新型抗肿瘤微管稳定剂化合物Ananaside A及其高效提取方法技术

本发明专利技术涉及医药技术领域，具休为一种从梅花参中分离的抗癌化合物Ananaside A(分子式C41H63O17SNa)以及高效提取技术方法。经稻瘟霉模型、微管蛋白聚合体外筛选模型中空纤维初筛，再经多种现代光谱分析，特别是应用先进的二维核磁共振谱和高分辨质谱的综合解析，确定了该化合物的化学结构及立体构型。体外抗肿瘤试验表明，该化合物对A‑549肺癌和IA‑9卵巢癌等8种肿瘤细胞株有明显的抑制作用。本发明专利技术可为研制新的抗肿瘤药物提供先导化合物，对开发利用中国的海洋药用生物资源具有重要价值。

Novel antitumor microtubule stabilizer compound Ananaside A and its efficient extraction method

The invention relates to the technical field of medicine, and is an anticancer compound Ananaside A (molecular formula C41H63O17SNa) separated from Panax plum and a high efficient extraction method. After screening the hollow fibers in the model of Pyricularia oryzae and tubulin polymerization in vitro, the chemical structure and stereo configuration of the compound were determined by various modern spectroscopic analyses, especially by advanced two-dimensional nuclear magnetic resonance spectroscopy and high-resolution mass spectrometry. Anti-tumor test in vitro showed that the compound had obvious inhibitory effect on 8 tumor cell lines, such as A_549 lung cancer and IA_9 ovarian cancer. The invention can provide a leading compound for the development of new antitumor drugs, and has important value for the development and utilization of marine medicinal biological resources in China.

【技术实现步骤摘要】
新型抗肿瘤微管稳定剂化合物AnanasideA及其高效提取方法
本专利技术涉及医药
，是一种从海洋动物梅花参中分离到的新的抗肿瘤化合物AnanasideA，以及天然药物提取技术。
技术介绍
梅花参(ThelenotaananasJ.)，又名“凤梨参”，属海洋棘皮动物门海参纲刺参科。其体形很大，长一般为700mm，宽约100mm，高约80mm，广泛分布于我国西沙群岛和台湾南端。其体内含有丰富的蛋白质、多糖、维生素、皂苷类物质，具有补肝肾，益精，养血的功效。有关其所含的皂苷类成分的化学结构及抗肿瘤活性迄今尚未见有过报道。
技术实现思路
本专利技术是从生长于中国福建海域的梅花参中提取分离一种新的皂苷类化合物，命名为AnanasideA，其化学结构如下：AnanasideA为无色结晶性粉末，溶点185～187℃(MeOH-H2O)，Liebermann-Burchard反应和Molisch反应均呈阳性。电喷雾质谱信号m/z905[M+Na]+和m/z859[M-Na]-。红外光谱：max-3423，强宽峰(羟基)，1764(羰基)，1637(双键)，1257，1072(υs，磺酸基)。1H-和13C核磁共振数据见表1。表1AnanasideA的的1H和13C核磁共振数据Xyl：木糖，Qui：奎诺糖，J值：偶合常数本专利技术还提供了从梅花参提取分离AnanasideA的方法，其步骤如下：(1)提取：将梅花参洗净，切碎，用5倍量(重量)95％乙醇浸泡7天，滤出提取液，再用85％乙醇浸泡提取2次，每次7天，合并3次提取液，减压回收乙醇，得流浸膏。将流浸膏溶于水中，通过大孔树脂柱，依次用水和50％乙醇洗脱。收集50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得总皂苷提取物。(2)分离：将上述总皂苷提取物应用硅胶柱层析，以二氯甲烷∶甲醇∶水为8～5∶1～4∶1混合溶剂洗脱，薄层层析检测，收集含AnanasideA的流份，再经ZorbaxSBC18高效液相柱层析，以甲醇∶水为65∶35为流动相洗脱，得AnanasideA纯品。本专利技术对梅花参皂苷AnanasideA进行了体外抗肿瘤试验，表明其具有明显的抑制肿瘤的效果。试验所用细胞株为国际通用的肿瘤细胞株，即：A-549(肺癌)MCF-7(乳腺癌)IA-9(卵巢癌)CAKI-1(肾癌)PC-3(前列腺癌)KB(鼻咽癌)SK-MEL-2(黑色素瘤)HCT-8(肠癌)试验方法为国际通用的SRB法：根据细胞生长速率，将处于对数生长期的肿瘤细胞以90μl/孔接种于96孔培养板，贴壁生长24小时再加药10μl/孔。每个浓度设三复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO2条件下培养72小时，然后倾去培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1小时后用蒸馏水洗涤5次，空气干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶标仪520nm波长下测定OD值。试验结果见表2。表2AnanasideA对肿瘤细胞的抑制作用IC50：表示本专利技术化合物的半数有效抑制浓度上述实验结果表明，AnanasideA对8种不同的肿瘤细胞株均显示明显的抑制作用。本专利技术为研制新的抗肿瘤药物提供了新的先导化合物，为开发利用中国的海洋药用生物资源具有重要意义。具体实施方式：以下结合实施例进一步描述AnanasideA的分离制备。将梅花参1000克洗净，切碎，分别用5倍量(重量)的95％、85％、85％乙醇依次浸泡，每次浸泡7天，合并乙醇浸出液，减压回收乙醇，得流浸膏。将流浸膏溶于3倍量水中，过滤，滤液通过DA201-B大孔树脂柱，依次用水和50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至干，得总皂苷5.6克。将总皂苷进行硅胶柱层析，以二氯甲烷∶甲醇∶水为7.3∶2.7∶1的溶剂洗脱，收集含AnanasideA的流份。再经ZorbaxSBC18高效液相柱层析，以甲醇∶水为65∶35为流动相洗脱，得AnanasideA纯品0.2克。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抑制肿瘤的化合物，其特征在于化学结构式如下：

【技术特征摘要】
1.一种抑制肿瘤的化合物，其特征在于化学结构式如下：2.权利要求1所述抑制肿瘤的化合物的制备方法，其具体步骤如下：(1)提取：将原料梅花参洗净，切碎，用95％乙醇浸泡7天，滤出提取液，再用85％乙醇浸泡2次，每次7天；合并3次提取液，减压回收乙醇，得流浸膏；将流浸膏溶于水中，通过大孔树脂柱，依次用水和50％乙醇洗脱；收集50％乙醇洗脱液，减...

【专利技术属性】
技术研发人员：巫军，温天文，丁萍月，
申请(专利权)人：巫军，
类型：发明
国别省市：江苏,32