使用双特异性蛋白质复合物的方法技术

本发明专利技术涉及通过使用式A‑X:Y‑B的异二聚系连的双特异性蛋白质复合物来控制和定向细胞以例如以刺激免疫应答、抑制免疫应答、定向组织再生或防止组织损伤以用于治疗活动的方法。组分A可以将X呈现在细胞表面上，可以结合效应细胞表面上表达的蛋白质(包括标志物)，或A‑X在表达效应细胞上表达，而B对靶细胞或目标组织上的表位具有特异性。X:Y是由X和Y之间的结合相互作用形成的异二聚系链，其与A和B一起帮助和影响所选细胞的控制和定向。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用双特异性蛋白质复合物的方法专利
本公开内容涉及控制和定向细胞例如以刺激免疫应答、抑制免疫应答或定向组织再生以用于治疗活动的方法。
技术介绍
双特异性抗体可用于体内重定向患者细胞：这已被广泛用于靶向癌症中的T细胞(Muller等BioDrugs(2010)：24,89-98)。由于产生这些分子的复杂性，这在很大程度上局限于几种组合。用于体内重定向细胞的另一种方法是用嵌合抗原受体(CAR-T细胞)转导T细胞，然后将这些细胞转移到患者体内(Nat.Revs.DrugDisc.2015.14.499-509)。产生最佳构建体的复杂性和严重副作用的范围限制了其应用于诸如癌症的严重疾病。仍然需要能够以模块化的方式灵活地产生许多不同的分子和选项以通过多种机制重新定向细胞，该机制为例如：1)将靶向和信号传导分子转导至过继转移的细胞，如CAR-T方法；2)单独将靶向分子转导至过继转移的细胞；和3)体内靶向细胞如双特异性抗体方法。还使用了模块化双特异性抗体方法(包含两个单链Fv)，其具有对T细胞上的CD3具有特异性的一个结合结构域和对肽E5B9具有特异性的另一个结合结构域。E5B9特异性scFv用于本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.使用式A‑X:Y‑B的异二聚系连的双特异性蛋白质复合物的方法，其中：A‑X是第一融合蛋白；Y‑B是第二融合蛋白；X:Y是异二聚系链；：是X和Y之间的结合相互作用；A是双特异性蛋白质复合物的第一蛋白质组分，其选自抗体或其结合片段、蛋白质配体、细胞表面蛋白的一种或多种组分或其复合物或其组合；B是双特异性蛋白质复合物的第二蛋白质组分，其选自抗体或结合片段或抗原(包括例如蛋白质配体)，X是结合对的第一结合配偶体，其独立地选自抗原或抗体或其结合片段；和Y是结合对的第二结合配偶体，其独立地选自抗原或抗体或其结合片段；其中A呈现细胞表面上的X，并且B对靶细胞或目标组织上的表位具有特异性，条件是当X是抗原...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.03 GB 1521389.51.使用式A-X:Y-B的异二聚系连的双特异性蛋白质复合物的方法，其中：A-X是第一融合蛋白；Y-B是第二融合蛋白；X:Y是异二聚系链；：是X和Y之间的结合相互作用；A是双特异性蛋白质复合物的第一蛋白质组分，其选自抗体或其结合片段、蛋白质配体、细胞表面蛋白的一种或多种组分或其复合物或其组合；B是双特异性蛋白质复合物的第二蛋白质组分，其选自抗体或结合片段或抗原(包括例如蛋白质配体)，X是结合对的第一结合配偶体，其独立地选自抗原或抗体或其结合片段；和Y是结合对的第二结合配偶体，其独立地选自抗原或抗体或其结合片段；其中A呈现细胞表面上的X，并且B对靶细胞或目标组织上的表位具有特异性，条件是当X是抗原时，Y是对由X代表的抗原具有特异性的抗体或其结合片段，并且当Y是抗原时，X是对由Y代表的抗原具有特异性的抗体或其结合片段，所述方法包括将以下引入至细胞群体的步骤：i.未复合形式的融合蛋白A-X和B-Y的组合，或ii.异二聚系连的双特异性蛋白质复合物形式的A-X:Y-B。2.使用式A-X:Y-B的异二聚系连的双特异性蛋白质复合物的方法，其中：A-X是第一融合蛋白；Y-B是第二融合蛋白；X:Y是异二聚系链；：是X和Y之间的结合相互作用；A是双特异性蛋白质复合物的第一蛋白质组分，其包含跨膜结构域并且任选地还包含间隔子区，其优选在N端，和/或C端细胞内信号传导区；B是双特异性蛋白质复合物的第二蛋白质组分，其选自抗体或结合片段或抗原(包括例如蛋白质配体)，X是结合对的第一结合配偶体，其独立地选自抗原或抗体或其结合片段；和Y是结合对的第二结合配偶体，其独立地选自抗原或抗体或其结合片段；其中A-X在效应细胞的表面上表达，并且B特异性结合靶细胞，条件是当X是抗原时，Y是对由X代表的抗原具有特异性的抗体或其结合片段，并且当Y是抗原时，X是对由Y代表的抗原具有特异性的抗体或其结合片段，所述方法包括将以下引入至细胞群体的步骤：i.未复合形式的融合蛋白A-X和B-Y的组合，或ii.异二聚系连的双特异性蛋白质复合物形式的A-X:Y-B，或iii.编码融合蛋白A-X的核酸和任选编码融合蛋白B-Y的核酸，或iv.融合蛋白B-Y和编码融合蛋白A-X的核酸，或v.表达A-X和融合蛋白B-Y的效应细胞，其中X呈现在细胞表面。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中X或Y中的一个是全长抗体、Fab片段、Fab’片段、sdAb或scFv，并且另一个是抗原，例如肽。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中X或Y对肽GCN4或其片段(SEQIDNO：1或SEQIDNO：1的氨基酸1-38，或SEQIDNO：76至98)具有特异性。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中X或Y是scFv或VHH。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述scFv是52SR4(SEQIDNO：3或SEQIDNO：3的氨基酸1-243或SEQIDNO.99-100)。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中如X和Y中定义的抗原是肽。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述肽的长度在5至25个氨基酸的范围内。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中X或Y的抗原(和肽)是非哺乳动物的。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中X或Y的抗原(和肽)具有低免疫原性。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中X或Y是肽GCN4或其片段(SEQIDNO：1或SEQIDNO：1的氨基酸1-38或SEQIDNO：76至98)。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中X和Y之间的结合亲和力为5nM或更强。13.根据权利要求12所述的方法，其中X和Y之间的结合亲和力为900pM或更强，例如800、700、600、500、400或300pM。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中通过用A-X转染效应细胞使得至少X在所述细胞的表面上表达来表达A-X。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域是天然的或来自合成来源，例如其中天然来源是膜结合蛋白、跨膜蛋白或其功能片段。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述跨膜结构域包含选自含有以下的组的蛋白质的跨膜区：T细胞受体的α、β链或β链，CD28，CD3ε，CD45，CD4，CD5，CD8，CD9，CD16，CD22，CD33，CD37，CD64，CD80，CD86，CD134，CD137，ICOS和CD154。17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中A包含(或进一步包含)间隔子结构域。18.根据权利要求17所述的方法，其中间隔子结构域来自在细胞上天然表达的蛋白质，例如表面表达的免疫球蛋白。19.根据权利要求18所述的方法，其中间隔子包含选自以下的蛋白的间隔子结构域：CD28，CD4，CD8，MHC，人IgG1的铰链、CH2和CH3区以及与人CD28的胞外结构域组合的人IgG1的铰链区。20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中A可操作地连接至细胞内信号传导结构域。21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中A不连接至细胞内信号传导结构域。22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，所述效应细胞是能够发生细胞应答的细胞，例如能够释放可溶性分子如免疫球蛋白、细胞因子或趋化因子。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述细胞应答是吞噬作用、细胞毒性和/或抗体和/或细胞因子的产生。24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中在其上表达A-X的效应细胞是B细胞，NK细胞，T细胞，单核细胞，巨噬细胞，树突细胞，肥大细胞，嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞或嗜碱性粒细胞，优选B细胞，NK细胞或T细胞。25.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中在其上表达A-X的效应细胞跨越血脑屏障，其中B结合中枢神经系统表达的靶标，例如α-突触核蛋白，Tau异形体，Aβ淀粉样蛋白，β分泌酶，γ分泌酶，TDP43，超氧化物歧化酶SOD1，朊病毒蛋白或亨廷顿蛋白。26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中B是全长抗体、Fab片段、Fab’片段、sdAb或scFv。27.根据权利要求26所述的方法，其中B是Fab或Fab'片段，例如Fab片段。28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中靶细胞是具有异常功能的靶细胞，例如与疾病或病理相关的异常功能。29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中所述靶细胞是与疾病例如癌症、自身免疫、感染、变性、神经变性或神经炎症相关的细胞。30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，其中B对靶细胞上的细胞表面标志物是特异性的，所述标志物选自稳定表达的细胞谱系标志物和稳定表达于非谱系细胞上的标志物。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述靶细胞上的细胞表面标志物是肿瘤抗原，例如选自erbB-2，CEA，NCAM，GD2，CD33，CD44，CD70，EpCAM，CD19，CD20，KDR，Tag-72。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述靶细胞上的细胞表面标志物是HER受体，例如HER1、2、3或4。33.根据权利要求32所述的方法，其中所述靶细胞是T细胞或B细胞，并且细胞标志物是B细胞标志物或T细胞标志物。34.根据权利要求33所述的方法，其中所述B细胞标志物选自CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD27，CD35，CD38，CD40，CD45(全部或特定异形体)，CD43，CD81，CD138，CXCR4，BCMA和IL-6R，例如CD38，CD138，CD45，CD27，CD19或CD20，例如CD38或CD138。35.根据权利要求34所述的方法，其中所述B细胞标志物处于抗体轻链的恒定区或抗体重链的恒定区中，其表达为细胞表面上免疫球蛋白的一部分。36.根据权利要求35所述的方法，其中所述标志物对选自IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA1，IgA2，IgE，IgM及其片段的抗体同种型是特异性的。37.根据权利要求33所述的方法，其中所述标志物是T细胞标志物并且选自CD2，CD3，CD4，CD5，CD6，CD7，CD8，CD25，CD127，CD196(CCR6)，CD197(CCR7)，CD62L，CD69和CD45。38.根据权利要求1至37中任一项所述的方法，其中X任选经由接头与所述蛋白质组分A的N端或C端融合。39.根据权利要求1至38中任一项所述的方法，其中Y任选经由接头与所述蛋白质组分B的C端融合。40.根据权利要求39所述的方法，其中Y任选经由接头融合至抗体或其结合片段的重链的C端。41.根据权利要求1至40中任一项所述的方法，其中所述方法包括表达A-X的效应细胞的过继性细胞转移或植入，其中X被呈现在所述细胞的表面上。42.根据权利要求1至41中任一项所述的方法，其中：i.首先施用表达A-X的效应细胞；或ii.首先施用融合蛋白B-Y。43.根据权利要求42所述的方法，其中：i.首先施用表达A-X的效应细胞，随后施用融合蛋白B-Y；或ii.首...

【专利技术属性】
技术研发人员：H·M·芬尼，
申请(专利权)人：UCB生物制药私人有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE