乙肝前S1抗原化学发光检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开一种乙肝前S1抗原化学发光检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括缓冲液、磁微粒、生物素标记的抗乙肝前S1抗原单克隆抗体和多羟基醇；和所述试剂2包括缓冲液、吖啶酯标记的抗乙肝前S1抗原多克隆抗体和多羟基糖。本发明专利技术试剂盒在使用中信号背景低，信号强度显著增加；试剂盒的灵敏度、准确性和重复性显著增加。

Chemiluminescent detection kit for hepatitis B pre S1 antigen

The invention discloses a chemiluminescence detection kit for hepatitis B pre-S1 antigen. The kit comprises a reagent 1 and a reagent 2. The reagent 1 comprises a buffer solution, a magnetic particle, a biotin-labeled monoclonal antibody against hepatitis B pre-S1 antigen and a polyhydroxyl alcohol; and the reagent 2 comprises a buffer solution and an acridine ester-labeled anti-hepatitis B pre-S1 antigen polyol. Clone antibody and polyhydroxycarbohydrate. The kit of the invention has low signal background in use, remarkable increase of signal intensity, and remarkable increase of sensitivity, accuracy and repeatability of the kit.

【技术实现步骤摘要】
乙肝前S1抗原化学发光检测试剂盒
本专利技术涉及体外诊断试剂领域，具体涉及一种乙肝前S1抗原化学发光检测试剂盒。
技术介绍
乙型肝炎是严重危害人类健康的传染性疾病，全球约有20亿人曾感染过乙型肝炎病毒(HBV)，其中3.5亿人为慢性HBV感染。编码HBV蛋白的基因区共有4个：S基因区、C基因区、P基因区和X基因区。其中S基因区由S基因、前S2基因、前S1基因组成，分别编码HBsAg、前S2蛋白、前S1蛋白及多聚人血清白蛋白受体。HBV前S1抗原(PreS1-Ag)主要存在于完整的Dane颗粒和管型颗粒表面，是由前S1基因编码的表面抗原蛋白成分之一，在HBV感染者血清中一般与HBsAg共同表达。PreS1-Ag可以与肝细胞表面受体特异性结合，是病毒进入肝细胞的关键蛋白；同时，PreS1-Ag蛋白位于HBV表面，具有高度的免疫性，介导宿主的免疫应答，在病毒与肝细胞结合、调节乙型肝炎病毒DNA合成、转化病毒与细胞基因表达活性、调节机体免疫、导致疾患等方面起作用，并在病毒装配、表现出传染性等过程中起着至关重要的作用。长期以来人们认为HBeAg阳性是HBV复制活跃的指标之一，但近年来国内外不少研究表明PreS1-Ag是病毒存在和复制的又一新指标，并且PreS1-Ag与HBV复制的检验金标准HBV-DNA的结果非常相近，同时印证了PreS1-Ag参与HBV的组装、复制和对肝细胞侵袭及与HBV颗粒体内存在有关。检测前S1抗原为双抗体夹心法，常见的检测方法有酶联免疫吸附法，放射免疫分析法，化学免疫分析发光法，但这些方法都存在一些不足之处。酶联免疫吸附法多采用手工操作，自动化程度低；操作步骤复杂且时间长；检测结果准确度和精密度较差，灵敏度低。放射免疫分析法，放射性污染大，操作复杂、实验耗时长，试剂盒保存时间短，检测结果不稳定、灵敏度低。化学发光免疫分析法常见的有板式化学发光法和磁微粒化学发光法。板式化学发光法与酶联免疫法相似，自动化程度低，多采用手工操作，检测结果由于人为因素导致的误差较大，灵敏度也较低；磁微粒化学发光法采用全自动仪器进行检测，自动化程度高，结果更稳定，但目前临床上使用的试剂盒普遍存在灵敏度偏低，低端分辨率不足的问题，而且多采用多点校准品定标，增加试剂检测成本和患者负担。在国内，前S1抗原检测在临床上主要以化学发光免疫分析法为主，但由于具有自主知识产权的国产前S1抗原检测试剂盒目前还比较少，而且灵敏度较低，试剂成本高，目前一般只在三甲医院有开展，在三甲以下医院开展较少，因此有待开发对前S1抗原检测灵敏度高、特异性好并且能降低检测成本的检测技术。
技术实现思路
本专利技术提供一种乙肝前S1抗原化学发光检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括缓冲液、磁微粒、生物素标记的抗乙肝前S1抗原单克隆抗体和多羟基醇；和所述试剂2包括缓冲液、吖啶酯标记的抗乙肝前S1抗原多克隆抗体和多羟基糖。在一些实施方式中，缓冲液是pH6.0～8.0、5mM～100mM的PBS缓冲液。在一些实施方式中，缓冲液可以是pH7.0～7.5、20mM～80mM的PBS缓冲液、20mM～60mM、20mM～40mM的PBS缓冲液。在一些实施方式中，所述试剂1包括缓冲液、0.2mg/mL～0.6mg/mL磁微粒、4μg/mL～12μg/mL生物素标记的抗乙肝前S1抗原单克隆抗体和5g/L～50g/L甘露醇或山梨糖醇；和所述试剂2包括缓冲液、2.0μg/mL～6.0μg/mL吖啶酯标记的抗乙肝前S1抗原多克隆抗体和5g/L～50g/L海藻糖或蔗糖。在一些实施方式中，可以是0.3mg/mL～0.5mg/mL磁微粒；可以是6μg/mL～10μg/mL生物素标记的抗乙肝前S1抗原多克隆抗体；和10g/L～40g/L甘露醇或山梨糖醇、20g/L～30g/L甘露醇或山梨糖醇。在一些实施方式中，所述试剂1还包括1g/L～50g/L牛血清白蛋白、5mL/L～20mL/L丙三醇、0.05mL/L～0.2mL/LTritonX-100、10mg/L～50mg/L4-氨基安替比林和0.5mL/L～5mL/Lproclin-300。在一些实施方式中，可以是5g/L～40g/L牛血清白蛋白、10g/L～30g/L牛血清白蛋白、15g/L～25g/L牛血清白蛋白；10mL/L～15mL/L丙三醇；0.1mL/L～0.2mL/LTritonX-100、0.15mL/L～0.2mL/LTritonX-100；20mg/L～40mg/L4-氨基安替比林、15mg/L～30mg/L4-氨基安替比林；和1mL/L～5mL/Lproclin-300、2mL/L～4mL/Lproclin-300。试剂中各组份是组合起来发挥作用，有效降低了试剂背景信号，提高了试剂的灵敏度、稳定性。在一些实施方式中，所述试剂2还包括1g/L～50g/L酪蛋白、5mL/L～20mL/L丙三醇、0.05mL/L～0.2mL/LTritonX-100、0.5mL/L～5mL/Lproclin-300和10mg/L～50mg/L4-氨基安替比林。在一些实施方式中，所述试剂2可以包括5g/L～10g/L酪蛋白、10g/L～15g/L酪蛋白、15g/L～20g/L酪蛋白；5mL/L～20mL/L丙三醇、5mL/L～100mL/L丙三醇、10mL/L～20mL/L丙三醇；0.05mL/L～0.2mL/LTritonX-100、0.05mL/L～0.1mL/LTritonX-100、0.1mL/L～0.2mL/LTritonX-100；0.5mL/L～5mL/Lproclin-300、0.5mL/L～1mL/Lproclin-300、1mL/L～2mL/Lproclin-300、2mL/L～4mL/Lproclin-300；和10mg/L～20mg/L4-氨基安替比林、20mg/L～30mg/L4-氨基安替比林、30mg/L～40mg/L4-氨基安替比林、40mg/L～50mg/L4-氨基安替比林。试剂中各组份是组合起来发挥作用，有效降低了试剂背景信号，提高了试剂的灵敏度、稳定性。在一些实施方式中，所述试剂2包括4.0μg/mL吖啶酯标记的抗乙肝前S1抗原多克隆抗体、20mMpH7.4PBS缓冲溶液、10g/L酪蛋白、10g/L海藻糖或蔗糖、10mL/L丙三醇、0.1mL/LTritonX-100、1mL/Lproclin-300和20mg/L4-氨基安替比林。在一些实施方式中，所述试剂盒还包括校准品，所述校准品包括PBS缓冲液、酪蛋白、海藻糖或蔗糖、丙三醇、吐温和proclin-300。在一些实施方式中，所述校准品包括0μg/mL或10μg/mL乙型肝炎病毒前S1抗原、5mM～100mM、pH6.0～8.0PBS缓冲溶液、5g/L～20g/L酪蛋白、5g/L～50g/L海藻糖或蔗糖、5mL/L～20mL/L丙三醇、0.1mL/L～1.0mL/L吐温和0.5mL/L～5mL/Lproclin-300。在一些实施方式中，可以是10g/L～20g/L酪蛋白、15g/L～20g/L酪蛋白；10g/L～40g/L海藻糖或蔗糖、20g/L～30g/L海藻糖或蔗糖；5mL/L～10mL/L丙三醇、10mL/L～20m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乙肝前S1抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括缓冲液、磁微粒、生物素标记的抗乙肝前S1抗原单克隆抗体和多羟基醇；和所述试剂2包括缓冲液、吖啶酯标记的抗乙肝前S1抗原多克隆抗体和多羟基糖。

【技术特征摘要】
1.一种乙肝前S1抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括缓冲液、磁微粒、生物素标记的抗乙肝前S1抗原单克隆抗体和多羟基醇；和所述试剂2包括缓冲液、吖啶酯标记的抗乙肝前S1抗原多克隆抗体和多羟基糖。2.根据权利要求1所述的乙肝前S1抗原化学发光检测试剂盒，所述缓冲液是pH6.0～8.0、5mM～100mM的PBS缓冲液。3.根据权利要求1所述的乙肝前S1抗原化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述试剂1包括0.2mg/mL～0.6mg/mL磁微粒、4μg/mL～12μg/mL生物素标记的抗乙肝前S1抗原单克隆抗体和5g/L～50g/L甘露醇或山梨糖醇；和所述试剂2包括2.0μg/mL～6.0μg/mL吖啶酯标记的抗乙肝前S1抗原多克隆抗体和5g/L～50g/L海藻糖或蔗糖。4.根据权利要求3所述的乙肝前S1抗原化学发光检测试剂盒，所述试剂1还包括1g/L～50g/L牛血清白蛋白、5mL/L～20mL/L丙三醇、0.05mL/L～0.2mL/LTritonX-100、10mg/L～50mg/L4-氨基安替比林和0.5mL/L～5mL/Lproclin-300；优选地所述试剂1包括0.4mg/mL磁微粒、8μg/mL抗乙肝前S1抗原单克隆抗体、20mMpH7.4PBS缓冲溶液、10g/L牛血清白蛋白、20g/L甘露醇或山梨糖醇、10mL/L丙三醇、0.1mL/LTritonX-100、20mg/L4-氨基安替比林和1mL/Lproclin-300。5.根据权利要求3所述的乙肝前S1抗原化学发光检测试剂盒，所述试剂2还包括1g/L～50g/L酪蛋白、5mL/L～20mL/L丙三醇、0.05mL/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊琦昊，赵燕莉，徐雨，田君喜，龙腾镶，
申请(专利权)人：迈克生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51