The present invention relates to a method for screening double target synchronous nucleic acid aptamers based on capillary electrophoresis, and belongs to the field of protein nucleic acid separation and analysis technology. By incubating two target molecules with random oligonucleotide libraries, the two target molecules can compete to bind to ssDNA to form their respective complexes during incubation, and perform the high-efficiency separation characteristics of capillary electrophoresis. The two ssDNA target molecular complexes can be separated in one step, eliminating the need of traditional screening methods. Additional negative sieving steps were used to improve the screening efficiency. After capillary electrophoresis detection, the selected aptamers had high affinity and specific binding to the two target molecules.
【技术实现步骤摘要】
一种基于毛细管电泳的双靶同步核酸适配体筛选方法
本专利技术涉及一种基于毛细管电泳的双靶同步核酸适配体筛选方法,具体地说,涉及一种利用毛细管区带电泳技术同步筛选两种靶分子的高亲和力、特异性核酸适配体的方法,属于蛋白质核酸分离分析
技术介绍
单链寡核苷酸(single-strandedDNA,ssDNA)或RNA可通过形成发卡、茎环以及G-四链体等二级/三级结构与蛋白质靶分子的空间结构匹配,形成高亲和性和特异性结合。随机脱氧寡核苷酸文库(RandomssDNAlibrary)是一类含有1013~1015种不同碱基的单链DNA分子(ssDNA)混合物,其中可能含有一种或数种能与靶分子具有高特异性,高亲和性结合的ssDNA,即核酸适配体(Aptamer)。核酸适配体可通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术,从随机寡核苷酸文库中筛选获得,其特性是靶分子分布广、亲和力高、特异性强、易制备及修饰,无免疫原性等。由于在生物,医药以及分子识别和检测方面有重要的应用价值,目前已经发展出多种核酸适配体的筛选方法,如磁珠法分离法、微流控芯片法、膜分离法、亲和色谱法、微粒展示法及毛细管电泳法等。毛细管电泳(CE)具有高效、快速以及实验成本低等优点,是新型的微量分离分析技术,用于核酸适配体筛选中分离靶分子—ssDNA复合物与游离ssDNA。在筛选过程中,未结合靶分子的游离ssDNA与结合了靶分子的核酸复合物因在毛细管电泳中具有不同的迁移速率而彼此分离。CE在蛋白质的核酸适配体筛选中有广泛的应用;CE用于SELEX筛选核酸适配体即为CE-SELEX。CE-SELEX可使核 ...
【技术保护点】
1.一种基于毛细管电泳的双靶同步核酸适配体筛选方法,其特征在于:所述方法步骤如下:(1)将随机寡聚脱氧核苷酸文库溶液与两种靶分子溶液混合后共同孵育,两种靶分子互为反筛靶,竞争结合随机寡聚脱氧核苷酸文库中的ssDNA,形成各自的ssDNA‑靶分子复合物,孵育后得到混合物中含有游离ssDNA和两种ssDNA‑靶分子复合物;(2)将混合物进行毛细管区带电泳,在电泳过程,游离ssDNA与两种ssDNA‑靶分子复合物先后依次通过毛细管末端的检测窗口,可检测和分离得到两种ssDNA‑靶分子复合物的峰,并直接收集两种ssDNA‑靶分子复合物;(3)经高通量测序及验证后得到分别与两种靶分子特异性结合的ssDNA序列,即核酸适配体;步骤(1)中:两种靶分子为蛋白质;步骤(2)中:检测窗口为毛细管电泳‑激光诱导荧光检测;毛细管的出口端为负极,入口端为正极。
【技术特征摘要】
1.一种基于毛细管电泳的双靶同步核酸适配体筛选方法,其特征在于:所述方法步骤如下:(1)将随机寡聚脱氧核苷酸文库溶液与两种靶分子溶液混合后共同孵育,两种靶分子互为反筛靶,竞争结合随机寡聚脱氧核苷酸文库中的ssDNA,形成各自的ssDNA-靶分子复合物,孵育后得到混合物中含有游离ssDNA和两种ssDNA-靶分子复合物;(2)将混合物进行毛细管区带电泳,在电泳过程,游离ssDNA与两种ssDNA-靶分子复合物先后依次通过毛细管末端的检测窗口,可检测和分离得到两种ssDNA-靶分子复合物的峰,并直接收集两种ssDNA-靶分子复合物;(3)经高通量测序及验证后得到分别与两种靶分子特异性结合的ssDNA序列,即核酸适配体;步骤(1)中:两种靶分子为蛋白质;步骤(2)中:检测窗口为毛细管电泳-激光诱导荧光检测;毛细管的出口端为负极,入口端为正极。2.根据权利要求1所述的一种基于毛细管电泳的双靶同步核酸适配体筛选方法,其特征在于:两种靶分子摩尔浓度比为1:1。3.根据权利要求1或2所述的一种基于毛细管电泳的双靶同步核酸适配体筛选方法,其特征在于:所述混合物在毛细管区带电泳时所使...
【专利技术属性】
技术研发人员:屈锋,杨歌,朱超,刘品多,孙淼,陈金,赵新颖,
申请(专利权)人:北京理工大学,
类型:发明
国别省市:北京,11
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