The present invention provides a method for preparing guanylate cyclase C agonist, in particular a peptide containing a GCC agonist sequence selected from SEQ ID NOs:1_249 described herein.
【技术实现步骤摘要】
制备鸟苷酸环化酶C激动剂的方法本申请是申请日为2012年3月1日的中国专利申请201280021221.6“制备鸟苷酸环化酶C激动剂的方法”的分案申请。相关申请本申请要求2011年3月1日提交的美国临时申请号61/447,891(其内容整体通过引用并入)的权益和优先权。
本专利技术涉及制备可用于治疗和预防各种疾病和病症的鸟苷酸环化酶C肽激动剂的方法。
技术介绍
鸟苷酸环化酶C是鸟苷酸环化酶的跨膜形式，其表达在各种细胞包括胃肠道上皮细胞上(综述于Vaandrager2002Mol.Cell.Biochem.230:73-83)。其最初作为由肠道细菌分泌且引起腹泻的热稳定毒素(ST)肽的肠道受体而被发现。ST肽与从肠粘膜和尿液中分离的两种肽鸟苷肽和尿鸟苷素(uroguanylin)共有相似的氨基酸一级结构。在肠道中，鸟苷肽和尿鸟苷素充当体液和电解质平衡的调节剂。响应于高口服盐摄入，这些肽释放进入肠腔，在肠腔中它们结合至定位于肠细胞(小肠和结肠的单层柱状上皮细胞)的管腔膜上的鸟苷酸环化酶C。鸟苷肽与鸟苷酸环化酶C的结合经由环单磷酸鸟苷(cGMP)的增加引发的复杂细胞内信...
【技术保护点】
1.制备包含GCC激动剂序列的肽的方法，所述GCC激动剂序列选自SEQ ID NOs:1‑44和99‑107，其中所述GCC激动剂序列是n个氨基酸单元长度，N‑末端单元在位置1且C‑末端单元在位置n，所述方法包括：提供第一片段，所述第一片段具有所述GCC激动剂序列的从位置j到位置k的氨基酸单元的第一序列，其中j是1和n‑1之间的整数，k是2和n之间的整数且大于j，且所述第一片段除了位置j的氨基酸单元的氨基或者位置k的氨基酸单元的羧基之外受保护，提供第二片段，所述第二片段具有所述GCC激动剂序列的从位置h到位置j‑1的氨基酸单元的第二序列或具有所述GCC激动剂序列的从位置k+...
【技术特征摘要】
2011.03.01 US 61/4478911.制备包含GCC激动剂序列的肽的方法，所述GCC激动剂序列选自SEQIDNOs:1-44和99-107，其中所述GCC激动剂序列是n个氨基酸单元长度，N-末端单元在位置1且C-末端单元在位置n，所述方法包括：提供第一片段，所述第一片段具有所述GCC激动剂序列的从位置j到位置k的氨基酸单元的第一序列，其中j是1和n-1之间的整数，k是2和n之间的整数且大于j，且所述第一片段除了位置j的氨基酸单元的氨基或者位置k的氨基酸单元的羧基之外受保护，提供第二片段，所述第二片段具有所述GCC激动剂序列的从位置h到位置j-1的氨基酸单元的第二序列或具有所述GCC激动剂序列的从位置k+1到位置m的氨基酸单元的第三序列，其中h是1和n-2之间的整数且小于j，m是k+2和n之间的整数，且所述第二片段除了位置j-1的氨基酸单元的羧基或者位置k+1的氨基酸单元的氨基之外受保护，其中所述第一片段和第二片段中的至少一种经由固相肽合成提供，且经由溶液相合成将所述第一片段和所述第二片段偶联以得到具有所述GCC激动剂序列的从位置h到位置k的氨基酸单元序列的受保护的肽，或具有所述GCC激动剂序列的从位置j到位置m的氨基酸单元序列的受保护的肽，其中所述肽通过包括以下的方法纯化：将所述肽吸附到聚合吸附柱上，任选地用去离子水冲洗所述肽，用异丙醇水溶液从所述聚合吸附柱将任选冲洗的肽洗脱下来以形成肽溶液，从所述肽溶液去除水和异丙醇以沉淀所述肽，和任选地将醚添加至脱水肽以促进所述肽的沉淀，且其中所述肽具有不小于0.1g/mL的堆积密度。2.权利要求1的方法，其中所述GCC激动剂序列选自SEQIDNOs:1、8和9。3.权利要求1的方法，其中所述GCC激动剂序列选自SEQIDNOs:1和9。4.权利要求3的方法，其中h是7，j是15，且k是16。5.权利要求4的方法，进一步包括将具有所述GCC激动剂序列的从位置7到位置16的氨基酸单元序列的受保护的肽的位置7的氨基酸单元的氨基脱保护，以得到位置-7反应性肽。6.权利要求5的方法，进一步包括提供具有所述GCC激动剂序列的从位置1到位置6的氨基酸单元序列的第三片段，其中所述第三片段除了位置6的氨基酸的羧基之外受保护。7.权利要求6的方法，进一步包括经由溶液相合成将所述第三片段和所述位置-7反应性肽偶联，以得到具有所述GCC激动剂序列的从位置1到位置16的氨基酸单元序列的受保护的线性肽。8.权利要求7的方法，进一步包括将受保护的线性肽脱保护，以得到脱保护的线性肽。9.权利要求8的方法，进一步包括氧化所述脱保护的线性肽，以得到包含选自SEQIDNOs:1和9的GCC激动剂序列的肽。10.权利要求1的方法，其中所述第一片段和第二片段中的每一种不超过10个氨基酸单元长度。11.权利要求10的方法，其中所述第二片段具有所述GCC激动剂序列的位置h到位置j-1的氨基酸单元的第二序列，且所述第二片段的位...
【专利技术属性】
技术研发人员：J拜，R张，J贾，J周，Q赵，G张，K沙伊鲁布海，S科米斯凯，R冯，
申请(专利权)人：辛纳吉制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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