L7D8单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，公开一种L7D8单克隆抗体，所述抗体包括重链和轻链，所述重链由氨基酸序列SEQ ID No.1构成，所述轻链由氨基酸序列SEQ ID No.2构成。L7D8单克隆抗体能够特异性结合XI型胶原蛋白。本发明专利技术的L7D8单克隆抗体可以结合天然的XI型胶原蛋白，能够通过免疫组织化学、ELISA和WB等方法，去检测生物样本中(组织切片、尿液、血液)的天然XI型胶原蛋白。

L7D8 monoclonal antibody and its application

The invention relates to the field of genetic engineering technology, and discloses a L7D8 monoclonal antibody comprising a heavy chain and a light chain which are composed of an amino acid sequence SEQ ID No.1 and an amino acid sequence SEQ ID No.2. L7D8 monoclonal antibody can specifically bind to type XI collagen. The L7D8 monoclonal antibody of the invention can bind to the natural type XI collagen protein, and can detect the natural type XI collagen protein in biological samples (tissue section, urine, blood) by immunohistochemistry, ELISA and WB methods.

【技术实现步骤摘要】
L7D8单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及基因工程
，具体地说是一种L7D8单克隆抗体及其应用。
技术介绍
XI型胶原蛋白是关节软骨中的含量较少的蛋白，根据胶原软骨的成熟程度，其含量可介于3-10％。而II型胶原则是关节软骨中的主要成分，占总量的80-85％左右。XI型和II型胶原分子都是三螺旋结构。不同的是，XI型胶原蛋白是由三条不同的α链[α1(XI),α2(XI),α3(XI)]组成，而II型胶原是由三条相同的α链[α1(II)]组成的。其中α3(XI)与α1(II)是由同一个基因编码产生，具备相同的氨基酸序列，但α3(XI)具有更复杂的糖基化修饰。胶原纤维网络赋予软骨组织锁住蛋白聚糖的能力，从而为组织提供拉伸张力，是正常软骨发育的必要条件。软骨特异性胶原纤维由XI型、II型和IX型胶原微纤维混合构成，正常的软骨中含有两种不同粗细的胶原纤维——细胶原纤维和粗胶原纤维，它们的直径分别为20nm和40nm。研究表明，XI型胶原蛋白纤维只存在细胶原纤维中，细胶原纤维具备“4+10”模式，即2个XI型和2个II型胶原微纤维组成纤维中心部分，再被10个II型胶原微纤维围绕成的环形所包绕。XI胶原微纤维不仅对胶原基质稳定性有很重要的贡献作用，还具有介导正常的细胶原纤维形成的作用。有研究表明，编码α1(XI)链的基因缺陷小鼠(Cho/Cho小鼠)，以及编码α1(II)、α1(XI)或α2(XI)链的基因缺陷人群(人Stickler/Marshall综合征)均无法形成正常的细胶原纤维，表现出软骨发育异常的现象。目前只有CII、CI等胶原抗体(或产生针对CII/CI抗体的杂交瘤细胞)，如专利US9005912B2、EP3050899A1、US8394378B2，还未见有抗CXI的抗体公开。另外，XI型与II型胶原的结构和序列有一定的相似性，极有可能针对XI型胶原蛋白的抗体也会对II型胶原有一定的交叉反应，造成假阳性。现有技术中暂时还未发现有针对XI型胶原蛋白的单克隆抗体。因此，开发出一种能够特异性结合XI型胶原蛋白的L7D8单克隆抗体，是本领域技术人员亟需解决的技术问题。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种L7D8单克隆抗体及其应用。本专利技术为实现上述目的，采取以下技术方案予以实现：一种L7D8单克隆抗体，所述抗体包括重链和轻链，所述重链由氨基酸序列SEQIDNo.1构成，所述轻链由氨基酸序列SEQIDNo.2构成。其中，重链(IgG)的氨基酸序列SEQIDNO.1如下所示：TATGAACCTAGCCCTGATTTCCCCAGCCTTCAGTTCCCAGATTCAGTGATCAGCCTTGAACACAGACCTGTCACCATGAAGTTGTGGCTGAACTGGATTTTCCTTGTAACACTTTTAAATGGTATCCAGTGTGAGGTGAAACTGGTGGAGTCTGGAGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGTTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAACTTCTGGGTTCACCTTCACTGATTACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGCCTCCAGGAAAGGCACCTGAGTGGTTGGGTTTTATTAGAAACAAAGCTAAAGGTTACACAACAGAGTATAGTGCATCTGTGAAGGGTCGGTTCACCATCTCCAGAGATAATTCCCAAAACATCCTCTATCTTCAAATGAACACCCTGAGAGCTGAGGACAGTGCCACTTATTACTGTGCAAGAGCCCTATCAACTGGGAACCCCTTCTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAGCCAAAACAACAGCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTG轻链(Kappa)的氨基酸序列SEQIDNO.2如下所示：AAGCATCCTCTCTTCTAGCTCTCAGAGATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTGCTGCTGCTCTGGGTTCCAGGTTCCACTGGTGACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCCAAAGTGTCAGTACATCTAGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCGTCAGGTATGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATACTGCAACATATTACTGTCAGCACAGTTGGGAGATTCCTCCCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGATATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCC优选地，所述L7D8单克隆抗体特异性结合XI型胶原蛋白。优选地，所述XI型胶原蛋白为天然XI型胶原蛋白。优选地，所述L7D8单克隆抗体是小鼠抗体。所述的L7D8单克隆抗体应用于检测XI型胶原蛋白，能够特异性结合XI型胶原蛋白，避免假阳性的现象出现，特异性高。L7D8单克隆抗体应用于检测XI型胶原蛋白的检测方法是常规的，如通过ELISA或Westernblot方法来检测。与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：本专利技术的L7D8单克隆抗体是针对XI型胶原蛋白有特异性的抗体，能够特异性地结合XI型胶原蛋白，从而可用于检测XI型胶原蛋白，特异性高。本专利技术的L7D8单克隆抗体可以结合天然的XI型胶原蛋白，可以通过免疫组织化学、ELISA和WB等方法，去检测生物样本中(组织切片、尿液、血液)的天然XI型胶原蛋白。附图说明图1是实施例2中L7D8单克隆抗体与天然或变性的rCII、rCXI、bCXI的结合情况示意图；图2是实施例3中L7D8单克隆抗体在体内或体外与软骨组织结合的示意图；其中，A为L7D8单克隆抗体在体内与软骨组织结合的示意图，B为L7D8单克隆抗体在体外与软骨组织结合的示意图，软骨表面的阳性染色用白色箭头指示；图3是实施例4中CII免疫小鼠的血清抗体反应示意图；图4是实施例4中CXI免疫小鼠的血清抗体反应示意图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述，但需要说明的是，实施例并不对本专利技术要求保护范围的构成限制。实施例1：L7D8单克隆抗体的获得L7D8单克隆抗体是基于PEG方法的B细胞杂交瘤技术制得的，具体步骤如下：(1)将100μgXI型胶原蛋白(CXI)与等体积的CFA混合成乳剂，第0天，在8-10周龄雄性DBA/1J小鼠尾根部皮内注射进行免疫。(2)第21天采血，用ELISA方法检测小鼠体内的CXI抗体。抗体滴度高的小鼠在第21天接受加强免疫，即50μgCXI与等体积的IFA混合成乳剂，在小鼠尾根部进行皮内注射。加强免疫三天后取淋巴结做细胞融合。(3)高压10gPEG-1500，用无任何添加的DMEM培养基趁热配制40％PEG溶液，加入两滴NaHCO3调节pH至7.4左右。(4)提前一周复苏NSO-bcl2骨髓瘤细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种L7D8单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包括重链和轻链，所述重链由氨基酸序列SEQ ID NO.1构成，所述轻链由氨基酸序列SEQ ID NO.2构成。

【技术特征摘要】
1.一种L7D8单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包括重链和轻链，所述重链由氨基酸序列SEQIDNO.1构成，所述轻链由氨基酸序列SEQIDNO.2构成。2.根据权利要求1所述的一种L7D8单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性结合XI型胶原...

【专利技术属性】
技术研发人员：童冬梅，
申请(专利权)人：东莞光极生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44