组合物及含有该组合物的培养基制造技术

本发明专利技术涉及微生物培养领域，特别涉及组合物及含有该组合物的培养基。本发明专利技术提供组合物及含有该组合物的保存培养基包括牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、Na2HPO4、蛋白胨和NaCl。通过构成成分、缓冲体系以及细胞保护剂的配比，从而可以在不同低温条件下极大地提高幽门螺杆菌的保存时间，有效解决了对幽门螺杆菌菌株长期保存的问题，特别适合幽门螺杆菌专业菌种库对长时间菌种保存的需要。

Composition and medium containing the same

The invention relates to the field of microorganism culture, in particular to the composition and the medium containing the composition. The present invention provides a composition and a preservation medium containing the composition, including bovine heart extract, bovine brain extract, cysteine, Na2HPO4, peptone and NaCl. The preservation time of Helicobacter pylori can be greatly improved under different low temperature conditions through the composition, buffer system and the proportion of cytoprotective agents. The problem of long-term preservation of Helicobacter pylori strains can be effectively solved, especially for the need of long-term preservation of Helicobacter pylori specialized strain bank.

【技术实现步骤摘要】
组合物及含有该组合物的培养基
本专利技术涉及微生物培养领域，特别涉及组合物及含有该组合物的培养基。
技术介绍
幽门螺杆菌或幽门螺旋菌，英文名Helicobacterpylori，简称Hp。是革兰氏阴性、微需氧的细菌，生存于胃部及十二指肠的各区域内。它会引起胃黏膜轻微的慢性发炎，甚或导致胃及十二指肠溃疡与胃癌。幽门螺杆菌病是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的细菌。1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检组织中分离成功，是目前所知能够在人胃中生存的惟一微生物种类。流行病学分析显示，世界范围内约有高达50％～70％的感染率。慢性活动性胃炎HP检出率为92.43％，十二指肠溃疡中检出率为89.47％，胃溃疡检出率为83.35％，胃癌中检出率为58.99％。可见，幽门螺杆菌感染是慢性胃炎的主要原因。同时长期的HP感染还会引发严重的萎缩性胃炎、伴随性肠上皮化生，严重的还能导致胃癌。菌种作为一项重要的生物资源对微生物的研究必不可少。菌种的保存方法因微生物的不同而异。目前，幽门螺杆菌的检测方法主要为C13呼气试验、细菌培养、免疫印迹、Elisa、蛋白芯片、PCR检测、快速尿素酶试验、病理涂片、组织学检测、血清HP抗体检测等。上述检测方法中，除C13呼气试验外，无一例外都需要幽门螺杆菌菌种作为原辅材料制备相应试剂盒。随着对幽门螺杆菌研究的深入，对幽门螺杆菌菌株的长久、稳定保存显得尤为关键。幽门螺旋杆菌是一种定植于胃粘膜的革兰氏阴性菌，对营养及培养条件要求苛刻。目前幽门螺旋杆菌菌株保存的最大问题是保存时间不长，复苏率低的问题。幽门螺杆菌冻存培养基主要有布氏肉汤、大豆胨肉汤、灭活血清几种。这几种保存培养基冻存时间都不超过两年。因此，提供一种保存时间长、复苏率高的幽门螺杆菌的培养基具有重要的现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种组合物及含有该组合物的培养基。该培养基可以在不同低温条件下极大地提高幽门螺杆菌的保存时间，有效解决了对幽门螺杆菌菌株长期保存的问题为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种组合物，包括牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、Na2HPO4、蛋白胨和NaCl。在本专利技术的一些具体实施方案中，以mL/mL/g/g/g/g计，所述组合物中牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、Na2HPO4、蛋白胨和NaCl的比例为250:200:(1～5):(10～12):(4～8):(0.5～3)。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物包括如下组分：在本专利技术的一些具体实施方案中，以mL/mL/g/g/g/g计，所述组合物中牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、Na2HPO4、蛋白胨和NaCl的比例为250:200:2:10:5:1。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物包括如下组分：本专利技术还提供了所述的组合物在制备菌种培养基的应用。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述菌种为幽门螺杆菌。本专利技术还提供了一种幽门螺杆菌的培养基，1L所述培养基中包括如下组分：在本专利技术的一些具体实施方案中，1L所述培养基中包括如下组分：本专利技术还提供了所述培养基的制备方法，取配方量的组分加热溶解，过滤，调整pH值，灭菌。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述pH值为7.2±0.1。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述灭菌的温度为121℃，所述灭菌的时间为20min。本专利技术提供组合物及含有该组合物的保存培养基包括牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、Na2HPO4、蛋白胨和NaCl。通过构成成分、缓冲体系以及细胞保护剂的配比，从而可以在不同低温条件下极大地提高幽门螺杆菌的保存时间，有效解决了对幽门螺杆菌菌株长期保存的问题，特别适合幽门螺杆菌专业菌种库对长时间菌种保存的需要。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示﹣80℃冻存五年复苏镜检图；图2示﹣40℃冻存三年复苏镜检图。具体实施方式本专利技术公开了一种组合物及含有该组合物的培养基，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本专利技术的保存培养基配方解决了幽门螺杆菌菌株在常规保存液保存时间短的问题，使得菌株在-80℃保存五年、-40℃保存三年的情况下，复苏率为100％。保存时间的增长可减少细菌因传代培养而引起的遗传变异和形态改变从而避免细菌出现衰老或恶性转化，使菌株能更好的保持原始性状。本专利技术提供的组合物及含有该组合物的培养基中所用原料、辅料及试剂均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例1配方：混合之后，加热溶解，然后用滤纸过滤，调整pH值到7.2，于高压蒸汽灭菌锅内高压灭菌，121℃灭菌20min。实施例2配方：混合之后，加热溶解，然后用滤纸过滤，调整pH值到7.3，于高压蒸汽灭菌锅内高压灭菌，121℃灭菌20min。实施例3配方：混合之后，加热溶解，然后用滤纸过滤，调整pH值到7.1，于高压蒸汽灭菌锅内高压灭菌，121℃灭菌20min。实施例4在生物安全柜里，向已灭菌的实施例1～实施例3制得的保存培养基加入甘油，使其终浓度为20％。在每个HP分离培养基里加入2ml混有甘油的实施例1～实施例3制得的保存培养基，经无菌L型棒扫刮均匀，每个冻存管吸取0.2ml混有幽门螺杆菌的保存培养基，共分装300管。在-80℃和-40℃冰箱里各放入150管冻存管，标记清晰。之后每隔一年取其中30管检测，检测结果如表1：表1实验表明，用本专利技术实施例1～实施例3制得的保存培养基保存幽门螺杆菌，在-80℃的条件下，五年内复苏存活率达100％；在-40℃的条件下，三年内复苏率达100％，五年内复苏率为40％。大大延长了幽门螺杆菌的保存时间，染色镜检，镜下染色、形态特征均同细菌的原始特征一致(见图1～2)，生化反应符合。对比例1按照实施例4的试验方法，分别用布氏肉汤、大豆胨肉汤、灭活血清替换本专利技术实施例1～3制得的培养基，对应三种培养基共分装900管，分别在-80℃和-40℃冰箱里各放入150管冻存管，标记清晰。之后每隔一年取其中30管检测，检测结果如表2：表2布氏肉汤表3大豆胨肉汤表4灭活血清实验表明，分别用布氏肉汤、大豆胨肉汤、灭活血清保存幽门螺杆菌，在-80℃的条件下，两年内复苏存活率即为0％；在-40℃的条件下，两年内复苏存活率即为0％。复苏存活率极显著(P＜0.01)差于本专利技术提供的培养基。以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物，其特征在于，包括牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、Na2HPO4、蛋白胨和NaCl。

【技术特征摘要】
1.一种组合物，其特征在于，包括牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、Na2HPO4、蛋白胨和NaCl。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，以mL/mL/g/g/g/g计，所述组合物中牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、Na2HPO4、蛋白胨和NaCl的比例为250:200:(1～5):(10～12):(4～8):(0.5～3)。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，以mL/mL/g/g/g/g计，所述组合物中牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、Na2HPO4、蛋白胨和NaCl的比例为250:200:2:10:5:1。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洪涛，马伟民，张永顶，林骏，刘尧，刘谦，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44