一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法技术

本申请公开一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法，包括：步骤一：缓冲液及试剂进行处理，步骤二：向血浆管中加入20UL Proteinase K和30UL Magpure Particles G，震荡混匀；加入500UL Buffer MLF，涡旋混匀；将血浆管转移到预热至37℃的恒温混匀仪中，转速调至1000rpm；置磁力架上3min，澄清后弃液，取下离心管；加入500UL Buffer MW I，振荡混匀，瞬时离心，置磁力架3分钟，吸附完全后吸出管内液体；步骤三：加入500UL Buffer MW II，振荡混匀，瞬时离心，置磁力架，吸附完全后吸出管内液体；步骤四：加入预热至37.0℃的Buffer AE，重悬磁珠，静至；步骤五：高速微离，置磁力架上，澄清后吸取DNA溶液到对应编号的1.5mL新管中，得到提取的DNA溶液；DNA提取合格率更高、保存和质控更合理明晰。

【技术实现步骤摘要】
一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法
本专利技术属于无创产前筛查检测领域，具体是指一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法。
技术介绍
生命体遗传信息的快速获得对于生命科学的研究有着十分重要的意义。第一代测序仪对电泳分离技术的依赖，使其难以进一步提高分析的速度和并行化程度，也难以通过微型化降低测序成本。经过不断的技术开发和改进，21世纪初，以Roche454技术、illumina公司的GenomeAnalyzer技术和ABI公司的Solid技术为标记的第二代测序技术诞生了。第二代技术大大降低了测序成本，还大幅度提高了测序速度并保持了高准确性。其中，illumina公司的第一台测序仪于2006年问世，之后开发出来一系列的测序仪，如Hiseq2000、Hiseq2500、Miseq、HiseqX等，在准确性、通量、成本和速度方面表现更优秀，而使其成为全球使用量最大的第二代测序仪。在第二代测序平台不断完善的同时，以对单分子DNA进行非PCR测序为主要特征的第三代测序技术也初显端倪。但由于其关键技术问题尚待解决，目前还未得到广泛应用。唐氏综合征，又称21-三体综合征或者先天愚型，是由新生儿染色体异常所引起的先天性疾病。唐氏综合征的发病概率大约在1/800～1/600，在小儿三体型染色体疾病中占的比重最高，约为70％～80％，而且该病的发病率会随着产妇生育年龄的增高而上升。产前诊断筛查对于筛查唐氏综合症是很重要而且很有实用性的一部分，大家所熟知的产前诊断筛查方法主要是传统的一些筛查方法，如羊膜腔穿刺抽取羊水、绒毛膜取样以及穿刺抽取脐带血等方法。这些方法带有一定的创伤性，对孕妇和胎儿也会造成一定的危险，严重者甚至可能会带来流产的风险。而且，穿刺抽取羊水要在孕妇孕周达到16周以后才能进行，因为孕周16周后胎儿才能达到一定的成熟度，易于检测。如果此时诊断结果显示胎儿染色体异常，则已经错过了最佳的流产时期，可能需要通过引产来解决，这大大增加了孕妇的痛苦且增加了并发症发生的可能。上世纪九十年代，有研究报道了孕妇的血液循环中有胎儿游离DNA(cff-DNA)的存在，后来有研究也报道发现孕妇血浆中存在胎儿核糖核酸(RNA)，这些重大的临床研究发现为无创性产前筛查胎儿染色体异常提供了新的可能性。近年来无创性产前筛查诊断取得了巨大的突破和进展，胎儿游离细胞已经成功地应用于非侵入性产前诊断胎儿性别和Rh血型鉴定，这些重大的研究和成果都是建立在对母体血浆中cff-DNA序列测定的基础上实现的。但是在孕妇血浆中，母源性游离DNA含量占整个游离DNA的绝大部分，cff-DNA只占孕妇血浆中游离DNA总量的3％～5％，所以传统的DNA提取技术及PCR等方法难以对胎儿唐氏综合征进行准确的判断。因此，高效、准确的检测判断胎儿染色体是否为非整倍体就显得极为重要，同时也成为了无创产前筛查技术的关键。按照目前现有的DNA的提取方法，提取过程不标准，保存和质控不合格、容易导致样本失效等问题，影响后续的检测和后续环节的成功率。因此，如何研发一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法，能够解决上述问题，便成为亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本申请解决的主要问题是提供一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法，操作简单、流程科学，标准明确，实践操作效果好，DNA提取合格率更高、保存和质控更合理明晰。以解决一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法成本高、流程不科学，标准不明确，实践操作效果不佳、操作难度高、难以复制操作、DNA提取过程不标准，保存和质控不合格底等问题，影响后续的检测和后续环节的成功率的技术问题。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法，其技术方案如下：一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法，其特征在于，包括：步骤一：对血浆游离DNA提取试剂盒中的缓冲液及试剂进行处理，根据实验样本数，准备相应数量的1.5mL离心管，并写上相应的样本编号；按照DNA提取记录表中的血浆编号，将所需血浆400uL从-80℃冰箱取出，室温溶解；步骤二：向血浆管即1.5ml离心管中加入20ULProteinaseK和30ULMagpureParticlesG，震荡混匀5秒；加入500ULBufferMLF，涡旋混匀15秒；将血浆管转移到预热至37℃的恒温混匀仪中，转速调至1000rpm；置磁力架上3min，澄清后弃液，取下离心管；加入500ULBufferMWI，振荡混匀，瞬时离心，置磁力架3分钟，吸附完全后吸出管内液体；步骤三：加入500ULBufferMWII，振荡混匀，瞬时离心，置磁力架，吸附完全后吸出管内液体；瞬时离心，置磁力架上收集管壁上的液滴，吸去残留的液体；打开离心管管盖，37℃晾干磁珠；步骤四：加入43uL预热至37.0℃的BufferAE，重悬磁珠，静至5分钟；期间轻轻晃荡两次使DNA充分洗脱，操作时不要让液体弹到管壁上；步骤五：高速微离，置磁力架上3分钟，澄清后吸取39.5ULDNA溶液到对应编号的1.5mL新管中，得到提取的DNA溶液。进一步的，所述步骤一中对血浆游离DNA提取试剂盒中的缓冲液及试剂进行处理包括：在BufferMWI中加入56mL无水乙醇，上下颠倒混匀；在BufferMWII加入200mL无水乙醇，上下颠倒混匀；在ProteinaseK干粉中加入3MLProteinaseDissolveBuffer，颠倒混匀10-15次，充分溶解，并用2.0mLEP管分装，-20.0C保存。进一步的，所述步骤三包括两次下述过程：加入500ULBufferMWII，振荡混匀，瞬时离心，置磁力架，吸附完全后吸出管内液体。进一步的，所述步骤五包括将所述提取的DNA溶液于-20.0℃下保存。本申请提供的胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法操作简单便利并且灵活，流程科学，标准明确，实践操作效果好。为后续操作提供了合格的样本，高效严谨。DNA提取合格率更高、保存和质控更合理明晰。具体实施方式如在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可理解，硬件制造商可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名称的差异来作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异来作为区分的准则。说明书后续描述为实施本申请的较佳实施方式，然所述描述乃以说明本申请的一般原则为目的，并非用以限定本申请的范围。本申请的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。实施例一：一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法，其特征在于，包括：步骤一：对血浆游离DNA提取试剂盒中的缓冲液及试剂进行处理，根据实验样本数，准备相应数量的1.5mL离心管，并写上相应的样本编号；按照DNA提取记录表中的血浆编号，将所需血浆400uL从-80℃冰箱取出，室温溶解；步骤二：向血浆管即1.5ml离心管中加入20ULProteinaseK和30ULMagpureParticlesG，震荡混匀5秒；加入500ULBufferMLF，涡旋混匀15秒；将血浆管转移到预热至37℃的恒温混匀仪中，转速调至1000rpm；置磁力架上3min，澄清后弃液，取下离心管；加入500ULBufferMWI，振荡混匀，瞬时离心，置磁本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法，其特征在于，包括：步骤一：对血浆游离DNA提取试剂盒中的缓冲液及试剂进行处理，根据实验样本数，准备相应数量的1.5mL离心管，并写上相应的样本编号；按照DNA提取记录表中的血浆编号，将所需400uL血浆从‑80℃冰箱取出，室温溶解；步骤二：向血浆管中加入20UL Proteinase K和30UL Magpure Particles G，震荡混匀；加入500UL Buffer MLF，涡旋混匀；将血浆管转移到预热至37℃的恒温混匀仪中，转速调至1000rpm；置磁力架上3min，澄清后弃液，取下离心管；加入500UL Buffer MW I，振荡混匀，瞬时离心，置磁力架3分钟，吸附完全后吸出管内液体；步骤三：加入500UL Buffer MW II，振荡混匀，瞬时离心，置磁力架，吸附完全后吸出管内液体；瞬时离心，置磁力架上收集管壁上的液滴，吸去残留的液体；打开离心管管盖，晾干磁珠；步骤四：加入预热至37.0℃的Buffer AE，重悬磁珠，静至；期间轻轻晃荡两次使DNA充分洗脱，操作时不要让液体弹到管壁上；步骤五：高速微离，置磁力架上，澄清后吸取DNA溶液到对应编号的1.5mL新管中，得到提取的DNA溶液。...

【技术特征摘要】
1.一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的提取方法，其特征在于，包括：步骤一：对血浆游离DNA提取试剂盒中的缓冲液及试剂进行处理，根据实验样本数，准备相应数量的1.5mL离心管，并写上相应的样本编号；按照DNA提取记录表中的血浆编号，将所需400uL血浆从-80℃冰箱取出，室温溶解；步骤二：向血浆管中加入20ULProteinaseK和30ULMagpureParticlesG，震荡混匀；加入500ULBufferMLF，涡旋混匀；将血浆管转移到预热至37℃的恒温混匀仪中，转速调至1000rpm；置磁力架上3min，澄清后弃液，取下离心管；加入500ULBufferMWI，振荡混匀，瞬时离心，置磁力架3分钟，吸附完全后吸出管内液体；步骤三：加入500ULBufferMWII，振荡混匀，瞬时离心，置磁力架，吸附完全后吸出管内液体；瞬时离心，置磁力架上收集管壁上的液滴，吸去残留的液体；打开离心管管盖，晾干磁珠；步骤四：加入预热至37.0℃的BufferAE，重悬磁珠，静至；期间轻轻晃荡两次使DN...

【专利技术属性】
技术研发人员：余艳，李慧源，
申请(专利权)人：长沙金域医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43