一种抗凝多肽TH16及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种抗凝多肽TH16及其应用，属于生物医学技术领域。本发明专利技术提供了一种抗凝多肽TH16，所述TH16的氨基酸序列为RIGKHSRTRYERNIEK。所述多肽TH16能够抑制血浆复钙时间，具有极显著的抗凝、抑制脑卒中和抑制动脉粥样硬化的药物活性作用。所述多肽TH16具有结构简单、人工合成方便，同时抗凝活性强的特点，能作为制备抗凝、抗脑卒中和抗动脉粥样硬化药物中的应用。

Anticoagulant polypeptide TH16 and its application

The invention relates to an anticoagulant polypeptide TH16 and its application, belonging to the field of biomedicine technology. The present invention provides an anticoagulant polypeptide TH16, the amino acid sequence of TH16 is RIGKHSRTRYERNIEK. The polypeptide TH16 can inhibit the recalcification time of plasma and has remarkable anticoagulant, stroke and atherosclerosis inhibitory effects. The polypeptide TH16 has the advantages of simple structure, convenient synthesis and strong anticoagulant activity, and can be used for preparing anticoagulant, anti-stroke and anti-atherosclerosis drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种抗凝多肽TH16及其应用
本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种抗凝多肽TH16及其应用。
技术介绍
心脑血管疾病是心脏血管和脑血管疾病的统称，泛指由于高脂血症、血液黏稠、动脉粥样硬化、高血压等所导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病。《中国心血管病报告2016》显示心脑血管疾病已是中国居民死亡的首位原因，严重威胁着人类生命健康和生活质量，研究治疗心脑血管疾病的药物具有巨大的社会需求和重要的社会意义。脑卒中是一种突发性的脑血液循环障碍性疾病。最近研究表明，血栓性炎症是引起脑细胞死亡的主要原因之一。多聚磷脂和带负电的表面暴露，接触激活的第十二因子引发了内源性凝血途径级联反应，促使凝血酶生成和纤维蛋白聚集，导致血栓。因此，寻找新型药物以阻断血液凝固级联反应、防止血栓形成是目前脑缺血药物治疗的研究重点。动脉粥样硬化是冠心病、脑梗死、外周血管病的主要原因，现在的研究表明脂质代谢障碍为动脉粥样硬化的病变基础，其特点是受累动脉病变从内膜开始，一般先有脂质和复合糖类积聚、出血及血栓形成，进而纤维组织增生及钙质沉着，并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化，导致动脉壁增厚变硬、血管腔狭窄。最新的研究表明动脉粥样硬化的发病伴随着血浆的高凝状态，血浆高凝倾向在动脉粥样硬化的发病与形成过程中扮演重要角色。因此，寻找新型药物以减弱动脉粥样硬化病人血浆的高凝倾向是发掘动脉粥样硬化药物治疗的重要手段。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种抗凝多肽TH16及其应用，所述多肽对血浆复钙时间有很强的抑制作用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种抗凝多肽TH16，所述TH16的氨基酸序列为RIGKHSRTRYERNIEK(SEQIDNo.1)。本专利技术提供了一种抗凝血试剂，包括所述抗凝多肽TH16和药物辅料。优选的，所述抗凝多肽TH16的浓度为0.2～5mg/ml。本专利技术提供了所述的抗凝多肽TH16在制备抗脑卒中药物中的应用。优选的，所述脑卒中包括缺血性脑卒中或出血性脑卒中。优选的，所述缺血性脑卒中包括血栓性脑梗塞、栓塞性脑梗塞、腔隙性脑梗塞、多发性脑梗塞或短暂性脑缺血发作。优选的，所述药物中抗凝多肽TH16的有效剂量为1mg/kg以上。本专利技术提供了所述的抗凝多肽TH16在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用。优选的，所述动脉粥样硬化包括冠状动脉粥样硬化或动脉血管粥样硬化。优选的，所述药物中抗凝多肽TH16的有效剂量为1mg/kg以上。本专利技术提供的抗凝多肽TH16，所述TH16的氨基酸序列为RIGKHSRTRYERNIEK。所述多肽TH16能够抑制血浆复钙时间，有极显著的抗凝、抑制脑卒中和抑制动脉粥样硬化的作用。所述多肽TH16具有结构简单、人工合成方便，同时抗凝活性强的特点，能作为制备抗凝、抗脑卒中和抗动脉粥样硬化药物应用。附图说明图1为抗凝多肽TH16的抗凝效果图，其中，图1-A表示TH16呈梯度依赖抑制血浆复钙时间；图1-B表示以达到最大吸光度一半所需要的时间对图1-A的统计结果；图1-C表示TH16呈梯度依赖延长尾部出血时间得到抑制凝血结果(n＝8)，**p<0.01；图2为抗凝多肽TH16在FeCl3诱导的小鼠颈动脉血栓模型的作用图，其中，图2-A显示不同浓度的TH16尾静脉给药后对FeCl3诱导的小鼠颈动脉血栓模型的血流监测实验；图2-B显示以血流的灌注单位基准对图2-A进行统计结果(n＝8)，**p<0.01；图3为抗凝多肽TH16在脑缺血模型上的结果图，其中图3-A为不同浓度的TH16尾静脉给药后对小鼠脑缺血模型的影响结果图；图3-B为以脑梗死面积占的百分比为基准对图3-A进行统计结果图(n＝8)；图3-C为对各组小鼠进行Bederson评分结果图；图3-D为对各组小鼠进行肌力测试结果图，**p<0.01；图4为抗凝多肽TH16在动脉粥样硬化模型上的结果图，其中，图4-A为小鼠胸主动脉切片进行油红-O染色的结果图；图4-B为以油红-O染色面积占整个动脉根切片面积百分比为基准对图4-A结果图进行的统计结果图(n＝8)，**p<0.01。具体实施方式本专利技术提供了一种抗凝多肽TH16，所述TH16的氨基酸序列为RIGKHSRTRYERNIEK。所述抗凝多肽TH16的分子量为2043.32道尔顿，等电点为10.93。在本专利技术中，所述抗凝多肽TH16的制备方法优选包括全序列合成方法和序列纯化方法。所述全序列合成方法优选采用自动多肽合成仪合成。本专利技术对采用自动多肽合成仪合成的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的多肽合成方法即可。所述序列纯化方法优选采用高效液相色谱法完成。所述高效液相色谱法的参数如下：平衡液A:含有体积浓度0.1％TFA(三氟乙酸)的水溶液；洗脱液B:含有体积浓度0.1％TFA的乙腈溶液；洗脱梯度为每分钟一个B液洗脱梯度；检测波长为215nm。所述制备方法制备得到的抗凝多肽TH16的纯度为95％以上。得到纯化后的抗凝多肽TH16后，本专利技术优选将所述纯化后的抗凝多肽TH16依次冻干，包装，得到抗凝多肽TH16产品。所述冻干的温度优选为-50℃，所述冻干的程度优选为含水率低于0.1％wt％。所述冻干后，得到的抗凝多肽TH16为白色粉末状。本专利技术对包装的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的多肽包装方法即可。鉴于所述抗凝多肽TH16的抗凝血性能，本专利技术提供了一种抗凝血试剂，包括所述抗凝多肽TH16。在本专利技术中，所述抗凝多肽TH16的浓度优选为0.2～5mg/ml，更优选为1.0～5mg/ml，最优选为1.5mg/ml。所述抗凝血试剂的剂型优选为注射剂。所述注射剂还包括药物辅料。所述药物辅料优选为HEPES缓冲液。所述HEPES缓冲液为包括以下含量组分的水溶液：150mmol/LHepes，20mmolL/LNaCl；所述HEPES缓冲液的pH值为7.4。所述Hepes的全名为4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸。所述HEPES缓冲液中的水优选为注射用水。在本专利技术中，所述抗凝血试剂的制备方法，优选包括以下步骤：将冻干粉抗凝多肽溶解于HEPES缓冲液。所述抗凝血试剂的使用方法为静脉注射，用量为0.1～1ml/kg，使用时间为一周两次。鉴于所述抗凝多肽TH16具有抑制本专利技术提供了所述的抗凝多肽TH16在制备抗脑卒中药物中的应用。在本专利技术中，所述脑卒中优选包括缺血性脑卒中或出血性脑卒中。所述缺血性脑卒中优选包括血栓性脑梗塞、栓塞性脑梗塞、腔隙性脑梗塞、多发性脑梗塞或短暂性脑缺血发作。在本专利技术中，所述抗凝多肽TH16的有效剂量为1mg/kg以上，更优选为1.5～5mg/kg。所述药物的剂型优选为注射剂。所述注射剂还包括药物辅料。所述药物辅料包括NaCl溶液。所述NaCl溶液的质量浓度优选0.9％。本专利技术对所述剂型的制备方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的制备方案即可。在本专利技术中，药物的使用方法为静脉注射，用量为0.2～5mg/kg，使用时间为一周两次。鉴于所述抗凝多肽TH16具有抑制脑卒中的活性作用，本专利技术提供了所述的抗凝多肽TH16在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用。在本专利技术中，所述动脉粥样硬化优选包括冠状动脉粥样硬化或动脉血管本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗凝多肽TH16，其特征在于，所述TH16的氨基酸序列为RIGKHSRTRYERNIEK。

【技术特征摘要】
1.一种抗凝多肽TH16，其特征在于，所述TH16的氨基酸序列为RIGKHSRTRYERNIEK。2.一种抗凝血试剂，其特征在于，包括权利要求1所述抗凝多肽TH16和药物辅料。3.根据权利要求2所述的抗凝血试剂，其特征在于，所述抗凝多肽TH16的浓度为0.2～5mg/ml。4.权利要求1所述的抗凝多肽TH16在制备抗脑卒中药物中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述脑卒中包括缺血性脑卒中或出血性脑卒中。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖仞，张治业，唐小芃，方鸣谦，
申请(专利权)人：中国科学院昆明动物研究所，
类型：发明
国别省市：云南,53