成，pH值为8.0；所述溶液Ⅱ为无水乙醇和醋酸钾溶液；所述溶液Ⅲ为SDS溶液(氢氧化钠溶液稀释)；所述溶液Ⅳ包含盐酸胍和醋酸钾，pH值为3.5～4.5；所述洗涤液为乙醇溶液；所述洗脱液为去离子水；其中，所述的磁珠悬浮液经过如下处理步骤处理：磁珠在双甘膦溶液进行浸泡5‑10小时后用PBS缓冲液(pH＝7.0)冲洗5‑8次，将取出的磁珠再浸入异硫氰酸胍溶液5‑6小时，PB...

【技术特征摘要】
1.一种磁珠法产菌核真菌DNA提取试剂盒，其特征在于包括：溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、溶液Ⅳ、洗涤液、洗脱液和磁珠悬浮液；所述磁珠悬浮液：磁珠材质为纳米磁性氧化铁，直径为1.2-2mm；所述溶液Ⅰ由葡萄糖，Tris-HCl和EDTA组成，pH值为8.0；所述溶液Ⅱ为无水乙醇和醋酸钾溶液；所述溶液Ⅲ为SDS溶液(氢氧化钠溶液稀释)；所述溶液Ⅳ包含盐酸胍和醋酸钾，pH值为3.5～4.5；所述洗涤液为乙醇溶液；所述洗脱液为去离子水；其中，所述的磁珠悬浮液经过如下处理步骤处理：磁珠在双甘膦溶液进行浸泡5-10小时后用PBS缓冲液(pH＝7.0)冲洗5-8次，将取出的磁珠再浸入异硫氰酸胍溶液5-6小时，PBS缓冲液冲洗5-8次后备用。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述的所双甘膦溶液的浓度为5mol/L，异硫氰酸胍溶液的浓度为8mol/L。3.一种磁珠法产菌核真菌DNA提取的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤一：在无菌条件下将培养好的真菌的菌核夹取至1.5ml离心管中，菌核质量不小于300mg，用液氮进行冷冻研磨；加入250μL溶液Ⅰ，再加入50μLRNaseA，充分混匀；步骤二：加入50μL蛋白酶K，充分混匀后60℃恒温水浴20min。12000rpm离心5min，取上清至新管中；步骤三：加入150μL溶液Ⅱ，轻轻上下翻动5-6次；12000rpm离心5min，取上清至新管中；步骤四：加入350μL溶液Ⅲ，轻轻上下翻动，使菌液充分裂解成透明的溶液。12000rpm离心5min，取上清至新管中；步骤五：加入350μL溶液Ⅳ，轻轻上下翻动，直至有白色絮状物形成，室温静置2min；步骤六：加入50μL磁珠悬浮液，轻轻上下翻动后静置2min；步骤七：将离心管放置于磁力架上，静置1min使溶液变透明，弃溶液；其中，所述的磁珠悬浮液经过如下处理步骤处理：磁珠在双甘膦溶液进行浸泡5-10小时后用PBS缓冲液(pH＝7.0)冲洗5-8次，将取出的磁珠再浸入异硫氰酸胍溶液5-6小时，PBS缓冲液冲洗5-8次后备用；所述溶液Ⅰ中葡萄糖浓度为50mmol/L，Tris-HCl浓度为25mmol/L，EDTA浓度为10mmol/L；所述溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄宵，戴明雁，徐华莉，高颖，张明洲，
申请(专利权)人：浙江迪恩生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33